[发明专利]食品及饲料中火鸡成分的实时荧光PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及食品或饲料中火鸡成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

为确保食品成分的真实性，质检“十二五”规划纲要明确指出“十二五”期间需重点加强开展食品掺假鉴别技术研究。《中华人民共和国产品质量法》、《中华人民共和国食品卫生法》和《食品标识管理规定》(国家质量监督检验检疫总局令第102号)等法律法规禁止产品的造假掺假行为和正确标识食品标签。然而，由于经济利益驱动，一些不法商在食品的加工过程中，常常以价格低廉的原料替代或掺入高价格的原料，或者根本就不添加标注的原料成分。在加工产品的造假掺假过程中，经常会使用有毒有害物质(如染色馒头等)，危害人民身体健康。

在动物产品原料和加工产品中，经常出现成分的掺假造假和无意污染现象。人为搀假主要是不法商要降低成本或增加品质，以谋取巨额的经济利益。这种掺假造假、以次充好的行为除了影响我国经济，另一个最主要的是影响人体健康和畜禽安全。疯牛病和禽流感的世界性爆发和流行，人们越来越关注食品安全和饲料安全。部分人群因为健康缘故也只食用素食部分。疯牛病的发生是由于反刍动物食用了含有动物成分的饲料，所以各国禁止含有动物成分的饲料喂养动物。含有禽成分的饲料可能具有传播禽流感的风险。用这些掺假的饲料喂养动物，会影响畜禽的健康生长及我们的畜牧业安全。

本方法是采用实时荧光PCR检测方法对火鸡成分进行鉴定。该方法的推广应用对保障产品的质量，保护消费者知情权和选择权，维护正常的经济秩序等提供技术支持。

发明内容

本发明的目的在于提供食品或饲料中火鸡成分的实时荧光PCR检测方法。

本发明的另一目的在于提供食品或饲料中火鸡成分的实时荧光PCR检测试剂盒.

在本发明的第一方面，提供一种鉴定火鸡成分的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含火鸡成分。

在一个优选例中，在以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物以及SEQ ID NO：3所示的Taqman MGB探针进行实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，所述的待测样品是食品或饲料。

在另一优选例中，所述方法的检测灵敏度为10^-4ng/μL DNA。

在本发明的另一方面，提供一种引物，所述引物是引物对，其序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

在本发明的另一方面，提供一种Taqman MGB探针，述的探针序列如SEQ ID NO：3所示。

在本发明的另一方面，提供所述的引物或所述的Taqman MGB探针的用途，用于从待测样品中鉴定火鸡成分。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定火鸡成分的试剂盒，其中包括所述的引物；和/或所述的Taqman MGB探针。

在一个优选例中，所述试剂盒中还包括：含有火鸡成分的检测标准品(该标准品中火鸡成分含量是确定的)。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂(或试剂盒)，Taq酶，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明鉴定火鸡成分的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、火鸡源性引物探针特异性实时荧光PCR检测图谱。仅在火鸡DNA中产生扩增产物，而在其它物种DNA样品中均无扩增。

图2、火鸡源性引物探针灵敏度实时荧光PCR检测图谱。

扩增曲线(平滑的弧形线)由左至右分别为：10％火鸡DNA，1％火鸡DNA，0.1％火鸡DNA，0.01％火鸡DNA，0.001％火鸡DNA，0.0001％火鸡DNA。

图3、火鸡肉粉重量比的实时荧光PCR检测灵敏度图。

扩增曲线从左到右(平滑的弧形线)分别(平滑的弧形线)以下样品的DNA：10％火鸡肉粉；1％火鸡肉粉；0.1％火鸡肉粉；0.01％火鸡肉粉；0.001％火鸡肉粉。

具体实施方式