本发明提供了一种检测qPCR过程中的非特异性扩增的引物组、试剂盒以及检测方法,属于核酸的Real Time PCR检测技术领域,本发明中所述的引物组包括4条非特异性扩增正向引物;所述非特异性扩增的正向引物的核苷酸序列如本发明提供的检测非特异性扩增的试剂盒以及非特异性扩增的检测方法能够定量检测含有聚合酶(如Taq DNA聚合酶)的PCR反应系统的非特异扩增;定量检测互补同源序列对检测实时PCR非特异性扩增的影响;检测退火或者延伸温度对检测实时PCR非特异性扩增的影响;检测退火或者延伸时间对检测实时PCR非特异性扩增的影响。