[发明专利]提高药物/基因肿瘤靶向性和转染效率的多肽载体及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高药物/基因靶向性和转染效率的多肽载体及用途。

背景技术

近年来，恶性肿瘤已经成为最常见的发病和死亡原因之一，全世界每年新增病例1000多万，最新的世界卫生组织报告称其中20％发生在中国。传统的抗癌化疗药物缺乏靶向性，在杀死癌细胞的同时也导致正常细胞死亡，毒副作用大，使患者的生存质量严重下降。因此研制高效且具有靶向性的基因/药物载体在恶性肿瘤的治疗中有着至关重要的作用。

细胞穿膜肽(Cell-penetrating peptides，CPPs)是一类具有细胞穿透功能的短肽(少于30个氨基酸)，能够有效地将蛋白质、多肽、核酸片段等以多种方式导入多种哺乳动物细胞，其转导效率高且不会造成细胞损伤，是一种良好的基因/药物载体。其中，MPGp(由M.C.Morris，P.vidal，G.Divita最先公开发表，并以三人名字的首字母命名的多肽)就是一种高效安全的细胞穿膜肽，它由人自身免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的gp41蛋白的融合蛋白结构域和猿猴空泡病毒(simian vacuolating virus 40，SV40)大T抗原的核定位序列(nuclear localization sequence，NLS)区域组成。MPGp含有较多的碱性氨基酸，可与带负电荷的DNA或RNA通过静电作用形成纳米级颗粒，并保护其免受核酸酶的降解。MPG^ΔNLSp通过将MPGp的NLS区域中一个氨基酸进行突变(序列为GALFLGFLGAAGSTMGAWSQ PKSKRKV)，从而使其携带的DNA或RNA在细胞质中大量释放，因此适合作为siRNA递送载体。由于MPG^ΔNLSp为直接穿膜进入细胞而非依赖受体，因此缺乏组织细胞靶向性。

提高载体肿瘤靶向性的主要策略是用对肿瘤细胞具有特异性识别的分子对载体进行修饰，使其对肿瘤细胞具有更高的选择性并借此提高肿瘤细胞对基因/药物的摄入。研究发现，促黄体生成素释放激素受体(luteinizing hormone-releasing hormone receptor，LHRHR)在肝癌及多数性激素依赖肿瘤如乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等细胞膜上过量表达，明显高于在相应组织正常细胞膜上的表达，且在正常的肝、肾、脾、心、肺、脑、胸腺和骨骼肌组织的细胞膜上未有可检测到的表达。促黄体生成素释放激素(LHRHp)是由10个氨基酸组成的短肽(序列：EHWSYGLRPG)。已有体外细胞实验证明，LHRHp修饰可明显提高所载药物对乳腺癌、卵巢癌细胞的靶向性。

鉴于以上讨论的问题，期望提供一种针对肿瘤的具有靶向性且高效的载体。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的基因/药物载体靶向性差及转染效率低的难题，提供一种提高药物/基因肿瘤靶向性和转染效率的多肽载体。

本发明的第二个目的是提供一种提高药物/基因肿瘤靶向性和转染效率的多肽载体的用途。

本发明的技术方案概述如下：

一种提高药物/基因肿瘤靶向性和转染效率的多肽载体，所述多肽载体具有式(I)的结构：

LHRHp-MPG^ΔNLSp(I)

所述多肽载体的氨基酸序列是序列表SEQ ID NO.3所示。

所述LHRHp的氨基酸序列是序列表SEQ ID NO.1所示；所述MPG^ΔNLSp的氨基酸序列是序列表SEQ ID NO.2所示。

上述多肽载体的用途。

与现有技术相比，本发明的优点如下：

本发明涉及的一种提高药物/基因的靶向性和转染效率的多肽载体，其带有大量的正电荷，具有良好的水溶性，具有很强的针对性激素依赖性肿瘤及肝癌的靶向性，可直接携带带负电荷的核酸或药物并介导其进入细胞，也可修饰其它基因或药物载体提高其肿瘤靶向性和转染效率。为基因/药物输送提供了一种新型载体。

附图说明

图1.多肽载siRNA复合物粒径变化情况。

图2.细胞转染siRNA48小时后进行RT-PCR后琼脂糖凝胶电泳结果。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种提高药物/基因肿瘤靶向性和转染效率的多肽载体，所述多肽载体具有式(I)的结构：

LHRHp-MPG^ΔNLSp(I)