[发明专利]一种具有与肿瘤细胞特异性结合功能的微胶囊的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微胶囊的制备方法，尤其是制备具有与肿瘤细胞特异性结合功能的层状结构微胶囊的方法。

背景技术

具有靶向传递功能的载药体系，在肿瘤的治疗中有十分重要的作用，能够提高药物的利用度，改变药代动力学，降低化疗药物对正常组织的损伤和机体对化疗药物的耐药性。多种结构的材料如脂质体、囊泡、胶束、微粒和微球、水凝胶和中空纳米囊和微胶囊等都被用作药物的传递体系。传递体系的靶向性可以通过理化的、生物特异性识别等方法来实现，包括直接导入、脂质体传递、病毒介导等。阳离子脂质体传递技术虽可大大提高导入效率，但无靶向性，生物半衰期短；病毒介导效率较高，但病毒制备困难，且存在诱导宿主免疫反应的问题，有潜在的致瘤性。而受体介导的药物传递体系利用某些组织特有的受体或肿瘤细胞过量表达的受体，通过受体介导将所携带的药物靶向转运到特定的组织和细胞，具有高特异性、高亲和力的特点，大大提高了药物转运效率，且适用面广。与正常细胞相比，肿瘤细胞表面会过量表达叶酸的受体。因此，将叶酸固定到传递体系的表面，可望获得具有与肿瘤细胞表面特异性结合程度高的药物传递体系。

微胶囊是通过成膜物质将囊内空间与囊外空间隔离开以形成特定几何结构的物质，其内部可以是填充的，也可以是中空的。传统微胶囊尺寸大小通常在微米至毫米级，壁厚在亚微米至几百微米。根据囊壁形成的原理，微胶囊的传统制备方法大体可分为三类：利用反应生成囊壁的化学方法、利用相分离形成囊壁的物理化学方法和利用机械或其它物理作用形成囊壁的物理方法。囊壁通常由天然或合成的高分子材料组成，也可是无机化合物。近年来，又发展了许多新的微胶囊的制备方法，如模板组装、模板聚合、表面接枝聚合、分散聚合等。其中，基于模板层一层自组装方法制备的微胶囊具有结构和性能可控、易赋予各种独特功能等特点。微胶囊的尺寸由模板预先控制，而壁厚可控制在纳米尺度内。微胶囊的渗透性以及包埋物质的释放性能可以通过环境条件如温度、离子种类和离子强度、pH值、溶液性质、光、电、声等进行控制。因此在药物控制释放、酶的包埋与催化反应、组织工程等领域显示了十分重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有与肿瘤细胞特异性结合功能的微胶囊的制备方法，即具有与肿瘤细胞结合程度高的靶向微胶囊的制备方法。

具有与肿瘤细胞特异性结合功能的微胶囊的制备方法，包括以下步骤：

1)在浓度为0.33M/L的含钙无机盐水溶液中，搅拌下加入等体积的浓度为0.33M/L的含碳酸根无机盐水溶液，搅拌下反应15分钟，离心过滤，得CaCO₃胶体微粒；

或者在浓度为0.005M/L的含钙无机盐水溶液中加入聚苯乙烯磺酸钠，搅拌下加入等体积的浓度为0.005M/L的含碳酸根无机盐水溶液，聚苯乙烯磺酸钠的终浓度为0.5mg/mL，搅拌下反应5分钟，离心过滤，得内部含聚苯乙烯磺酸钠的CaCO₃胶体微粒；

2)将1mL浓度为1mg/mL的聚烯丙基胺盐酸盐的0.5M的NaCl溶液与步骤1)的CaCO₃胶体微粒混和，10分钟后离心弃上清液，水洗后，得到第一层为聚烯丙基胺盐酸盐的CaCO₃胶体微粒；再将该CaCO₃胶体微粒分散在1mL浓度为1mg/mL聚苯乙烯磺酸钠的0.5M的NaCl溶液中，10分钟后离心弃上清液，水洗后，得到第二层为聚苯乙烯磺酸钠的CaCO₃胶体微粒；重复以上过程，并使最外层为聚烯丙基胺盐酸盐，得到聚电解质多层膜包裹的核—壳结构微粒；

3)向步骤2)制得的微粒中加入1mL 0.5％戊二醛，室温下反应12小时，离心，去上清，水洗后；向其中加入1mL 2％的双端氨基聚乙二醇，室温下反应24小时，得到聚乙二醇修饰的表面含有氨基的核—壳粒子，离心，去上清，水洗后；加入2mg/mL的NaBH₄溶液，4℃下反应12小时，然后离心，弃去上清，水洗后；加入2.5mM/mL叶酸、20mg/mL 1-乙基-3-(3-二甲氨基-丙基)碳二亚胺和10mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺溶液，室温下反应24小时；去上清，水洗后，得到叶酸修饰的CaCO₃胶体粒子；

4)采用盐酸或乙二胺四乙酸络合去除CaCO₃胶体微粒，得到叶酸修饰的中空微胶囊或内含聚苯乙烯磺酸钠的微胶囊。

本发明中，所说的含钙无机盐可以是硝酸钙或氯化钙；含碳酸根无机盐可以是碳酸钠或碳酸氢铵。所说的CaCO₃胶体微粒的去除方法采用盐酸分解或乙二胺四乙酸络合。