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[发明专利]以多元共聚多孔微珠为载体的固定化青霉素酰化酶及制法-CN99111511.2无效
发明人：丛威;刘建国;欧阳藩 -专利权人：中国科学院化工冶金研究所
申请日： 1999-08-18 - 公布日： 2004-05-12 - 主分类号： C12N11/08 文献下载
摘要：本发明涉及一种以多元共聚多孔微珠为载体的固定化青霉素酰化酶及制法。本发明用悬浮聚合法制出多元共聚多孔微珠，经过表面改性和活化，将青霉素酰化酶结合上去而制成。本发明制备的固定化青霉素酰化酶颗粒直径为80-400μm，湿密度为1.02-1.10g/cm³；强度高，不易染菌，适合于反应器操作；其活性比用琼脂糖6B微珠制备的固定化酶活性高5-10倍，比用Eupergit C制备的固定化酶活性高2-3倍，综合性能优于已有的产品；成本低，制备方法简单，适于工业生产。
多元共聚多孔载体固定青霉素酰化酶制法

[发明专利]微生物发酵法生产青霉素酰化酶-CN89108207.7无效
发明人：王祯祥;徐冠珠;朱丽钊;韩文珍;门大鹏 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 1989-10-26 - 公布日： 1995-05-24 - 主分类号： C12N9/84 文献下载
摘要：一种用微生物发酵生产青霉素酰化酶的方法。以巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)为出发菌，经物理和化学因子反复诱变处理，得到产胞外青霉素酰化酶高产菌株。在适宜的发酵培养条件下，酶活达700-800单位/100ml，最高达820单位/100ml(NIPAB法)。发酵液经分离提纯，酶比活20单位/mg蛋白以上，可直接用于固定化酶的制备。
微生物发酵生产青霉素酰化酶

[发明专利]一种人工设计的青霉素G酰化酶原及编码序列和发酵方法-CN201310256792.4有效
发明人：赖红星;肖拥军;曹春来;陈康月;张秋华;马文柱 -专利权人：珠海联邦制药股份有限公司
申请日： 2013-06-25 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12N9/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种人工设计的青霉素G酰化酶原及编码序列和发酵方法。该青霉素G酰化酶原包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α亚基和氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的β亚基。该酶原可以加工为成熟的青霉素G酰化酶，可用于阿莫西林等β-内酰胺类抗生素的合成。编码该酶原的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，该核苷酸序列为经过优化得到，适于大肠杆菌中进行表达。通过该发酵方法得到的青霉素G酰化酶的酶活，对于组成型表达菌株能达到28000U/L，对于诱导型表达菌株能达到35000U/L。
一种人工设计青霉素酰化酶原编码序列发酵方法

[发明专利]在可回用两水相体系中利用固定化青霉素酰化酶催化合成头孢丙烯的方法-CN201310341198.5有效
发明人：曹学君;祝超慧;唐子安;赵志炎;李玉丹;陈佳伶 -专利权人：南通康鑫药业有限公司;华东理工大学
申请日： 2013-08-07 - 公布日： 2013-12-18 - 主分类号： C12P35/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种可回用两水相体系中利用固定化青霉素酰化酶催化合成头孢丙烯的方法，包括将头孢丙烯母核、酰化试剂溶解在两水相聚合物溶液中，母核与酰化试剂摩尔比为1：1～4，加入固定化青霉素G酰化酶后再加入两相分配调节剂，调节pH＝4.5～7，在5～30℃反应1～80h，酶在反应体系中的浓度为50～150U/ml。本发明的方法可有效抑制青霉素酰化酶的水解活性，从而降低酰化试剂的水解和产物的水解程度。与用水作为介质的方法相比，本方法使得产物与酶分配在不同的两种水相中，反应物充分与酶接触，使得合成/水解比值得到了很大提高，头孢丙烯的产率可提高20%，最高得率达到78%。
可回用两水相体系利用固定青霉素酰化酶催化合成头孢丙烯方法

[发明专利]用于制备氨苄青霉素的方法-CN98807876.7有效
发明人： H·M·莫迪;W·H·J·贝特森 -专利权人： DSM有限公司
申请日： 1998-05-25 - 公布日： 2003-07-23 - 主分类号： C12P37/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于制备氨苄青霉素的方法，其中用苯基甘氨酸衍生物使6-氨基青霉烷酸(6-APA)进行酶酰化反应，反应混合物中所含6-APA与氨苄青霉素的总浓度大于250mM，溶液中6-APA的浓度被保持在低于300mM的水平且所用酰化剂与6-APA的摩尔比小于2.5。
用于制备氨苄青霉素方法

[发明专利]一种酶法合成阿莫西林的方法-CN201811490254.0有效
发明人：高悦译;刘恩桂;陈新颖 -专利权人：广州市力鑫药业有限公司;广州中泽医药科技有限公司
申请日： 2018-12-06 - 公布日： 2021-08-20 - 主分类号： C12P37/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶法合成阿莫西林的方法，包括以下步骤：(1)将固定化青霉素G酰化酶用蒸馏水清洗后用盐酸浸泡；(2)将对羟基苯甘氨酸甲酯和6‑APA混合均匀后用盐酸浸泡，然后加入纯净水；(3)固定化青霉素G酰化酶、对羟基苯甘氨酸甲酯和6‑APA混合后进行反应，得到阿莫西林混悬液；(4)阿莫西林混悬液降温，滴加盐酸至溶液清亮，抽滤后养晶，洗涤干燥，得到阿莫西林产品。在反应过程中用盐酸对固定化青霉素G酰化酶进行了短时间的浸泡，不仅加快反应速度，缩短反应时间，还提高了产物的收率和纯度；反应体系中加入质量比为3:1的蔗糖和组氨酸，提高了产品的稳定性。
一种合成阿莫西林方法

[发明专利]突变青霉素G酰化酶、其重组表达质粒及转化的工程菌株-CN200610118042.0有效
发明人：黄鹤;张磐;王金刚;袁中一;杨晟;姜卫红 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2006-11-08 - 公布日： 2008-05-14 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明通过基因定点突变的方法获得的青霉素G酰化酶合成性能提高的基因、突变质粒、工程菌，并可在将工程菌发酵纯化后，获得青霉素G酰化酶合成性能提高的突变酶。本发明先用Kpn I和Pst I双酶切pUC18，然后用T4 polymerase补平，自连得到pZ01；用EcoR I酶切pZ01，再和同样用EcoR I酶切的pEES102连接，获得重组质粒pY020；再以pY020为模板质粒，利用TaKaRa MuTanBEST Kit对B.megaterium PGA进行定点突变，从而获得青霉素G酰化酶合成性能提高的突变质粒。将该工程菌放大发酵，纯化后可获得合成产物/水解产物的比值及7－ADCA最大转化率提高的突变酶。
突变青霉素酰化酶重组表达质粒转化工程菌株

[发明专利]酶催化“一锅法”制备β－内酰胺抗生素的方法-CN200510011635.2有效
发明人：冯胜昔 -专利权人：广州白云山制药股份有限公司广州白云山化学制药厂
申请日： 2005-04-26 - 公布日： 2006-11-01 - 主分类号： C12P37/00 文献下载
摘要：本发明涉及抗生素的制备方法，更具体地说，涉及采用酶催化“一锅法”制备β－内酰胺抗生素(即头孢菌素和青霉素)的方法。在水或水与醇混合物介质中，在游离或/和固定化的青霉素酰化酶存在下，通式(III)化合物与通式(V A)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(I)的头孢菌素；或通式(IV)化合物与通式(VA)的酯或通式(VB)的酰胺反应，得到通式(II)的青霉素。
催化一锅制备内酰胺抗生素方法

[发明专利]一种快速测定青霉素酰化酶酶活的方法-CN200710048113.9无效
发明人：张嗣良;施晓疌;储炬;庄英萍;王永红;袁中一 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2007-11-13 - 公布日： 2008-06-18 - 主分类号： G01N33/543 文献下载
摘要：本发明涉及酶活的检测方法，公开了一种快速测定青霉素酰化酶酶活的方法，在不破碎细胞的情况下使用酶标仪采用动态法检测酶活，获得动态反应曲线，用动态曲线线性回归后获得的斜率及截距计算酶活。此外，还对温度对酶活测定的影响作了简单研究，并设置了修正系数方便于室温的快速测定。本发明的方法步骤简单，准确度高，节约成本，且适合检测高密度发酵生产的青霉素酰化酶酶活，具有很好的推广价值。
一种快速测定青霉素酰化酶酶活方法

[发明专利]青霉素G酰化酶突变体及其在酶法合成头孢孟多中的应用-CN202010488868.6有效
发明人：何冰芳;李安妮;储建林;吴斌;汲晓琪;彭智熠 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2020-06-02 - 公布日： 2022-01-18 - 主分类号： C12N9/84 文献下载
摘要：本发明涉及青霉素G酰化酶突变体及其在酶法合成头孢孟多中的应用。通过半理性设计的酶工程改造技术对木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)PX02来源的青霉素G酰化酶进行突变，获得了一种反应活性更高，反应速率更快，转化率更好的PGA突变体
青霉素酰化酶突变体及其合成头孢中的应用

[发明专利]头孢菌素中间体7-ADCA的制备方法-CN200810051386.3无效
发明人：杨石 -专利权人：杨石
申请日： 2008-11-05 - 公布日： 2010-06-16 - 主分类号： C07D501/18 文献下载
摘要：本发明以青霉素G钾盐为原料，经过氧乙酸氧化成青霉素G亚砜，质量收率达到85％以上；以氢溴酸-吡啶盐为催化剂，六甲基硅脲为羧基保护试剂，扩环重排得到头孢G酸，粗产品质量收率达到90％；再经过固定化的青霉素G酰化酶催化水解侧链后制得了7-ADCA。以青霉素G钾盐计，总质量收率达到40％以上。
头孢菌素中间体 adca 制备方法

[发明专利]青霉素发酵发生的改进方法-CN98804450.1有效
发明人： P·T·科克霍夫;R·H·奎博斯;H·G·M·沃拉温 -专利权人： DSM公司
申请日： 1998-04-22 - 公布日： 2000-05-17 - 主分类号： C12P37/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于从发酵生产的N－取代青霉素化合物制备6－氨基青霉烷酸(6－APA)的改进的方法,包含将存在于发酵培养基或发酵液中的N－取代青霉素化合物萃取入有机溶剂中、反萃取N－取代青霉素化合物入水中、用青霉素酰化酶对水相的处理及通过结晶从由此得到的转化溶液中分离6－APA。
青霉素发酵发生改进方法

[发明专利]一种青霉素G酰化酶的突变体及其制备方法和应用-CN201510638013.6有效
发明人：许岗;黄斌;郭宁;周晶辉;赵强;曾红宇 -专利权人：湖南福来格生物技术有限公司
申请日： 2015-09-30 - 公布日： 2018-03-27 - 主分类号： C12N9/84 文献下载
摘要：本发明提供了一种青霉素G酰化酶的突变体及其制备方法和应用。通过非理性及半理性设计的酶工程改造技术对大肠埃希氏菌ATCC 11105来源的青霉素G酰化酶进行突变，获得了一种反应活性更高，反应速率更快，转化率更好，青霉素G浓度耐受性更强，底物残留更少，苯乙酸浓度耐受性更高的本发明获得的PGA‑6突变体活力提高了102倍，底物青霉素G耐受浓度提高到30％，苯乙酸耐受浓度提高到20mmol/L。同时，固定化突变体PGA‑6应用于pH8.0，25℃条件下裂解25％浓度的青霉素G制备6‑APA的反应时间缩短到55分钟，底物转化率在98％以上，且连续使用600批次以上，活力无明显的损失，具有很好的操作稳定性
一种青霉素酰化酶突变体及其制备方法应用

[发明专利]一种制备高活性固定化青霉素酰化酶杂化载体的方法-CN200610030360.1有效
发明人：王筠松;石变芳;卢冠忠;郭杨龙;王艳芹;郭耘;刘晓晖;张志刚 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2006-08-24 - 公布日： 2007-02-07 - 主分类号： C12N11/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备高活性固定化青霉素酰化酶杂化载体的方法，包括下列步骤：将环己烷、聚乙二醇辛基苯基醚和正己醇混合均匀，在搅拌下加入氨水，配制成透明澄清的反相微乳液，搅拌15min后向其中加入正硅酸乙酯正硅酸乙酯和硅烷化试剂的体积比V_{正硅酸乙酯}∶V_{硅烷化试剂}＝0.5～9.5∶0.5～9.5，水解缩合反应22h，用丙酮洗涤，室温真空干燥后，得到所述高活性固定化青霉素酰化酶杂化载体本发明制备的杂化载体，富含有机基团，采用适宜的活化负载方式，可将青霉素酰化酶以共价方式或吸附方法固定在载体上，从而获得高于其他载体制备的固定化酶的活性，并且具有良好地操作稳定性和贮存稳定性。
一种制备活性固定青霉素酰化酶杂化载体方法

[发明专利]经二价锰离子掺杂的磁性固定化青霉素G酰化酶的制备-CN202110857261.5有效
发明人：陈振斌;涂鸿轶;火婷;柳春丽;李慧 -专利权人：兰州理工大学
申请日： 2021-07-28 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12N11/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种经二价锰离子掺杂的磁性固定化青霉素G酰化酶的制备，该方法包括以下步骤：⑴制备掺杂二价锰离子的磁性纳米粒子四氧化三铁@β‑环糊精；⑵将3‑缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液与掺杂二价锰离子的磁性纳米粒子四氧化三铁即得掺杂二价锰离子的磁性纳米粒子四氧化三铁@β‑环糊精‑g‑3‑缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷载体；⑶在磷酸盐缓冲溶液溶解的掺杂二价锰离子的磁性纳米粒子四氧化三铁@β‑环糊精‑g‑3‑缩水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷载体加入游离青霉素G酰化酶溶液，振荡反应后真空干燥，即得掺杂二价锰离子的磁性固定化青霉素G酰化酶载体。本发明可有效提高酶活回收率。
二价离子掺杂磁性固定青霉素酰化酶制备