本发明公开了一种区分大黄鱼和黄姑鱼生殖细胞的引物与方法,属于鱼类生殖细胞鉴定技术领域,本发明引物包括如下(1)‑(4)中的至少一种:(1)SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示大黄鱼特异性引物序列;(2)SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示黄姑鱼特异性引物序列;(3)SEQ ID No.12、SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示大黄鱼特异性引物序列;(4)SEQ ID No.15、SEQ ID No.16和SEQ ID No.17所示黄姑鱼特异性引物序列。本发明引物特异性强,通过PCR和原位杂交方法,可以快速、准确地区分大黄鱼和黄姑鱼生殖细胞。