本发明公开了一种唐古特白刺NtCIPK9基因及其表达蛋白和应用,所述NtCIPK9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明根据唐古特白刺的抗逆特性,利用唐古特白刺的叶片组织,在已有的部分转录组数据的基础上,同源克隆了唐古特白刺抗逆相关的CIPK基因全长,依据拟南芥中的同源基因而命名为NtCIPK9。通过NtCIPK9基因纯合拟南芥植株的耐盐性分析,证明了唐古特白刺NtCIPK9基因在植物耐盐方面的功能,为植物抗逆基因库增加资源。
本发明公开了一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1及其克隆方法与应用;所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;克隆方法包括烟草叶片cDNA合成:提取烟草叶片总RNA,反转录得到第一链cDNA;NtCIPK1基因的PCR扩增:以烟草叶片cDNA为模板,根据NtCIPK1基因序列设计引物,进行PCR扩增,回收和纯化PCR扩增产物,并测序应用为所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1在获得调控烟草钾含量的转基因烟草植株中的应用。本发明利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtCIPK1基因进行了功能鉴定。烟草NtCIPK1基因的克隆鉴定为调控烟草钾含量提供了新的基因靶标。
本发明公开了一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK25‑1及其克隆方法与应用;所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK25‑1核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;克隆方法包括烟草叶片cDNA合成:提取烟草叶片总RNA,反转录得到第一链cDNA;NtCIPK25‑1基因的PCR扩增:以烟草叶片cDNA为模板,根据NtCIPK25‑1基因序列设计引物,进行PCR扩增应用为所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK25‑1在获得调控烟草钾含量的转基因烟草植株中的应用。本发明利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtCIPK25‑1基因进行了功能鉴定。烟草NtCIPK25‑1基因的克隆鉴定为调控烟草钾含量提供了新的基因靶标。
本发明的发明人从普通烟草(Nicotiana tabacum)栽培品种中烟100中鉴定获得NtCIPK23基因,所述NtCIPK23基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,并通过转基因技术证明过量表达NtCIPK23能够加快烟草种子萌发速率、促进幼苗生长,敲除该基因则延缓幼苗萌发速率,抑制幼苗生长。