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[发明专利]鸡蛋清溶菌酶及其制备方法-CN201410500154.7在审
发明人：王连民;刘珂飞;荆玮 -专利权人：天津生机集团股份有限公司
申请日： 2014-09-26 - 公布日： 2015-01-07 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明提供了一种鸡蛋清溶菌酶及其制备方法，所述鸡蛋清溶菌酶的蛋白活性的多肽氨基酸编码序列为序列表400<1>所示序列，制备方法包括：(1)获取鸡蛋清溶菌酶基因；(2)重组质粒的构建；(3)基因工程菌株的构建；(4)基因工程重组鸡蛋清溶菌酶生产方法；所述鸡蛋清溶菌酶具有稳定、纯净、生物活性高的特点，可广泛应用于制药、饲料等多个领域，其制备方法将基因工程菌株作用于发酵合成溶菌酶，所构建的工程菌株能大量增加酶基因的拷贝数，提高酶的表达量，从而实现鸡蛋清溶菌酶的高效合成，不受原材料来源的限制。
鸡蛋清溶菌酶及其制备方法

[发明专利]一种鸡蛋清溶菌酶基因（RJM）的克隆及其酵母表达方法-CN201510381306.0在审
发明人：勾连军;徐雪松;宋海泉;赵光伟;张立武 -专利权人：江苏敖众生物科技有限公司
申请日： 2015-07-02 - 公布日： 2015-09-30 - 主分类号： C12N15/56 文献下载
摘要：本发明属于生物基因工程领域，公开了一种鸡蛋清溶菌酶基因(RJM)的克隆及其酵母表达方法，通过获取鸡蛋清溶菌酶基因(RJM)、测定溶菌酶基因核酸序列及氨基酸序列、构建基因表达载体、鉴定基因表达载体、将酵母表达质粒转化入酵母细胞、诱导表达鸡蛋清溶菌酶及免疫印迹实验验证实现鸡蛋清溶菌酶基因(RJM)的克隆及其酵母表达。本发明可以高密度发酵酵母，大量表达鸡蛋清溶菌酶基因，由于酵母菌属于真核微生物，表达出的溶菌酶蛋白对其无杀伤作用，可有效避免原核微生物表达过程中溶菌酶蛋白对工程菌的杀伤，本发明属于分泌表达，易于获取目的蛋白
一种鸡蛋清溶菌酶基因 rjm 克隆及其酵母表达方法

[发明专利]提高鸡蛋清中溶菌酶含量的方法及以此方法产生的鸡蛋-CN201510701515.9有效
发明人：李占超;汪子明;刘振恒;李美璇 -专利权人：吉林大学
申请日： 2015-10-23 - 公布日： 2019-02-05 - 主分类号： A23K10/30 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高鸡蛋清中溶菌酶含量的方法。在蛋鸡的养殖过程中摄入木醋液，至少喂食5天；蛋鸡的木醋液摄入量占上述的蛋鸡饲料摄入量的0.1％‑0.6％。所述木醋液为酸枣核木醋液。本发明还提供一种提高鸡蛋清中溶菌酶含量的方法产生的鸡蛋，在蛋鸡的养殖过程中摄入木醋液，至少喂食5天后，蛋鸡所产的鸡蛋，即为蛋清中高溶菌酶含量的鸡蛋。有益效果：本发明提供了一种有效的方法提高鸡蛋清中溶菌酶的含量，本发明能够促进蛋清中溶菌酶市场价格的降低，提供更广阔的市场应用。
蛋鸡饲料提高鸡蛋清中溶菌酶含量方法以此产生

[发明专利]一种利用重组毕赤酵母高效表达鸡蛋清溶菌酶的DNA片段及表达方法-CN201510082558.3在审
发明人：王连民;刘珂飞;荆玮 -专利权人：天津生机集团股份有限公司
申请日： 2015-02-16 - 公布日： 2015-06-10 - 主分类号： C12N15/56 文献下载
摘要：本发明属于生物基因工程领域，提供了一种利用重组毕赤酵母高效表达鸡蛋清溶菌酶DNA片段及表达方法。本发明是利用基因合成手段直接获得鸡蛋清溶菌酶的基因，经过酶切、连接等操作后将基因导入到真核表达载体pPIC9K中，并转化到毕赤酵母GS115中进行高拷贝重组子的筛选，然后通过甲醇诱导实现重组鸡蛋清溶菌酶在胞外的高效表达本方法不受原材料来源的限制，不仅能增加该溶菌酶基因的拷贝数，提高酶的表达量和活性，还简化了后期分离纯化工艺，实现了鸡蛋清溶菌酶的大批量工业化生产。
一种利用重组酵母高效表达鸡蛋清溶菌酶 dna 片段方法

[发明专利]一种改构鸡蛋清溶菌酶及其应用-CN202111401582.0在审
发明人：王楠;郭文芳;刘德虎;李刚强;王梦琪 -专利权人：中国农业科学院生物技术研究所
申请日： 2021-11-19 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种改构鸡蛋清溶菌酶及其应用。本发明针对鸡蛋清溶菌酶进行改造，替换其中98～112位序列为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。改构后的蛋白已不具胞壁水解酶活性，但却比改构前的鸡蛋清溶菌酶具有更强的抑菌活性，尤其是针对棉花黄萎病菌。本发明还提供了相应的制备转基因植物的方法，将改构鸡蛋清溶菌酶的编码序列转导至棉花中进行表达，可以显著提高棉花对于黄萎病菌的抗性，而且与传统的、依赖于组织培养的方法相比，棉花活体茎尖遗传转化棉花方法转化方法操作简便
一种鸡蛋清溶菌酶及其应用

[发明专利]一种鸡蛋清中溶菌酶的提取方法-CN201310559817.8无效
发明人：史苏佳;王强 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-11-08 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：一种鸡蛋清中溶菌酶的提取方法，属于农副产品利用技术领域。本发明以鸡蛋清为原料，于4℃-10℃用1％的乙酸搅拌下调节pH4-5，静置12-24小时，离心去残渣。离心液于50℃下真空浓缩脱水，并经冷冻干燥得到溶菌酶产品。利用该方法制备的溶菌酶可用于饲料工业。该方法具有工艺流程短，操作简便的特点，节约生产成本。
一种鸡蛋清中溶菌酶提取方法

[发明专利]鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法-CN201110090194.5无效
发明人：夏海锋;金雄华;吴璞强;饶志明 -专利权人：江南大学
申请日： 2011-04-12 - 公布日： 2011-09-21 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明公开了一种鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法。步骤如下：1)前处理，新鲜鸡蛋蛋清加入一定比例缓冲液，均匀搅拌，4℃静置过夜，去除沉淀并调至上样pH。4)冷冻干燥，将超滤脱盐并浓缩的溶液进行冷冻真空干燥，得到白色粉末，即为溶菌酶。本发明所开发的鸡蛋清溶菌酶的分离纯化方法，具有蛋清溶菌酶活性高，工艺简单，条件温和，投资较少，并可进行规模化生产，适用于食品、医药和生物技术行业。
鸡蛋清溶菌酶分离纯化方法

[发明专利]一种共分离制备鸡蛋清溶菌酶与活性蛋白的方法-CN201310080459.2有效
发明人：闻崇炜;宁德刚;徐卫东 -专利权人：江苏大学
申请日： 2013-03-14 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明公开了一种共分离制备鸡蛋清溶菌酶与活性蛋白的方法，步骤如下：在室温下收集鸡蛋清，并调节pH至5.5左右，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入分子量介于200-20000的聚乙二醇，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入饱和硫酸铵溶液，混匀后离心；分别收集离心得到的上层清液和下层清液；对上层清液进行超滤或者透析处理可以得到高纯度的鸡蛋清溶菌酶；对下层清液进行超滤或者透析处理可以得到卵白蛋白与卵转铁蛋白为主的较高纯度的其它活性蛋白本发明简单易行，成本低廉，条件温和，可以很好地保持溶菌酶品质，适用于大规模工业化生产，同时还可以得到其它活性蛋白，进一步提高生产效益。
一种分离制备鸡蛋清溶菌酶活性蛋白方法

[发明专利]一种高活性鸡溶菌酶的基因克隆、表达与应用-CN200710067728.6有效
发明人：黄继荣;傅正伟;李浙烽;余荣 -专利权人：李浙烽
申请日： 2007-03-20 - 公布日： 2007-10-10 - 主分类号： C12N15/56 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学制药技术领域，主要是一种高活性鸡溶菌酶的基因克隆、表达与应用，基因工程重组方法生产修饰的鸡蛋清溶菌酶的方法。本发明的解决方法是从数十种不同品种的鸡蛋中分离获得了一种具有高活性的鸡蛋溶菌酶，通过基因克隆手段获得了该溶菌酶基因；经过PCR扩增、酶切等操作后将基因导入到真核表达载体pPIC6αA和pGAPZαA中，并转化到毕赤酵母X－33内进行重组鸡蛋清溶菌酶表达，然后提取、纯化出该高活性溶菌酶。本发明由于采用基因工程重组技术，发酵生产基因重组高活性鸡溶菌酶，可实现大批量的工业化生产，不受原材料来源的限制，其产品具有稳定、纯净、生物活性高的特点。可广泛应用于制药，食品，饲料，化妆品等多个领域。
一种活性鸡溶菌酶基因克隆表达应用

[发明专利]重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶-CN200810229784.X有效
发明人：丛丽娜;朱蓓薇;王秀霞;谷跃峰;杨冠科;郝明;董秀萍 -专利权人：大连工业大学
申请日： 2008-12-15 - 公布日： 2009-05-06 - 主分类号： C12N15/56 文献下载
摘要：一种重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶，该方法是将海参溶菌酶基因(SEQ ID NO.1)连接到真核表达载体pPIC9K中构建重组质粒，并将所形成的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1168中，经甲醇诱导表达，然后经阳离子交换树脂层析柱纯化后得到重组溶菌酶。本发明的方法采用该基因工程菌生产溶菌酶适合大规模培养和分离提取，生产工艺不复杂，设备要求简单，生产周期短，成本比较低，无环境污染。所制得的重组海参溶菌酶比直接从海参组织中提取的溶菌酶活性提高了30％；与鸡蛋清溶菌酶相比，抑菌谱范围要广很多，尤其对于鸡蛋清溶菌酶不能作用的革兰氏阴性菌抑菌效果更明显。
重组海参溶菌酶生产方法

[发明专利]一种从鸡蛋清或全鸡蛋液中提取溶菌酶的方法-CN201610164753.5在审
发明人：姜爱莉;刘雪梅;单守水;石礼娟 -专利权人：烟台大学
申请日： 2016-03-22 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明公开了一种从鸡蛋清或全鸡蛋液中提取溶菌酶的方法，属于生物技术领域。其包括如下步骤：(1)鸡蛋清或全鸡蛋液加1～10倍重量水，混合均匀，过滤除去杂质，得到稀释液；(2)将稀释液用超滤膜超滤，得到稀液和浓液；(3)在稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～1:8，得到吸附后的树脂；(4)将吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L NaCl水溶液洗脱，得到洗脱液；(5)将洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液；(6)将超滤液干燥后，即得到所述溶菌酶。本发明工艺简单快捷，条件温和，无需复杂设备，可以获得高纯度与高生物活性的溶菌酶，可以克服现有溶菌酶制备工艺的缺点。
一种鸡蛋提取溶菌酶方法

[发明专利]用离子液体调控溶菌酶溶解度制备溶菌酶晶体的方法-CN201510789994.4在审
发明人：王占忠;党乐平;张笑;陈柏如;于小婷 -专利权人：天津大学
申请日： 2015-11-17 - 公布日： 2016-01-20 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明公开了用离子液体调控溶菌酶溶解度制备菌溶酶晶体的方法，包括以下步骤：(1)配制含NaCl的pH值为4～6的缓冲溶液；(2)加入水溶性咪唑基离子液体；加入鸡蛋清溶菌酶，使鸡蛋清溶菌酶在20～30℃下过饱和；(3)在搅拌下,将步骤(2)获得的液体冷却，过滤，晶体干燥，得溶菌酶晶体；4℃低温保藏。本发明充分利用离子液体对生物大分子分子间作用的影响来调控溶菌酶的溶解度，从而改变溶菌酶的溶解性，使溶解度增加量RM最高可达90％，该方法容易实现，操作方便。本发明所使用的水溶性离子液体有利于促进溶菌酶分子在三维空间的组装，有利于提高溶菌酶结晶率。本发明能提高收率，降低能耗，进而降低分离纯化成本。
离子液体调控溶菌酶溶解度制备晶体方法

[发明专利]一种基于生物素化抗溶菌酶金抗体的检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用-CN202211039690.2在审
发明人：曹傲能;李文浩;王海芳 -专利权人：上海大学
申请日： 2022-08-29 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： G01N33/573 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于金抗体的检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用。该生物素化抗溶菌酶金抗体可以同时结合溶菌酶和链霉亲和素，并将其应用于酶联免疫吸附法中检测鸡蛋清溶菌酶。该酶联免疫试剂盒包括：生物素化抗溶菌酶金抗体、包被有抗溶菌酶抗体的酶标板、酶标二抗、溶菌酶标准品、稀释液、显色液、洗涤液和终止液。本发明还公开了利用该试剂盒进行样品检测的方法。上述实施例试剂盒采用酶链免疫分析法中的夹心法原理，能对鸡蛋清中的溶菌酶进行定量检测。
一种基于生物素化抗溶菌酶金抗体检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用

[发明专利]利用咸蛋清制备溶菌酶、呈味基料及蛋黄油的方法-CN201210501165.8有效
发明人：崔春;赵谋明;冯琬帧;任娇艳;赵海锋 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2012-11-28 - 公布日： 2013-03-20 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明公开了利用咸蛋清制备溶菌酶、呈味基料及蛋黄油的方法。该方法以咸鸡蛋清或咸鸭蛋清为原料，通过酸、热处理沉淀蛋清蛋白，同时提高蛋清酶解敏感性，离心过滤后获得含有溶菌酶的清液和沉淀蛋白。清液经过超滤、冷冻干燥从而获得溶菌酶。利用蛋白酶对沉淀蛋白进行水解，获得水解度高、蛋白回收率高的呈味基料和蛋黄油，最终达到了咸蛋清较高程度地综合利用的目的。
利用咸蛋制备溶菌酶呈味基料及蛋黄方法

[发明专利]一种鸡蛋清过敏原分离方法-CN201810501671.4有效
发明人：麻小娟;梁汭 -专利权人：遵义医科大学
申请日： 2018-05-23 - 公布日： 2020-12-18 - 主分类号： C07K14/77 文献下载
摘要：本发明公开了一种鸡蛋清过敏原分离方法，属于蛋白分离技术领域，其步骤包含：1）鸡蛋清处理液调pH和离心配制处理，2）层析柱制备，3）层析分离，4）蛋白纯度检测，5）、蛋白质的浓缩。本发明应用阳离子交换层析法，将鸡蛋清处理后上样，通过洗脱液pH值和盐浓度调整，使四种蛋白质依次洗脱下来，经蛋白纯度检测验证，BCA法检测后计算卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类粘蛋白和溶菌酶的提取率分别为60.0%
一种鸡蛋过敏原分离方法

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