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[发明专利]一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法及其应用-CN201811442625.8在审
发明人：王库强;王峰 -专利权人：湖南百尔泰克生物科技有限公司
申请日： 2018-11-29 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C12N15/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法，包括以下步骤：1)通过PCR法对人生长激素hGH基因进行扩增，得到扩增后的hGH基因；2)将步骤1)中的扩增后的hGH基因连接到pMal‑p2x载体上，得到重组质粒pMal‑hGH；4)将步骤3)中的重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)中，通过IPTG诱导蛋白表达，并确定表达正确后，获得高效表达生长激素的工程菌。本发明分别采用pMal‑p2x作为载体，获得了重组质粒pMal‑p2x‑GH，pMal‑p2x‑GH的重组质粒的氨基端带有一个MBP蛋白标签，因而将重组质粒导入到大肠杆菌的受体中，可以将hGH和MBP标签进行融合表达
重组质粒生长激素高效表达工程菌扩增大肠杆菌蛋白外周制备人生长激素蛋白标签蛋白表达基因连接融合表达氧化环境氨基端二硫键基因应用

[发明专利]菌影载体PMAL-E-SN的构建及其在大肠杆菌中的应用-CN200810051489.X无效
发明人：雷连成;杜崇涛;韩文瑜;孙长江;冯新 -专利权人：吉林大学
申请日： 2008-11-28 - 公布日： 2009-06-17 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种菌影载体PMAL-E-SN的构建及其在大肠杆菌中的应用，以PhiX174噬菌体RFI质粒为模板进行PCR扩增，得到E基因；以金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923基因组DNA为模板进行PCR扩增，得到SN基因；用十五个柔性氨基酸的Linker串连E基因和SN基因，得到E-SN基因；E-SN基因PCR扩增产物与pMD18-T载体连接，筛选阳性质粒pT-E-SN测序；用质粒载体PMAL-p2X和测序正确的重组质粒pT-E-SN构建菌影载体PMAL-E-SN。本发明的菌影载体PMAL-E-SN通过“tac”强启动子和malE翻译起始信号使E基因和SN基因获得高效表达，成功制备了大肠杆菌菌影，裂解效率可达99.99％；本发明引入次要杀伤基因SN，并联合E基因和SN基因连入高效表达载体PMAL-p2X，取得了良好的效果，可广泛应用于大肠杆菌菌影的制备。
载体 pmal sn 构建及其大肠杆菌中的应用

[发明专利]建鲤促性腺激素释放激素基因六聚体原核表达载体及其构建方法和应用-CN201110353411.5无效
发明人：丁炜东;曹哲明;曹丽萍;邴旭文 -专利权人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
申请日： 2011-11-10 - 公布日： 2012-03-21 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达多聚体促性腺激素释放激素的原核表达载体pMAL-GnRH。RT-PCR方法从建鲤丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因，克隆至T载体中，经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后通过人工合成GnRH串联六聚体并与GAP蛋白偶联后将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH；表达产物具有免疫原性，可以刺激机体产生免疫应答。
促性腺激素释放激素基因六聚体原核表达载体及其构建方法应用

[发明专利]一种可溶性表达马红球菌致病基因VapA蛋白的方法-CN201510273219.3有效
发明人：孙凌霜;龚凤平;李守军 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2015-05-26 - 公布日： 2015-08-26 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了一种可溶性表达马红球菌致病基因VapA蛋白的方法，是将VapA基因克隆到PMAL-C5x载体上，构建表达载体PMAL-VapA，并将PMAL-VapA转化至原核表达菌，
一种可溶性表达球菌致病基因 vapa 蛋白方法

[发明专利]一种利用原核表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白的方法-CN201410387169.7在审
发明人：张文宇;魏鹏;白羊;黄奋飞;陈胜亮;阮卡;陈星;章永垒 -专利权人：厦门北大之路生物工程有限公司
申请日： 2014-08-08 - 公布日： 2014-12-03 - 主分类号： C07K14/475 文献下载
摘要：步骤为：将hGIF基因克隆入pGEX-4t-1得到pGEX-4t-GIF重组载体；将Rab3A基因克隆入pMAL-c2x得到pMAL-c2x-Rab3A重组载体；所述hGIF基因序列见SEQIDNO:5；所述Rab3A基因序列见SEQIDNO:6；将所得重组载体导入大肠杆菌表达菌株Rosseta（DE3）中，构建含有重组表达载体的pGEX-4t-GIF基因工程菌和pMAL-c2x-Rab3A基因工程菌
一种利用表达系统制备神经生长抑制因子重组蛋白方法

[发明专利]非洲猪瘟病毒I177L基因重组质粒、表达载体及制备方法-CN202110013458.0在审
发明人：黄淑坚;曾繁聪;陈耀;杨惠湖;罗瑞;柯骏鸿;姜含雨;谢梓民 -专利权人：佛山科学技术学院
申请日： 2021-01-06 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：所述制备方法，包括步骤：向I177L基因两端添加NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点后，连入经NotⅠ和EcoRⅠ双酶切的pMAL‑c5X载体中，得到重组质粒pMAL‑I177L。所述重组质粒pMAL‑I177L可用于制备I177L蛋白的表达载体。
非洲猪瘟病毒 i177l 基因重组质粒表达载体制备方法

[发明专利]一种获得高纯高效的藻毒素降解酶的生物合成方法-CN201310546005.X有效
发明人：冯玲玲;万坚;李俊;吴迪;苏佳丽;任彦亮;肖闪 -专利权人：华中师范大学
申请日： 2013-11-06 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明方法包括如下步骤：将如SEQIDNO.1所示的序列构建到pMAL-C2X上得到pMAL-MlrA；将pMAL-MlrA转化到大肠杆菌TB1中得到MlrA的表达菌；将MlrA的表达菌用IPTG诱导表达
一种获得高纯高效毒素降解生物合成方法

[发明专利]牛病毒性腹泻病毒E0蛋白氨基酸及制备方法-CN201910981684.0有效
发明人：才冬杰;左之才;谢跃;马晓平;任志华;叶刚;余树民;王娅;苟丽萍 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2019-10-16 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： C07K14/18 文献下载
摘要：制备方法包括以下步骤：S1、从NCBI GenBank中获取BVDV NADL全基因组序列，从中找出BVDV E0基因序列；S2、对步骤S1得到的E0基因序列进行优化与合成；S3、选择带有MBP标签原核表达载体pMal‑c5X，将E0基因与pMal‑c5X进行连接，将E0片段插入pMal‑c5X；然后将连接好的表达载体pMAL‑c5x‑E0转化进表达宿主菌BL21(DE3)，并诱导表达重组蛋白，分离纯化目的蛋白。
病毒性腹泻病毒 e0 蛋白氨基酸制备方法

[发明专利]幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶的制备方法-CN201510170311.7在审
发明人：刘东;刘威;吴玉章 -专利权人：中国人民解放军第三军医大学
申请日： 2015-04-10 - 公布日： 2015-07-15 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明公开了幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶的制备方法，具体是以SEQ ID No.3和SEQ ID No.4扩增SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，然后将扩增产物经酶切后连入经同样酶切的pMAL-C质粒中，获得重组表达载体pMAL-C-SP，然后将重组表达载体pMAL-C-SP于大肠杆菌中诱导表达并用Ni²⁺亲和层析柱和强阴离子交换柱纯化，最后过SephadexG200分子筛，得幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶
幽门螺旋杆菌丝氨酸蛋白酶制备方法

[发明专利]黄鳝芳香化酶保守区的原核表达载体pMAL-Arom19及其构建方法和应用方法-CN201210275140.0无效
发明人：丁炜东;曹丽萍;曹哲明;邴旭文 -专利权人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
申请日： 2012-08-03 - 公布日： 2012-11-28 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供一种Arom19的原核表达载体pMAL-Arom19，该载体含有T7启动子和终止子、细菌核糖体结合位点RBS和Arom19基因保守区片段及一个麦芽糖结合蛋白标签。构建此载体的方法为采用RT-PCR方法从黄鳝脑中扩增出长约639bp的目的序列Arom19基因保守区，克隆至T载体中，经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后，将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-Arom19。
黄鳝芳香保守表达载体 pmal arom19 及其构建方法应用

[发明专利]一种转化体及基于其制备重组人降钙素基因相关肽的方法-CN200910021762.9有效
发明人：马梃光;马炳洁 -专利权人：马梃光;马炳洁
申请日： 2009-03-31 - 公布日： 2009-12-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于转化体制备重组人降钙素基因相关肽的方法，所述转化体宿主细胞是大肠杆菌TB1(E.coli TB1)，导入宿主细胞的表达载体为pMAL-CGRP线性载体，其中，CGRP为重组人降钙素基因相关肽基因，通过Xmn I酶切位点克隆入pMAL-c2X载体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；基于该转化体的重组人降钙素基因相关肽CGRP制备方法，包括菌株培养、融合蛋白的纯化、CGRP的纯化得到具有高活性的
一种转化基于制备重组降钙素基因相关方法

[发明专利]一种麦芽糖结合蛋白、麦芽糖结合蛋白表达载体、重组工程菌及其应用-CN202011560900.3在审
发明人：台桂香;刘宇;桑倩宇 -专利权人：康九生物科技（长春）有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明所述麦芽糖结合蛋白表达载体以pMAL‑C2作为原始载体，在malE基因后插入含有终止密码的基因。本发明在所述pMAL‑C2载体malE基因后多酶切位点区插入含有终止密码的基因，能够避免下游LacZα基因的表达，在基于麦芽糖结合蛋白表达载体制备麦芽糖结合蛋白的过程中，无需酶切去除LacZα的工艺，通过亲和层析能够直接获得
一种麦芽糖结合蛋白表达载体重组工程及其应用

[发明专利]细胞分裂素氧化酶OsCKX 3表面展示体系及其构建方法和应用-CN201810401179.X有效
发明人：吴云华;李勇;龚斌 -专利权人：中南民族大学
申请日： 2018-04-28 - 公布日： 2020-06-09 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：紧接着，本发明提供了上述细胞分裂素氧化酶OsCKX 3基因的表面展示载体pMAL‑p2x‑INP‑CKX。本发明提供了一种水稻日本晴细胞分裂素氧化酶OsCKX 3表面展示体系，包括宿主大肠杆菌以及定向插入的表面展示载体pMAL‑p2x‑INP‑CKX。
细胞分裂氧化酶 osckx 表面展示体系及其构建方法应用

[发明专利]一种I群4型禽腺病毒Fiber-2蛋白的制备及应用-CN202111261808.1在审
发明人：陈瑞爱;兰虹;熊挺;何献铭;杨泽坤 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2021-10-28 - 公布日： 2021-12-21 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：所述制备方法包括：以FAdV‑4毒株DNA为模板，设计引物扩增出fiber2序列，测序正确后，将fiber2序列进行密码子优化，然后将其构建到pMal‑c2X载体上，得到重组质粒pMal‑c2X‑FAV4
一种型禽腺病毒 fiber 蛋白制备应用

[发明专利]一种茶树中性/碱性转化酶CsINV2蛋白及其制备方法和应用-CN202310104429.4在审
发明人：钱文俊;李波;王缓;王玉;丁兆堂 -专利权人：青岛农业大学
申请日： 2023-02-07 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N9/26 文献下载
摘要：本发明所述制备方法，包括：采用BamHⅠ对pMAL‑C2X质粒进行单酶切反应，将得到的载体片段与CsINV2基因连接，得到重组质粒pMAL‑C2X‑CsINV2，转化到表达菌株中，获得重组菌株；将所述重组菌株经培养后得到的菌液破碎
一种茶树中性碱性转化 csinv2 蛋白及其制备方法应用

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