[发明专利]阿苯达唑–2–氨基砜残留检测单克隆抗体及制备方法和应用有效
申请号: | 201210049837.6 | 申请日: | 2012-02-29 |
公开(公告)号: | CN103288964A | 公开(公告)日: | 2013-09-11 |
发明(设计)人: | 袁宗辉;蒋能辉;彭大鹏;王玉莲;黄玲利;陈冬梅;陶燕飞;戴梦红;刘振利 | 申请(专利权)人: | 华中农业大学 |
主分类号: | C07K16/44 | 分类号: | C07K16/44;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/543;C12R1/91 |
代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人: | 王敏锋 |
地址: | 430070 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 阿苯达唑 氨基 残留 检测 单克隆抗体 制备 方法 应用 | ||
1.一种能识别阿苯达唑-2-氨基砜的单克隆抗体,其特征在于,杂交瘤细胞GA/2A11,CCTCC,NO:C201142。
2.权利要求1所述的一种能识别阿苯达唑残留标示物阿苯达唑-2-氨基砜的单克隆抗体的制备方法,其步骤是:
(1)将半抗原阿苯达唑-2-氨基砜与牛血清白蛋白偶联得到免疫原;
(2)将半抗原阿苯达唑-2-氨基砜与卵清蛋白偶联得到包被原;
(3)利用步骤(1)的免疫原制备得到杂交瘤细胞株GA/2A11所分泌的单克隆抗体;
(4)用步骤(2)的包被原包被固相载体;
(5)将待测样品用乙酸乙酯在氢氧化钾或碳酸钠溶液等碱化条件下提取、氮气吹干、正己烷净化和样品稀释液重新溶解得到待测物;
(6)对步骤(5)的待测物进行酶联免疫检测;
步骤(5)样品稀释液的组分及配比为:NaCl 8.00g,KH2PO4 0.20g,Na2HPO4·12H2O 2.90g,KCl 0.20g,加双蒸水定容至1000mL。
3.权利要求1所述的一种能识别阿苯达唑残留标示物阿苯达唑-2-氨基砜的单克隆抗体的试剂盒,该试剂盒包括:
(1)包被有包被原ABZSO2NH2-GA-OVA的酶标板;
(2)ABZSO2NH2标准品溶液6瓶,浓度分别为0、20、40、80、160、320μg/L;
(3)GA/2A11细胞株单克隆抗体工作液;
(4)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体工作液;
(5)浓缩磷酸盐缓冲液:NaCl 80.00g,KH2PO4 2.00g,Na2HPO4·12H2O 29.00g,KCl 2.00g,加双蒸水至1000mL;
(6)浓缩洗涤液:NaCl 80.00g,KH2PO4 2.00g,Na2HPO4·12H2O 29.00g,KCl 2.00g,Tween205mL,加双蒸水至1000mL;
(7)底物混合液:准确吸取底物B液10mL,加入100μL底物A液,混匀;
(9)终止液:2mol/L硫酸溶液。
4.根据权利要求3所述的一种能识别阿苯达唑残留标示物阿苯达唑-2-氨基砜的试剂盒,其特征在于:所述的一种酶标板的制备方法,其步骤是:
(1)包被:用碳酸盐缓冲液将ABZSO2NH2-GA-OVA稀释成0.25μg/mL包被原溶液,吸取100μL包被原溶液于各酶标孔,水平放置于湿盒,4℃孵育12h;
(2)洗板:甩出酶标板内包被原溶液,拍干,吸取250μL洗涤液于各酶标孔,静置30s后,甩出洗涤液,在吸水纸上拍干;重复洗涤3次;
(3)封闭:吸取250μL封闭液于各酶标孔,水平置于湿盒内,37℃培养箱孵育2h;
(4)洗板:甩出封闭液,吸取250μL洗涤液于各酶标孔,静置30s后,甩出洗涤液,在吸水纸上拍干;重复洗涤3次;
(5)烘干:在吸水纸上拍干后;将酶标板于37℃培养箱中倒置烘干0.5h;
(6)封装:酶标板烘干后和干燥剂一起装入铝箔袋,用真空封装机封装。
5.权利要求1所述的一种能识别阿苯达唑残留标示物阿苯达唑-2-氨基砜的试剂盒在检测动物可食性组织中阿苯达唑-2-氨基砜残留中的应用。
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- 本发明公开了一种结合至喹硫平的抗体,该抗体可用于检测样品中的喹硫平,诸如在竞争性免疫测定方法中。该抗体可用于喹硫平的床旁检测所使用的侧流测定装置中,包括在单个侧流测定装置中的阿立哌唑、奥氮平、喹硫平和利培酮的多重检测。
- 维生素D测定法中对维生素D差向异构体特异性的结合配偶体-201580034559.9
- 魏铁全;李婕;M.沙马;滕铸 - 西门子医疗保健诊断公司
- 2015-06-22 - 2019-01-29 - C07K16/44
- 方法包括测定怀疑含有维生素D分析物的样品中的维生素D分析物的量。在测定介质中提供组合,其包括样品、对维生素D分析物的差向异构体特异性的维生素D差向异构体抗体(其中所述维生素D差向异构体抗体不在任何可检测的程度上结合维生素D分析物)和对维生素D分析物特异性的维生素D抗体。在维生素D差向异构体抗体与维生素D分析物的差向异构体结合以及维生素D抗体与维生素D分析物结合的条件下孵育测定介质以形成维生素D抗体结合的复合物。测定维生素D抗体结合复合物的量,并与样品中的维生素D分析物的量关联。
- 杂交瘤细胞株F3A2,其产生的单克隆抗体及应用-201510220710.X
- 刘凤权;王利民;蔡佳 - 江苏省农业科学院
- 2015-04-28 - 2019-01-08 - C07K16/44
- 本发明涉及用于检测有机磷农药甲基对硫磷的单克隆抗体及其应用。本发明提供的杂交瘤细胞株F3A2可以用于制备高效识别甲基对硫磷的单克隆抗体,采用鼠腹水抗体酶联免疫吸附分析法测得的效价为1.2×104。该抗甲基对硫磷单克隆抗体灵敏度高,对甲基对硫磷的50%抑制浓度(IC50)为21.2ng/mL,与甲基对硫磷结构类似的农药如杀螟硫磷、水胺硫磷、甲基毒死蜱、辛硫磷等有机磷农药的交叉反应率均小于0.1%,可用于有机磷农药甲基对硫磷残留的快速检测。
- 一种高特异性苯醚甲环唑多克隆抗体的制备方法-201510823454.3
- 刘冰;冯久慧;王硕 - 天津科技大学
- 2015-11-23 - 2019-01-08 - C07K16/44
- 本发明提供了一种高特异性苯醚甲环唑多克隆抗体的制备方法,属于免疫分析技术。所述多克隆抗体是由苯醚甲环唑半抗原与载体蛋白结合,免疫动物制成,所述苯醚甲环唑半抗原由3,4′‑二氯二苯醚和溴代乙酰氯反应制得中间体,然后连接4‑氨基丁酸制成。本发明制备的苯醚甲环唑多克隆抗体具有较高的特异性,填补了苯醚甲环唑高特异性多克隆抗体制备研究方向的空白。
- 一种25-羟基维生素D3的抗体制备方法-201811149789.1
- 唐静;田青青;陈星星;周义正 - 宁波奥丞生物科技有限公司
- 2018-09-29 - 2019-01-04 - C07K16/44
- 本发明公开了一种25‑羟基维生素D3的抗体制备方法,包括人工抗原制备、动物免疫及脾细胞制备、骨髓瘤细胞的制备、饲养细胞的制备、细胞融合、杂交瘤细胞筛选和亚克隆、25‑羟基维生素D3单克隆抗体纯化等步骤,由于25‑羟基维生素D3本身的分子量太小,不具有免疫原性,本发明将25‑羟基维生素D3偶联卵清白蛋白获得25‑羟基维生素D3人工抗原,所制备的25‑羟基维生素D3单克隆抗体具有效价高、亲和力好,与25‑羟基维生素D3抗原结合力强等优点,可用于免疫荧光、酶联免疫或磁微粒免疫技术等来定性或定量检测人体中25‑羟基维生素D3表达水平,临床辅助预防及治疗佝偻病、骨软化病和婴儿手足搐搦症。
- 专利分类