本发明涉及涉及一种重组载体,特别是涉及一种用于制备治疗动脉粥样硬化药物的重组载体。具体地,所述重组载体通过将APOA I基因和PON I基因插入到腺相关病毒载体制备,其中,所述APOA I基因的序列如SEQ ID NO:1所示,PON I基因的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还涉及含有所述重组载体的重组细胞、该重组细胞的制备方法、应用、以及含有该重组细胞的组合物。
本发明涉及一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法,该方法由以下步骤组成:(1)取如SEQ ID NO.1所示的N端带有6个his标签的人端粒酶C端第936-1132片段的编码序列,经双酶切、连接反应克隆至含有绿色荧光蛋白基因GFP的穿梭质粒中,得到重组穿梭质粒;(2)将得到的重组穿梭质粒进行PmeⅠ酶切线性化,通过与骨架质粒PAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到重组腺病毒质粒;(3)将得到的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞进行重组包装,收集具有绿色荧光的细胞,得到细胞包装的重组腺病毒;(4)将得到细胞包装的重组腺病毒采用氯化铯梯度离心法进行纯化,得到重组腺病毒载体。本方法所得到的重组腺病毒载体不仅可抑制肿瘤细胞增殖,而且起效快。
本发明涉及无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用,所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,所述重组蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示;所述重组蛋白的制备方法即将所述的重组蛋白的编码基因构建到表达载体上,获得重组表达载体;将重组表达载体转化宿主细胞,培养转化的宿主细胞,使转化的宿主细胞表达产生所述无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白,之后回收并纯化所表达的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白;所述重组蛋白在制备罗非鱼抗无乳链球菌感染的疫苗中的应用一种罗非鱼口服纳米疫苗是以所述的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白作为抗原;本发明的纳米疫苗对罗非鱼具有良好的免疫保护效果。