[发明专利]经修饰的β-内酰胺酶及其相关方法和应用有效
申请号: | 201180035810.5 | 申请日: | 2011-05-17 |
公开(公告)号: | CN103038341A | 公开(公告)日: | 2013-04-10 |
发明(设计)人: | P·科斯基;U·艾尔阿克辛;K·卡里马基 | 申请(专利权)人: | 普维阿布公司 |
主分类号: | C12N9/86 | 分类号: | C12N9/86;C12N15/55;C12N15/75;A61K38/46;C12N1/21;A61P1/12 |
代理公司: | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人: | 丁香兰;庞东成 |
地址: | 美国马*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 修饰 内酰胺 及其 相关 方法 应用 | ||
1.一种β-内酰胺酶或其变体或片段,所述β-内酰胺酶包含与SEQ ID NO:1具有至少60%序列同一性的氨基酸序列,并且在SEQ ID NO:1的与Ambler分类第276位对应的位置处具有亲水性氨基酸残基。
2.一种修饰β-内酰胺酶的方法,所述β-内酰胺酶包含与SEQ ID NO:1具有至少60%序列同一性的氨基酸序列,所述方法的特征在于,用亲水性氨基酸置换所述β-内酰胺酶在SEQ ID NO:1的与Ambler分类第276位对应的位置处的氨基酸。
3.如权利要求1所述的β-内酰胺酶或其变体或片段或者如权利要求2所述的方法,其中,所述β-内酰胺酶包含与SEQ ID NO:1具有至少68%序列同一性的氨基酸序列,所述β-内酰胺酶或其变体或片段具有β-内酰胺酶活性并且在与Ambler分类第276位对应的位置处包含除天冬氨酸(D)之外的亲水性氨基酸残基。
4.如权利要求1所述的β-内酰胺酶或如权利要求2所述的方法,其中所述β-内酰胺酶包含与SEQ ID NO:1具有至少60%序列同一性的氨基酸序列,并且其中在与Ambler分类第276位对应的位置处的亲水性氨基酸残基不是天冬氨酸(D)。
5.如权利要求1所述的β-内酰胺酶或如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述亲水性氨基酸选自来自由精氨酸(R)、组氨酸(H)和赖氨酸(K)组成的组的极性带正电的亲水性氨基酸。
6.如权利要求1所述的β-内酰胺酶或如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述亲水性氨基酸选自来自由天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)组成的组的极性的电中性亲水性氨基酸。
7.如权利要求6所述的β-内酰胺酶,其特征在于,在SEQ ID NO:1的对应于第276位的位置处的所述氨基酸是天冬酰胺。
8.如权利要求5所述的β-内酰胺酶,其特征在于,在SEQ ID NO:1的对应于第276位的位置处的所述氨基酸是精氨酸。
9.如前述权利要求中任一项所述的β-内酰胺酶或方法,其特征在于,在SEQ IDNO:1的对应于第276位的位置处的所述亲水性氨基酸位于α螺旋中。
10.如前述权利要求中任一项所述的β-内酰胺酶或方法,其特征在于,所述β-内酰胺酶还包含选自由基于Ambler分类的Leu220和Arg244组成的组的至少一种氨基酸。
11.如前述权利要求中任一项所述的β-内酰胺酶或方法,其特征在于,所述β-内酰胺酶水解青霉素和/或头孢菌素。
12.如前述权利要求中任一项所述的β-内酰胺酶或方法,其特征在于,所述β-内酰胺酶与野生型β-内酰胺酶相比具有提高的对头孢菌素的催化效率。
13.如权利要求11或12所述的β-内酰胺酶或方法,其特征在于,所述头孢菌素选自由头孢哌酮、头孢曲松和头孢唑林组成的组。
14.一种生产权利要求1或权利要求3~13中任一项所述的β-内酰胺酶的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
v)提供编码权利要求1或权利要求3~13中任一项所述的β-内酰胺酶的基因;
vi)用所述基因转化宿主细胞;
vii)获得产生所述β-内酰胺酶的宿主细胞;
viii)回收所述β-内酰胺酶。
15.一种治疗或预防β-内酰胺抗生素在胃肠道中引起的副作用的方法,其特征在于,向受试对象同时施用或依次施用权利要求1或权利要求3~13中任一项所述的β-内酰胺酶和β-内酰胺抗生素。
16.一种多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4中任一个的序列或其简并序列,或者所述多核苷酸编码权利要求1或权利要求3~13中任一项所述的β-内酰胺酶。
17.一种宿主细胞,所述宿主细胞包含权利要求16所述的多核苷酸。
18.一种药物组合物,所述药物组合物包含权利要求1或权利要求3~13中任一项所述的β-内酰胺酶。
19.如权利要求1或权利要求3~13中任一项所述的β-内酰胺酶,所述β-内酰胺酶用作药物。
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