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[发明专利]同时检测4种猪内源性逆转录病毒的引物和探针、试剂盒-CN202211537027.5在审
发明人：蒋廷亚;刘海涛;王银锋;黄楚涵 -专利权人：上海奥根诊断技术有限公司
申请日： 2022-12-02 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供的一种同时检测4种猪内源性逆转录病毒的引物和探针，本发明基于PERV‑A，PERV‑B，PERV‑C和PERV‑A/C基因组上的保守区，设计高特异性引物和探针，可在一次反应中对PERV‑A，PERV‑B，PERV‑C和PERV‑A/C进行有效检测并定量，降低了反应成本，提高了检测通量。
同时检测种猪内源逆转录病毒引物探针试剂盒

[发明专利]产生基因修改的动物的方法-CN201880041802.3在审
发明人：杨璐菡 -专利权人： E开创生物技术股份有限公司
申请日： 2018-04-20 - 公布日： 2020-04-17 - 主分类号： A01K67/027 文献下载
摘要：本公开提供了产生多重基因修改的动物的方法，例如，猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪。本公开还提供了提高多重转基因动物出生率的方法。在一些实施方式中，本公开涉及猪细胞的产生和使用，其中猪内源性逆转录病毒(PERV)部分已灭活。在一些实施方式中，克隆无PERV或PERV减少的猪细胞以产生猪胚胎。在一些实施方式中，无PERV或PERV减少的胚胎可生长为成年猪，从中可提取器官和/或组织并用于异种移植到例如人类的非猪动物中。
产生基因修改动物方法

[发明专利]产生基因修改的动物的方法-CN202310377436.1在审
发明人：杨璐菡 -专利权人： E开创生物技术股份有限公司
申请日： 2018-04-20 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本公开提供了产生多重基因修改的动物的方法，例如，猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪。本公开还提供了提高多重转基因动物出生率的方法。在一些实施方式中，本公开涉及猪细胞的产生和使用，其中猪内源性逆转录病毒(PERV)部分已灭活。在一些实施方式中，克隆无PERV或PERV减少的猪细胞以产生猪胚胎。在一些实施方式中，无PERV或PERV减少的胚胎可生长为成年猪，从中可提取器官和/或组织并用于异种移植到例如人类的非猪动物中。
产生基因修改动物方法

[发明专利]产生基因修改的动物的方法-CN202310378026.9在审
发明人：杨璐菡 -专利权人： E开创生物技术股份有限公司
申请日： 2018-04-20 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本公开提供了产生多重基因修改的动物的方法，例如，猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪。本公开还提供了提高多重转基因动物出生率的方法。在一些实施方式中，本公开涉及猪细胞的产生和使用，其中猪内源性逆转录病毒(PERV)部分已灭活。在一些实施方式中，克隆无PERV或PERV减少的猪细胞以产生猪胚胎。在一些实施方式中，无PERV或PERV减少的胚胎可生长为成年猪，从中可提取器官和/或组织并用于异种移植到例如人类的非猪动物中。
产生基因修改动物方法

[发明专利]选育五指山小型猪近交系无PERV传染性新品系的方法-CN201710127536.3在审
发明人：马玉媛;章金刚;范瑞;贾俊婷;赵雄;冯书堂 -专利权人：北京盖兰德生物科技有限公司
申请日： 2017-03-06 - 公布日： 2017-06-13 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种选育无PERV传染性的五指山小型猪近交系的方法。该方法包括如下步骤将来源于待测猪的PBMC与HEK293细胞共培养4‑7天，去除所述PBMC，鉴定所述HEK293细胞中是否携带或表达PERV的结构基因，根据鉴定结果确定所述待测猪是否为无PERV传染性的五指山小型猪近交系若所述HEK293细胞中不携带且不表达PERV的结构基因，则所述待测猪为候选无PERV传染性的五指山小型猪近交系；反之，则所述待测猪不为无PERV传染性的五指山小型猪近交系。本发明对于选育五指山小型猪近交系无PERV传染性新品系具有重要意义。
选育五指山小型近交系 perv 传染性品系方法

[发明专利]猪内源性反转录病毒整合拷贝数的荧光定量PCR检测方法及其应用-CN200910243391.9无效
发明人：章金刚;马玉媛;吴健敏;冯书堂;吕茂民;杨勇贤 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所;广西壮族自治区兽医研究所
申请日： 2009-12-22 - 公布日： 2010-09-29 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：该方法是采用基于SYBR Green I染料的荧光定量PCR技术对整合在基因组中的猪内源性反转录病毒拷贝数进行检测，检测对象是PERV pol基因保守区。该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好，并具有快速、简便、费用低廉的优点，能够快速准确的检测出PERV的拷贝数，并估算出单细胞基因组中整合的PERV拷贝数，既可用于异种移植的小型猪供体及猪源生物材料基因组中整合的PERV拷贝数的快速筛选，也可用于异种移植后PERV传播的长期监测与远期评估，具有较大的实际意义和广阔的应用前景。
内源转录病毒整合拷贝荧光定量 pcr 检测方法及其应用

[发明专利]识别猪PERV基因的sgRNA及其编码DNA和应用-CN202210110465.7在审
发明人：唐成程;郑淑文;邹庆剑;郑雨龄;李万胜;周小青;资崯;陈敏;赖良学 -专利权人：五邑大学
申请日： 2022-01-29 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种识别猪PERV基因的sgRNA及其编码DNA和应用。该sgRNA的靶序列为A1‑A8中任意一种。本发明提供的sgRNA特异性识别猪PERV基因，将其用于CRISPR/Cas9系统，在不引起DNA双链断裂的情况下实现DNA碱基序列改变，可以解决利用CRISPR/Cas9系统介导PERV基因敲除时，双链断裂累积导致细胞大量死亡的问题本发明的sgRNA敲除效率高，能够高效地对猪PERV基因进行编辑，实现在猪器官异种移植、猪细胞或个体的基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。
识别 perv 基因 sgrna 及其编码 dna 应用

[发明专利]一种用于异种移植供体猪多重病毒实时荧光检测的特异性引物、探针和试剂盒-CN202210300581.5在审
发明人：李旦;史金阳;郑炜;万建峰 -专利权人：杭州时轮医药科技有限公司
申请日： 2022-03-24 - 公布日： 2022-06-28 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于异种移植供体猪多重病毒实时荧光检测的特异性引物、探针和试剂盒，通过对猪内源性反转录病毒(PERV)，猪流感病毒(SI)以及猪戊肝病毒(PHEV)的核酸序列进行比对分析，分别以PERV‑GAG基因1332‑1430区段(三型PERV‑ABC均高度保守)，SI‑HA基因,PHEV‑ORF3基因为扩增靶位点，选择无二级结构且高度保守的区段，根据引物探针设计的基本原则，利用引物分析软件和人工判断，本发明提供同时筛查供体猪内源性反转录病毒(PERV)，猪流感病毒(SI)以及猪戊肝病毒(PHEV)的方法。
一种用于移植供体多重病毒实时荧光检测特异性引物探针试剂盒

[发明专利]衍生自B型猪内源性病毒受体结合结构域的配体在诊断与SMVT相关的疾病中的用途-CN201980078215.6在审
发明人： M·西特邦;V·佩蒂特;S·伊万诺瓦;J-L·巴蒂尼;V·库诺德;D·焦万尼尼;J·莱扎 -专利权人：梅塔福拉生物系统公司;国家科学研究中心;蒙彼利埃大学;巴黎大学
申请日： 2019-10-07 - 公布日： 2021-10-15 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及检测和/或测量生物样品中钠依赖性多维生素转运子(SMVT)水平的方法，其中所述方法包括以下步骤：a.使所述生物样品与PERV‑B.RBD配体、其变体和/或片段接触；和，b.检测和/或测量所述PERV‑B.RBD
衍生内源性病受体结合结构诊断 smvt 相关疾病中的用途

[发明专利]低表达或不表达PERV的肝细胞的制备方法-CN201510489709.7在审
发明人：张健民;高毅 -专利权人：南方医科大学珠江医院
申请日： 2015-08-11 - 公布日： 2015-12-16 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开一种低表达或不表达PERV的肝细胞的制备方法，其包括以下步骤：(1)分别制备含有应用于RNA干扰技术的siRNA的重组载体、应用于CRIPRS/Cas9技术的gRNA的重组载体和含有应用于所述本发明低表达或不表达PERV的肝细胞的制备方法对PERV基因实现了转录前敲除和转录后抑制，技术方案有效可行。
表达 perv 肝细胞制备方法

[发明专利]一种对shRNA干扰片段进行筛选的方法-CN201310525126.6无效
发明人：徐丽 -专利权人：徐丽
申请日： 2013-10-31 - 公布日： 2014-02-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种对shRNA干扰片段进行筛选的方法，其特征在于，步骤如下：首先建立能够稳定表达PERV的细胞模型；然后对细胞进行培养，shRNA表达载体转染细胞，并进行荧光观察；用荧光定量进行检测。在对PERV进行培养的时候，需要及时吸取干净细胞培养液，之后再用洗脱缓冲液进行预热3-10分钟。最后需要在48小时后用荧光显微镜观察细胞转染效率并收集细胞检测shRNA的干扰效果。
一种 shrna 干扰片段进行筛选方法

[发明专利]转基因猪的培育方法和应用-CN201810150399.X有效
发明人：胡勇;于寅 -专利权人：深圳市臻质医疗科技有限公司
申请日： 2018-02-13 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：/或miR302/367簇，使其诱导为RNA诱导性多能干细胞；在Cas9‑gRNA和CRE同源重组酶的作用下，敲除猪有毒基因的同时敲入若干个人基因片段，采用人源vWF基因原位替换猪内源vWF基因，获得PERV本发明获得的转基因猪具有PERV病毒永久性无法表达、对人体无免疫排斥和凝血兼容等优点，可用作人异源器官、组织、细胞的供体。
转基因培育方法应用

[发明专利]阳性菌落中重组蛋白表达载体的鉴定方法-CN201310531364.8无效
发明人：刘军 -专利权人：刘军
申请日： 2013-11-01 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：步骤如下：首先在LB平板上植入目的菌落；24小时后从LB平板上挑取适当的单菌落作为模版；初步筛选到具有插入片段的克隆；根据载体信息，重组蛋白检测；将稳定表达PERV的进行模型建立；对比阳性扩增片段，证实已感染PERV的菌落；连续培养一个月后对照，依然稳定表达的菌落即为所需目的菌落；一个月的培养期中应该使其在35摄氏度的环境下保存；重组蛋白的时候，滴入含有安卡青霉素的溶液，浓度百分比至少为15%。
阳性菌落重组蛋白表达载体鉴定方法

[发明专利]一种质粒在大肠杆菌上进行转化的方法-CN201310521935.X无效
发明人：徐丽 -专利权人：徐丽
申请日： 2013-10-30 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，抗体的制备为将来检测临床器官和人工肝中的PERV的表达及传播具有重要意义。
一种质粒大肠杆菌进行转化方法

[发明专利]一种制备内源性逆转录病毒多克隆抗体的方法-CN201310674158.2在审
发明人：仲集华 -专利权人：仲集华
申请日： 2013-12-02 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C07K16/10 文献下载
摘要：本发明的有益效果是，实验简单，费用较低，抗体的制备为将来检测临床器官和人工肝中的PERV的表达及传播具有重要意义。
一种制备内源逆转录病毒克隆抗体方法

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