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[发明专利]双倍和三倍读出测定系统-CN01821527.0无效
发明人：金泰国 -专利权人：哈佛学院校长同事会
申请日： 2001-10-25 - 公布日： 2005-07-13 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供测定方法用于鉴定影响目的蛋白转录活性或影响目的蛋白稳定性的化合物。三倍读出测定系统可用来鉴定影响目的蛋白转录活性的化合物，使用三株细胞系以对非特异效果如插入基因两侧的序列和细胞毒性进行控制。双倍读出测定系统评估蛋白稳定性并利用报道蛋白和目的蛋白的融合蛋白。这些测定系统在鉴定影响转录因子和肿瘤抑制物的化合物方面是特别有用的。在特别的实施方案中，肿瘤抑制物p53是在研的靶蛋白。
双倍三倍读出测定系统

[发明专利]一种提高酵母细胞表面目的蛋白展示量的方法-CN201510143945.3有效
发明人：赵景壮;徐黎明;刘淼;卢彤岩 -专利权人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
申请日： 2015-03-30 - 公布日： 2017-09-22 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高酵母细胞表面目的蛋白展示量的方法。该方法包括1)将由a凝集素的Aga2亚基的编码基因与目的蛋白的编码基因融合而成的融合基因导入能表达a凝集素的Aga1亚基的受体酵母细胞，得到重组酵母细胞；所述目的蛋白以融合蛋白的形式被展示于所述重组酵母细胞表面；2)将外源表达的由a凝集素的Aga2亚基和所述目的蛋白融合而成的融合蛋白人工锚定到已经天然展示了所述目的蛋白的所述重组酵母细胞表面。实验证明，此种方法能够明显增加酵母细胞表面的目的蛋白展示量。这一结果解决了其在口服免疫过程中抗原提呈量不足的问题，为新型口服疫苗的研制提供重要的理论基础与方法指导。
一种提高酵母细胞表面目的蛋白展示方法

[发明专利]一种蛋白质定向进化的方法-CN202310652836.9在审
发明人：方柏山;林建文;黄世阳 -专利权人：厦门大学
申请日： 2023-06-02 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供一种蛋白质定向进化的方法，包括：1)构建筛选质粒，所述筛选质粒的结构为luxpR启动子1‑核糖体结合位点‑luxR‑终止子‑luxpR蛋白基因‑核糖体结合位点‑细菌裂解蛋白基因lysis‑终止子‑luxpR启动子2‑核糖体结合位点‑目的蛋白基因‑终止子；2)采用易错PCR扩增目的蛋白基因得易错PCR产物；3)通过酶连反应将筛选质粒和易错PCR的产物连接，构建重组质粒；4)将重组质粒转化感受态细胞，涂布至含有目的蛋白基因的底物和抗生素的平板上，培养一段时间，筛选出含目的蛋白基因的突变株；5)对筛选出的含目的蛋白基因的突变株表达的突变蛋白进行测序，获得突变蛋白的序列。本发明的方法极大程度减少了蛋白质筛选工作时间和工作量。
一种蛋白质定向进化方法

[发明专利]一种将重组蛋白定位到细胞表面的简便纯化蛋白方法-CN202010253491.6有效
发明人：黄善青;沙万星;刘天意;魏天彪 -专利权人：黄善青
申请日： 2020-04-01 - 公布日： 2021-02-23 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本申请公开了一种将重组蛋白定位到细胞表面的简便纯化蛋白方法，其特征在于，通过将编码信号肽、化学法切割位点和目的蛋白的基因构建到表达载体中，使得目的蛋白表达后定位到细胞的表面；在收集的细胞中加入含有切割试剂的缓冲液重悬，离心后的上清即为目的蛋白溶液。本申请的蛋白质简易纯化方法利用信号肽的定位功能，使重组蛋白在细胞内表达后分泌并定位到细胞的表面。并利用重组蛋白中间化学剪切位点的优势，只需在用于重悬细胞的缓冲液中加入切割试剂，经过离心就可以非常简便的获取高纯度的目的蛋白。解决了现有技术中纯化蛋白需要裂解细胞以及使用各种性质的层析柱才能获取目的蛋白的繁琐步骤，操作简单，大大节省时间和成本。
一种重组蛋白定位细胞表面简便纯化方法

[发明专利]一种用植物花瓣细胞原生质体表达蛋白的方法-CN201510172958.3在审
发明人：包菲;张启翔;程堂仁;潘会堂;王佳;孙丽丹;马开峰;杨炜茹;周育真 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2015-04-13 - 公布日： 2015-08-12 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种用植物花瓣细胞原生质体表达蛋白的方法，该方法包括以下步骤：(1)以植物花瓣作为材料，酶解获得花瓣细胞原生质体；(2)将所述花瓣细胞原生质体在2-8℃静置20-40min；(3)用PEG和Ca²⁺介导法将质粒转化入原生质体，表达目的蛋白。与现有技术相比，本发明的有益效果是可以在短时间内表达目的蛋白，此原生质体蛋白表达系统可用于目的蛋白的亚细胞定位、蛋白分子的相互作用的研究。原生质体活性正常，经目的蛋白表达检测，可用于研究活体细胞内基因转录水平、蛋白表达水平、物质代谢水平的变化，是一种方便而快捷的研究目的基因功能的方法。
一种植物花瓣细胞原生质体表达蛋白方法

[发明专利]一种重组CD36蛋白在哺乳动物细胞中的生产方法-CN202011210173.8在审
发明人：雍金贵;邹刚刚;李森;王方平 -专利权人：安徽环球基因科技有限公司
申请日： 2020-11-03 - 公布日： 2021-02-12 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组CD36蛋白在哺乳动物细胞中的生产方法，具体包括如下步骤：步骤一、重组质粒构建，步骤二、转染，步骤三、收样及纯化，步骤四、纯度检测。该重组CD36蛋白在哺乳动物细胞中的生产方法，通过在构建CD36重组质粒时，添加His tag，因此简化了后期的纯化流程，一步亲和层析就能快速得到目的蛋白，整个纯化过程不足1h，全程低温操作，极大的保证了目的蛋白活性，重组质粒构建时，将密码子进行优化，使用高表达的Expi293系统对目的蛋白进行表达，优化了转染条件，极大地提高了目的蛋白的表达量，利用HPLC技术检测目的蛋白纯度，确保得到的重组CD36蛋白的纯度较高
一种重组 cd36 蛋白哺乳动物细胞中的生产方法

[发明专利]一种透皮结构域及其衍生的具有透皮作用的融合蛋白和其制备方法-CN200910046601.5在审
发明人：张舒羽 -专利权人：张舒羽
申请日： 2009-02-25 - 公布日： 2010-08-25 - 主分类号： C12N9/96 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有(K)m(R)nx结构的多肽，本发明还公开了该多肽与目的蛋白连接获得的融合蛋白。所述的多肽特别适用于将目的蛋白转导入细胞内，特别是可穿透皮肤角质层将目的蛋白转入细胞内。
一种结构及其衍生具有作用融合蛋白制备方法

[发明专利]用于目的蛋白可溶性表达的载体-CN00108742.8无效
发明人：段聚宝;邹民吉;王嘉玺;蔡欣 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所
申请日： 2000-06-02 - 公布日： 2000-11-01 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种可实现目的蛋白可溶性表达的表达载体,其包括分别表达一种含二硫键氧化还原蛋白和目的蛋白的双顺反子结构,用该表达载体转化的宿主细胞及利用所述载体或宿主细胞生产目的蛋白的方法。
用于目的蛋白可溶性表达载体

[发明专利]一种蛋白质快速定量方法-CN201310481432.4有效
发明人：夏斌;段博 -专利权人：北京大学
申请日： 2013-10-15 - 公布日： 2014-01-01 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：本发明公开了一种蛋白质快速定量方法，将目的蛋白与铁氧还蛋白rubredoxin的融合蛋白在宿主菌中表达，利用rubredoxin的吸收光谱特性，直接测定宿主菌裂解后的上清中融合蛋白的含量。该方法不仅可用于检测目的蛋白的可溶表达量，还可以用于筛选合适的蛋白表达条件，以及实时监测目的蛋白的表达情况。本发明方法定量准确，操作简便快速，成本低廉，且适用范围广泛，不受仪器和试剂限制。
一种蛋白质快速定量方法

[发明专利]一种家蚕核型多角体病毒P10蛋白的表达纯化方法-CN201210276843.5无效
发明人：张耀洲;张小蓓;杨波;陈剑清;舒特俊 -专利权人：天津耀宇生物技术有限公司
申请日： 2012-08-06 - 公布日： 2013-01-02 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种家蚕核型多角体病毒P10蛋白的表达纯化方法。本发明通过设计引物，构建重组表达载体pET-32a(+)-p10，诱导表达得到大量重组目的蛋白，然后将蛋白放于4℃，使其产生自然沉降，离心后将沉淀洗涤并溶解从而得到大量较纯的重组目的蛋白。本发明克服了现有纯化方法中的很多繁琐的步骤，利用沉淀、溶解、差速离心的方法去掉大部分杂蛋白，减少了对目的蛋白的损伤及损耗，能够利用简单的步骤得到大量较纯的目的蛋白，既简单又节省了大量的人力、物力、财力。
一种家蚕核型多角体病毒 p10 蛋白表达纯化方法

[发明专利]用于向细菌培养物上清液中分泌目的蛋白质的融合蛋白质-CN02806850.5有效
发明人： P·哈伯曼;J·埃特尔 -专利权人：安万特医药德国有限公司
申请日： 2002-02-08 - 公布日： 2004-09-15 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明涉及包含融合部分和目的蛋白质的融合蛋白质，两种蛋白质的联合导致融合蛋白质分泌至细菌宿主的上清液中，而且目的蛋白质以其正确的三维结构存在。
用于细菌培养物上清液中分泌目的蛋白质融合

[发明专利]一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用-CN201811079282.3在审
发明人：邓春泉;吴配配;李因来;周旭一 -专利权人：杭州博茵生物技术有限公司
申请日： 2018-09-17 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于蛋白工程技术领域，尤其是涉及一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用。本发明所提供的Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法所制备得到的Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体可以较好地提高目的蛋白表达量及提高目的蛋白的可溶性，目的蛋白可溶性表达将为蛋白分离纯化、蛋白活性研究奠定基础，在基因工程、蛋白质工程等生物学领域中将存在广泛的应用。
一种 msyb 融合标签大肠杆菌可溶性蛋白表达载体构建方法应用

[发明专利]一种具有催化功能的蛋白、其编码基因、以此基因为目的基因制备的重组蛋白及应用-CN202210400165.2有效
发明人：尹小建;向亚萍;陆续;陈雅惠;王晓晓 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有催化功能的蛋白、其编码基因、以此基因为目的基因制备的重组蛋白及应用。本发明在灰毡毛忍冬中发现了一种一个具有催化糖基转移功能的蛋白LmRha‑UGT，蛋白LmRha‑UGT以及以该蛋白编码基因为目的基因制备的重组蛋白可以将底物cauloside A催化加上一分子鼠李糖生成皂苷因此，蛋白LmRha‑UGT、含有蛋白LmRha‑UGT编码基因的表达载体以及以该蛋白编码基因为目的基因制备的重组蛋白可以用于制备α‑hederin。
一种具有催化功能蛋白编码基因以此目的制备重组应用

[发明专利]定量检测无细胞蛋白质合成系统目的蛋白产量及筛选高催化活性酶蛋白的方法-CN202111174703.2在审
发明人：林影;袁清焱;梁书利 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2021-10-09 - 公布日： 2022-02-08 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种定量检测无细胞蛋白质合成系统目的蛋白产量及筛选高催化活性酶蛋白的方法。该定量检测CFPS系统目的蛋白产量的方法使用分割荧光蛋白自发结合发出的荧光强度值，可快速地分析CFPS系统中目的蛋白的表达量，有利于CFPS系统中目的蛋白表达量的快速检测；同时，基于该方法，通过计算各个酶蛋白催化得到的产物量与分割荧光蛋白自发结合后的荧光强度值的比值，可快速筛选高催化活性的酶同系物，无需进行常规的大肠转化‑表达‑纯化流程，大大节省了时间与材料成本，提高了筛选速度，且避免了由于蛋白表达量过低而引起的高催化活性蛋白的漏筛风险，有利于实现高催化活性酶蛋白快速准确的筛选
定量检测细胞蛋白质合成系统目的蛋白产量筛选催化活性方法

[发明专利]一种预防SARS-CoV-2重组蛋白疫苗及其制备方法-CN202110308103.4在审
发明人：朱凤才;王祥喜;吕哲;朱玲;张黎;卞倩 -专利权人：江苏省疾病预防控制中心（江苏省公共卫生研究院）;中国科学院生物物理研究所
申请日： 2021-03-23 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： C07K14/165 文献下载
摘要：本发明涉及一种SARS‑CoV‑2重组蛋白疫苗的目的氨基酸序列、所述重组蛋白疫苗的目的基因序列、包含所述目的基因序列的真核细胞表达载体、表达所述目的氨基酸序列的细胞以及以所述目的氨基酸序列为抗原的重组蛋白疫苗本发明提供的重组蛋白疫苗能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，且可以快速制备，适用于SARS‑CoV‑2的预防。
一种预防 sars cov 重组蛋白疫苗及其制备方法