[发明专利]具有经修饰的前原区域的蛋白酶

权利要求书

1.一种编码经修饰的全长蛋白酶的分离的经修饰的多核苷酸，所述分离的经修饰的多核苷酸包含编码所述全长蛋白酶的前原区域的第一多核苷酸，该第一多核苷酸有效连接到编码所述全长蛋白酶的成熟区域的第二多核苷酸上，其中所述第一多核苷酸编码SEQ ID NO：7的前原区域，并进一步被突变而包含至少一个突变，其中所述至少一个突变增强宿主细胞的所述蛋白酶生产。

2.权利要求1的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述经修饰的全长蛋白酶为源自野生型或变体前体碱性丝氨酸蛋白酶的碱性丝氨酸蛋白酶。

3.权利要求2的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述前体碱性丝氨酸蛋白酶为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的丝氨酸蛋白酶。

4.权利要求1的分离的多核苷酸，其中所述宿主细胞为芽孢杆菌属物种宿主细胞。

5.权利要求4的分离的多核苷酸，其中所述芽孢杆菌属物种宿主细胞为枯草芽孢杆菌宿主细胞。

6.权利要求1-5之任一的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸编码与SEQ ID NO：9的蛋白酶具有至少约65％同一性的蛋白酶。

7.权利要求1-6之任一的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸编码SEQ ID NO：9的蛋白酶。

8.权利要求1-7之任一的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述第一多核苷酸包含至少一个突变，所述至少一个突变编码在选自以下的一个或多个位置上的至少一个取代：2，3，6，7，8，10，11，12，13，14，15，16，17，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，57，58，59，61，62，63，64，66，67，68，69，70，72，74，75，76，77，78，80，82，83，84，87，88，89，90，91，93，96，100和102，其中的位置通过与SEQ ID NO：7的前原多肽的氨基酸序列对应而进行编号。

9.权利要求1-8之任一的分离的经修饰的多核苷酸，其中所述第一多核苷酸包含至少一个突变，所述至少一个突变编码选自以下的至少一个取代：X2F，N，P和Y；X3A，M，P和R；X6K和M；X7E；I8W；X10A，C，G，M和T；X11A，F和T；X12C，P，T；X13C，G和S；X14F；X15G，M，T和V；X16V；X17S；X19P和S；X20V；X21S；X22E；X23F，Q和W；X24G，T和V；X25A，D和W；X26C和H；X27A，F，H，P，T，V和Y；X28V；X29E，I，R，S和T；X30C；X31H，K，N，S，V和W；X32C，F，M，N，P，S和V；X33E，F，M，P和S；X34D，H，P和V；X35C，Q和S；X36C，D，L，N，S，W和Y；X37C，G，K和Q；X38F，Q，S和W；X39A，C，G，I，L，M，P，S，T和V；X45G和S；X46S；X47E和F；X48G，I，T，W和Y；X49A，C，E和I；X50D和Y；X51A和H；X52A，H，I和M；X53D，E，M，Q和T；X54F，G，H，I和S；X55D；X57E，N和R；X58A，C，E，F，G，K，R，S，T，W；X59E；X61A，F，I和R；X62A，F，G，H，N，S，T和V；X63A，C，E，F，G，N，Q，R和T；G64D，M，Q和S；X66E；X67G和L；X68C，D和R；X69Y；X70E，G，K，L，M，P，S和V；X72D和N；X74C和Y；X75G；X76V；X77E，V和Y；X78M，Q和V；X80D，L和N；X82C，D，P，Q，S和T；X83G和N；X84M；X87R；X88A，D，G，T和V；X89V；X90D和Q；X91A；X92E和S；X93G，N和S；X96G，N和T；X100Q；和X102T，其中的位置通过与SEQ ID NO：7所示FNA蛋白酶的前原多肽的氨基酸序列对应而进行编号。