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[发明专利]一种去除扩增子测序中扩增产物残余污染的方法及其应用-CN202310128111.X在审
发明人：高利芬;周俊飞;彭海;李论;方治伟;李甜甜;陈利红;肖华锋;万人静;宋会银 -专利权人：江汉大学
申请日： 2023-02-17 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本申请涉及基因测序技术领域，尤其涉及一种去除扩增子测序中扩增产物残余污染的方法及其应用，所述方法包括：在构建待测样本的测序文库的第一步PCR反应体系中加入DNA Spike‑ins，后以第一多重扩增引物进行第一步PCR扩增，得到第一扩增产物；向所述第一扩增产物中加入第二步PCR反应体系和第二PCR扩增引物，并进行第二步PCR扩增，得到测序文库；DNA Spike‑ins依据待测样本中目标生物的基因组标记位点的序列设计并合成；第一步PCR反应体系包括dUTP和UDG；第二步PCR反应体系包括dUTP；通过在第一步PCR反应体系中加入DNA Spike‑ins，减少扩增产物残余污染的扩增，再在每步PCR反应体系中加入dUTP，并在第一步PCR反应体系中加入UDG，能降解含尿嘧啶的PCR产物，去除扩增产物残余污染。
一种去除扩增子测序中产物残余污染方法及其应用

[发明专利]抑制非特异性核酸扩增的方法-CN202180059334.4在审
发明人：山越奈奈;寺内谦太 -专利权人：东洋纺株式会社
申请日： 2021-07-21 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明提供：利用一步式RT‑PCR法抑制非特异性核酸扩增并由模板RNA特异性进行DNA扩增的手段。一实施方式中，本发明提供核酸扩增方法，其为由试样利用一步式RT‑PCR进行核酸扩增的方法，所述方法包括以下的工序：(1)制备一步式RT‑PCR反应液的工序，所述一步式RT‑PCR反应液包含试样、阴离子性聚合物、及(i)逆转录酶和DNA聚合酶或(ii)具有逆转录活性的DNA聚合酶；以及(2)将反应容器密闭后，实施一步式RT‑PCR反应的工序，前述一步式RT‑PCR反应液中的阴离子性聚合物的浓度为0.001％以上
抑制非特异性核酸扩增方法

[发明专利]一步逆转录模板转换PCR-CN201780037392.0在审
发明人：城口克之 -专利权人：国立研究开发法人理化学研究所
申请日： 2017-06-23 - 公布日： 2019-02-12 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明提供了用于更快、更容易，且具有高特异性地进行一步逆转录模板转换PCR的技术。本发明提供了使用经修饰的寡核苷酸引物扩增RNA的至少一部分区域的核酸扩增方法，所述核酸扩增方法的特征如下：核酸扩增反应包括逆转录步骤a)，其中RNA用作模板，模板转换步骤b)，其中将模板转换寡核苷酸加入到步骤a)中合成的cDNA中，和DNA扩增步骤c)，其中通过PCR进行DNA扩增，其中步骤b)中合成的模板转换cDNA用作模板；步骤a)至c)在同一反应体系中的单个阶段中进行；该经修饰的寡核苷酸在逆转录步骤a
模板转换逆转录寡核苷酸核酸扩增引物修饰封闭合成寡核苷酸引物核酸扩增反应扩增

[发明专利]一种基于一步PCR技术进行凡纳滨对虾遗传性别鉴定的方法-CN201510245995.2有效
发明人：于洋;李富花;张晓军;相建海 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 2015-05-14 - 公布日： 2018-02-13 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明是一种通过一步PCR技术即可实现对虾性别鉴定的方法，包括对虾DNA的提取、一步PCR性别鉴定引物设计、一步PCR性别鉴定PCR扩增体系建立、PCR产物检测及遗传性别的鉴定。本实验确立了用于性别鉴定的PCR引物和最佳条件，一步PCR性别鉴定引物在雌性个体会有扩增产物，而雄性个体无扩增产物，因此可以直接通过脂糖凝胶电泳即可对雌雄个体进行鉴定。本发明方法是一种快速、简便、低成本的性别鉴定方法，鉴定中不需要昂贵的基因分型仪器，仅需要PCR仪和电泳仪，并且分析的时间快、成本低，适合大规模推广。
一种基于一步 pcr 技术进行凡纳滨对虾遗传性别鉴定方法

[发明专利]一种RT-PCR一步法扩增试剂盒抗产物污染的方法-CN201610768052.2有效
发明人：张晓玮 -专利权人：广州维伯鑫生物科技有限公司
申请日： 2016-08-30 - 公布日： 2019-07-09 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：本发明公开了一种RT‑PCR一步法扩增试剂盒抗产物污染的方法，该方法为将现有一步法RT‑PCR扩增反应体系中加入特定的化学修饰的dUTP、dATP、dCTP、dGTP，以及UNG酶；同时将未经修饰的dTTP、dATP、dCTP、dGTP的终浓度均降至200nM以下，其他操作均同现有一步法RT‑PCR。本发明方法在一步法RT‑PCR扩增中，不仅具有很好的除产物污染效果，同时也保证了RT‑PCR的灵敏度，而现有防污染方法会明显降低RT‑PCR的灵敏度，影响实验的检测结果。本发明方法的灵敏度与常规的无抗污染体系的灵敏度接近，可以达到普通一步法RT‑PCR的检测效果和灵敏度，并不会降低PCR的灵敏度。
一种 rt pcr 一步法扩增试剂盒产物污染方法

[发明专利]基因突变和B-raf基因点突变V600E的一步检测方法及试剂盒-CN201110033903.6有效
发明人：陈唯军 -专利权人：陈唯军
申请日： 2011-01-28 - 公布日： 2011-08-17 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明一种基因突变的一步检测方法，该方法将酶切、PCR富集和ARMS荧光定量PCR整合在一起，通过有效的温度和时间控制，一步即可完成酶切、PCR富集和ARMS荧光定量PCR反应从而实现突变等位基因的检测
基因突变 raf 基因突变 v600e 一步检测方法试剂盒

[发明专利]核酸质谱检测DNA/RNA的产品及检测方法-CN202010799191.8在审
发明人：马晓娟;崔红慧;孟敏;马庆伟 -专利权人：北京毅新博创生物科技有限公司
申请日： 2020-08-11 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供一种用于核酸质谱的、可同时检测DNA/RNA的多重一步PCR试剂，所述一步PCR试剂是One‑Step RT‑PCR Kit，其中该试剂中的酶为双酶体系，该双酶体系包括选自鼠白血病病毒来源的消除了本发明还提供了保护所述一步PCR试剂的检测产品和检测用途。本发明能达到现有核酸质谱多重DNA检测的效果，同时RNA反转录和PCR合并为一步进行同步扩增，减少了操作步骤，降低了试剂成本。
核酸检测 dna rna 产品方法

[发明专利]一种整合多重巢式PCR一步检测多种微生物的方法-CN201910481083.3在审
发明人：徐汪节;王朝霞;潘雅君;彭丽娜;张曼 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2019-06-04 - 公布日： 2019-09-24 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种整合多重巢式PCR一步检测多种微生物的方法，包括：基于待测微生物DNA条码基因特点差异化设计NM‑PCR的通用引物和特异引物，NM‑PCR一步检测反应体系建立，即以待测微生物基因组DNA作为PCR反应模板进行参数优化，待测样本中微生物基因组快速DNA提取，以样本中基因组DNA作为模板进行NM‑PCR扩增反应，PCR反应产物进行凝胶电泳检测。本发明兼具巢式PCR的特异性和多重PCR的高通量，且仅需一步PCR反应完成上述两次PCR过程，避免传统PCR多步操作，可以快速大量检测临床样本如环境水源、食品的微生物污染情况，特异性强，通量高，大大缩短检测时间和成本
一步检测多重巢式PCR 整合微生物微生物基因组DNA 凝胶电泳检测微生物基因组差异化设计微生物污染基因组DNA 微生物DNA 参数优化待测样本环境水源临床样本特异性强特异引物通用引物巢式PCR 传统PCR 多重PCR 快速DNA 一步PCR 高通量检测条码通量样本基因

[发明专利]一种用于甲型流感病毒一步反转录定量PCR检测方法的引物、探针及试剂盒-CN201310727102.9有效
发明人：王成明;郭伟娜;李静;彭大新;龚建森;徐步;高海岗;刘金彪;B·卡腾巴克 -专利权人：扬州大学
申请日： 2013-12-25 - 公布日： 2014-05-28 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于甲型流感病毒一步反转录定量PCR检测方法的引物、探针及试剂盒。所述引物序列如SEQ ID NO.1和2所示，所述探针为SEQ ID NO.3和4。采用上述引物和探针可通过一步法FRET-PCR技术对甲型流感病毒进行检测。多数现有的检测流感病毒的技术为二步法，包括以随机引物介导的反转录（第一步）和随后的PCR（第二步）。此法使用随机引物，会产生大量的背景核酸，降低反转录效率，同时产生的背景核酸会降低PCR的效率。一步法基于特异引物的反转录系统，效率高，易操作，减少污染机会，从而极大提高了PCR的扩增效率。
一种用于流感病毒一步转录定量 pcr 检测方法引物探针试剂盒

[发明专利]一步法实时荧光RT-PCR反应缓冲液及其反应体系和PCR方法-CN201810763947.6有效
发明人：于洪波 -专利权人：深圳市梓健生物科技有限公司
申请日： 2018-07-12 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明涉及一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液及其反应体系和PCR方法,该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液包括如下原料：三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、二甲基亚砜、脱氧核糖核苷三磷酸该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液增加了NH4+和N3‑，提高PCR反应效率，适用于PCR技术的高效扩增型和灵敏检测，其不仅具有稳定性好，荧光效果佳、灵敏度高的优点。该实时荧光PCR方法，通过采用一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液配置成荧光RT‑PCR反应体系，其具有结果可靠和准确灵敏、操作简单、省时省力、降低检测成本，提高检查效率等优点。
一步法实时荧光 rt pcr 反应缓冲液及其体系方法

[发明专利]登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT-PCR一步MIX检测试剂盒及其检测方法-CN201510960677.4有效
发明人：吴成贡;田仁鹏;王茵茵;邓春兴 -专利权人：深圳生科原生物股份有限公司
申请日： 2015-12-21 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明适用于病毒检测试剂盒技术领域，提供了一种登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT‑PCR一步MIX检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒包括登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型引物和基因探针，该检测方法使用登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT‑PCR一步MIX检测试剂盒进行检测。本发明登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型RT‑PCR一步MIX检测试剂盒及其检测方法与现有技术比较，能够一步同时实现登革热Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的检测，且具有灵敏度高、特异性强、周期短、准确度高等优点。
登革热 rt pcr 一步 mix 检测试剂盒及其方法

[发明专利]乙型流感病毒一步法检测试剂盒及乙型流感病毒检测方法-CN201410614129.1有效
发明人：田仁鹏;吴成贡;高忠平;王茵茵 -专利权人：深圳市生科源技术有限公司
申请日： 2014-11-03 - 公布日： 2015-03-04 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种乙型流感病毒一步法检测试剂盒及乙型流感病毒检测方法。该乙型流感病毒一步法检测试剂盒包含RT-PCR反应液，所述RT-PCR反应液包含彼此被分开的第一反应液、含有酶的第二反应液，所述第一反应液包含用于荧光定量PCR的乙型流感病毒Bv、By亚型基因的引物探针乙型流感病毒检测方法包括提取待测样本RNA、一步法RT-PCR和将荧光信号检测结果与对照组比较判断等步骤。本发明乙型流感病毒一步法检测试剂盒能将含有乙型流感病毒Bv、By亚型基因的引物探针的第一反应液与含有酶的第二反应液在检测时直接混合进行RT-PCR，能一步法快速的检测乙型流感病毒Bv、By亚型，且能避免污染
流感病毒一步法检测试剂盒方法

[发明专利]用于多重PCR二代测序的引物组合、试剂盒及建库方法-CN202111657981.3在审
发明人：伍建;姬晓雯;庞博 -专利权人：迈基诺（重庆）基因科技有限责任公司
申请日： 2021-12-30 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12Q1/6876 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学检测领域，具体涉及一种用于多重PCR二代测序的引物组合、试剂盒及建库方法，包括提取样本DNA，基于提取的样本DNA，利用引物组合配置第一步PCR扩增体系，进行第一步PCR扩增并纯化，基于第一步PCR扩增并纯化后的纯化产物进行第二次PCR扩增并纯化，对第二次PCR扩增并纯化后的纯化产物进行电泳鉴定后进行测序分析；本发明可以有效解决Ampliseq试剂盒存在的时间成本和金钱成本高的问题
用于多重 pcr 二代引物组合试剂盒方法

[发明专利]两步乳液PCR的检测方法-CN201610553133.0有效
发明人：邵可可;闫美娜;邵启祥 -专利权人：江苏大学
申请日： 2016-07-14 - 公布日： 2020-01-24 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了两步乳液PCR的检测方法，属于生物医学与临床医学技术领域。本发明所述方法具体为首先制备油包水乳液，然后将装有油包水乳液的PCR反应管，置入PCR仪中进行第一步扩增；再将扩增产物离心弃上层油相后制备水包油乳液，分装入PCR反应管进行第二步扩增，扩增结束后进行琼脂糖凝胶电泳检测；本发明进一步提高了产量，提高基因检测的灵敏度；不仅具备乳液PCR抗干扰、特异性高的特点，还具备乳液PCR结合常规PCR法高产量的特点，同时还没有应用乙醚破乳化、提纯等过程，不经简单方便，还更经济。
乳液 pcr 检测方法

[发明专利]一步法RT-PCR预混试剂-CN201810779299.3在审
发明人：宋东亮 -专利权人：翌圣生物科技(上海)有限公司
申请日： 2018-07-16 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明提供一种一步法RT‑PCR预混试剂，其特征在于，包括：RNA转录为cDNA的试剂，以及多聚糖。本发明将RT‑PCR反应所需酶、缓冲液等试剂预混在一个反应管中，节省了RT‑PCR操作时间，并且减少了反复开盖可能带来的污染。进一步，本发明通过添加多聚糖等试剂，增强了RT‑PCR反应效率。
多聚糖一步法RT-PCR 预混试剂反应管缓冲液一步法开盖预混污染

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