[发明专利]一种益生菌发酵米乳的制备方法

权利要求书

1.一种益生菌发酵米乳的制备方法，其特征是按下述方法制备：

1)酶制剂的选择

耐高温α-淀粉酶，活力单位2万u/g；糖化酶，活力单位5万u/g；木瓜蛋白酶，活力单位50万u/g。

2)益生菌的选择及培养基的制备

A菌——鼠李糖乳杆菌CICC6162，培养基为：蛋白胨2g，酵母提取物1g，大豆蛋白胨1g，蛋白质酶解物No.3，1g，5％柠檬酸铁2ml，人工海水700ml，蒸馏水300ml，pH 7.5，经121℃灭菌20分钟冷却至35℃备用。

B菌——类干酪乳杆菌类干酪亚种CICC6111，培养基为：酪蛋白胨10g/L，肉汤提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，吐温801g/L，K₂HPO₄2g/L，醋酸钠5g/L，柠檬酸二铵2g/L，MgSO₄×7H₂O 0.2g/L，MnSO₄ x H₂O 0.05g/L，pH 6.2-6.5，经121℃灭菌20分钟冷却至35℃备用。

C菌——短乳杆菌CICC20023，培养基为：酵母浸膏7.5克，蛋白胨7.5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800.5毫升，水900毫升，琼脂1.5～2.0％，pH7.0，经121℃灭菌20分钟冷却至35℃备用。

3)原菌种活化

分别量取0.9％的生理盐水10ml于3只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将3株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

4)母发酵剂的制备

分别量取3株益生菌培养基各200ml于3只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种3.1步骤中已经活化的菌种，在30℃厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。

5)生产发酵剂的制备

首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于三只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃厌氧培养30——36小时，检测3株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥10⁹个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜10⁹个/ml，继续培养，直至达到10⁹个/ml。

6)粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥。

7)复合益生菌冻干粉的复配

按冻干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3-5份，C菌粉末1-2份，充分混匀后用于发酵酶解后的大米和糙米米乳混合浆料，加菌量为酶解后的大米和糙米米乳混合浆料重量的0.01％。

8)发酵原料的制备

将大米、糙米和饮用水按2∶1∶7的重量比取料，于胶体磨磨浆后过80目细筛，制成混合米乳浆料。

9)配料

按混合米乳浆料重量的5％添加白砂糖，边加热边搅拌，使白砂糖充分溶解，制成含糖混合米乳浆料。

10)液化

将配好的含糖混合米乳浆料打入发酵罐，蒸汽加热料液至90℃，此时按含糖混合米乳浆料重量的0.1％加入活力单位2万u/g的耐高温α-淀粉酶，保持20分钟，不断搅拌，然后冷却至50℃-55℃。

11)糖化

按含糖混合米乳浆料重量的0.15％添加活力单位为5万u/g糖化酶，再按含糖混合米乳浆料重量的0.2％添加活力单位为50万u/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀后，50℃-55℃保持4小时。

12)灭酶

将经过11)步骤处理的料液加热至100℃，保持15分钟，然后冷却至30℃。

13)复合益生菌发酵

按12)步骤处理后的料液重量的0.01％添加7)步骤制备的复合益生菌冻干粉，搅拌均匀，30℃保温静止发酵4小时。

14)无菌灌装

将13)步骤处理的料液搅拌均匀后，进行无菌灌装，获得益生菌发酵米乳成品。