本发明公开了恩诺沙星和环丙沙星的核酸适配体及酶联适配体传感器,属于残留药物检测技术领域。所述核酸适配体由SEQ3‑1和SEQ3‑2组成,核苷酸序列如SEQ ID NO.2、3所示。所述核酸适配体在制备同时检测恩诺沙星和环丙沙星的试剂、试剂盒或传感器中的应用。一种酶联适配体传感器,包括以下组分:裂开型适配体SP1,裂开型适配体SP2,适配体互补链HD1,适配体互补链HD2等。本发明的核酸适配体是以SEQ3适配体为初始链,通过裂开时保留关键结合域得到的裂开型核酸适配体,对恩诺沙星和环丙沙星具有更高的亲和性。本发明的酶联适配体传感器可实现ENR和CIP的特异性识别,灵敏度高。