本发明公开了一种重组转氨酶及其制备方法和应用。一种高活性的重组转氨酶突变体，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因如SEQ ID NO.1所示。一种制备所述的重组转氨酶的方法，包括发酵培养含有上述编码基因的基因工程菌，以及收集和制备重组转氨酶。本发明所述的重组转氨酶应用于不对称合成手性胺类化合物，特别是用于合成西他列汀中间体(R)‑3‑氨基‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑丁酸甲酯。
本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及一种可拆分外消旋胺制备手性胺的转氨酶及其编码基因与应用。转氨酶是如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，转氨酶的基因是如SEQ ID NO.2所示的碱基序列。采用本发明所述转氨酶作为催化剂来拆分外消旋胺，与化学法相比，有着高的选择性和转化率，且反应条件温和，对环境无污染，对于医药及化工领域手性胺的高效、绿色合成具有重大意义。
本发明提供了一种转氨酶突变体及其应用。其中，转氨酶突变体在SEQ ID NO：1所示序列基础上发生氨基酸突变，氨基酸突变为W60Y、Y168A、V379W、V379L、V379M、C418Q及C418W的单点突变或组合突变，这些转氨酶突变体的活性、稳定性、对温度、pH及有机溶剂耐受性提高，解决了现有技术中转氨酶在极端环境中的耐受性差的问题，适用于酶工程领域。
本发明公开了一种基于祖先序列重建的ω‑转氨酶突变体，涉及分子生物学技术领域。由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的ω‑转氨酶突变所得，所述ω‑转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6所示。与野生型酶相比，ω‑转氨酶突变体的半衰期均在24h以上，而野生型仅为6.90min，突变体的半失活温度分别为49.00℃和49.03℃，比野生型(37.89℃)提高了约11℃，热稳定性显著提高。
