[发明专利]高密度粪肠球菌及其发酵培养工艺

权利要求书

1.一种高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是采用固体发酵培养工艺，包括：

1）以米糠、麸皮、玉米粉、豆粕中任意一种或几种原料，和活性炭作为固态培养基料；

2）于固态培养基料中加入营养液培养基作为固态发酵培养基；

3）将固态发酵培养基灭菌后,接种粪肠球菌种液,经培养,干燥，粉碎制得高密度粪肠球菌产品； 

 所述的营养液培养基各质量组分组成为：葡萄糖：5～20.0，蛋白胨：1～10.0，牛肉膏：1～5.0，酵母膏：1～5.0，硫酸镁0～0.5，硫酸锰0～0.2，磷酸氢二钾：0.5～3.0，去离子水1000，pH6.0～7.5；

所述的粪肠球菌种液为用MRS液体培养基接种粪肠球菌培养制得。

2.依据权利要求1所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述固体发酵培养工艺，包括：

1）固态培养基料各组分组成按质量比为  米糠:麸皮:玉米粉:豆粕:活性炭 = 1：1.5～2.5: 1.5～2.5:2.5～3.5:1.5～2.5的比例混合；

2）于上步固态培养基料中按质量比固态培养基料：营养液培养基为1：1～1.5的比例加入营养液培养基，并加入饲料用稀土添加剂，制成固态发酵培养基； 

3）将2）步制得的固态发酵培养基，湿热灭菌，冷却后接种粪肠球菌种液，培养，干燥，粉碎制粪肠球菌产品；

所述的粪肠球菌种液是用MRS液体培养基，经灭菌冷却后，接种粪肠球菌斜面种子，在30℃～40℃温度，180rpm转速下,于摇床上培养18～20小时制得。

3.依据权利要求1或2所的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述3）步固态发酵培养基经灭菌冷却后，接种粪肠球菌种液，粪肠球菌种液接入量为固态发酵培养基质量的5～20%，培养过程中控制培养温度30～40℃，时间20～72小时。

4.依据权利要求1或2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述3）步的培养过程中至少进行一次以上营养液培养基的流加操作。

5.依据权利要求1或2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述活性炭为颗粒状活性炭,其颗粒直径控制在3～8mm。

6.依据权利要求1或2所的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是3）步所述的干燥粉碎是发酵培养后，物料于35～50℃下通风干燥至含水量10%以下，再粉碎至60～80目即为粪肠球菌成品。

7.依据权利要求2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述2）步饲料用稀土添加剂为含有镧、铈有效元素的饲料用稀土添加剂；添加剂加入量按质量比是固态培养基料：营养液培养基：饲料用稀土添加剂为1：1.0～1.3：0.00008～0.00015。

8.依据权利要求1或2所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是所述的粪肠球菌种液的制备是:MRS液体培养基各质量组分组成为：蛋白胨8～12，牛肉膏8～12，酵母膏3～6，柠檬酸氢二铵1～3.0，葡萄糖15～25，吐温801，乙酸钠3～6，磷酸氢二钾1～3，硫酸镁0.4～0. 8，硫酸锰0.1～0.3，蒸馏水800～1200 ，pH = 6.2～6.6；灭菌条件为温度110～121℃，时间20～30分钟,接种粪肠球菌斜面种子，放置于摇床上培养18～24小时，即得到粪肠球菌种液。

9.依据权利要求4所述的高密度粪肠球菌发酵培养工艺，其特征是分二次进行流加操作，是两次将灭菌后的营养液培养基用碳酸钠调节PH值到8～8.5，制成为碱性营养液；再按碱性营养液：固态发酵培养基 = 0.3：1的质量比例加入碱性营养液于固态发酵培养基培养料中，于无菌环境条件下翻料搅拌数分钟，继续培养到结束。

10.一种高密度粪肠球菌依据权利要求1所述的粪肠球菌发酵培养工艺制备获得。