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[发明专利]苹果酸酶重组菌及其构建方法和应用-CN201611046752.7有效
发明人：刘立明;高聪;陈修来;胡贵鹏;郭亮;刘佳;罗秋玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-11-23 - 公布日： 2019-05-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种苹果酸酶重组菌的构建方法，包括以下步骤：对NADP依赖型苹果酸酶基因进行突变，得到苹果酸酶突变基因；将苹果酸酶突变基因与载体连接，然后在宿主菌中重组表达，得到苹果酸酶重组菌；本发明同时还请求保护采用上述方法构建的苹果酸酶重组菌以及一种生产L‑苹果酸的方法，包括以下步骤：将上述苹果酸酶重组菌在发酵培养基中进行好氧发酵；当苹果酸酶重组菌生长至OD₆₀₀为0.4‑0.8时，进行诱导，然后再进行微好氧发酵。本发明所获得的苹果酸酶重组菌具有较高的催化丙酮酸羧化反应的能力，可显著提高菌体生产苹果酸的能力。
苹果酸酶重组菌构建突变基因苹果酸苹果酸酶基因发酵培养基微好氧发酵催化丙酮好氧发酵载体连接重组表达羧化反应宿主菌依赖型菌体突变诱导生产生长应用

[发明专利]一种苹果酸酶基因SgME1及其应用-CN201310290850.5有效
发明人：田江;廖红;孙丽莉 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2013-07-11 - 公布日： 2014-01-22 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种编码苹果酸酶的基因SgME1及其应用。该苹果酸酶基因SgME1的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。SgME1基因调控柱花草苹果酸的合成，过量表达SgME1促进酵母、菜豆毛根和拟南芥苹果酸的合成，并增加其耐铝性。
一种苹果酸酶基因 sgme1 及其应用

[发明专利]一种苹果酸酶基因及其重组表达载体-CN201510270913.X有效
发明人：高春红;张琦;李凌彦;魏云林;林连兵;季秀玲 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2015-05-26 - 公布日： 2017-07-07 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种苹果酸酶基因及其重组表达载体。本发明公开了一种从深黄被孢霉M6‑22中分离的编码苹果酸酶的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO2所示，通过构建重组载体并在大肠杆菌BL21中表达，表达产物具有苹果酸酶功能。
一种苹果酸酶基因及其重组表达载体

[发明专利]一种苹果酸酶基因及其重组表达载体-CN201510032989.9有效
发明人：张琦;崔锦锦;李凌彦;魏云林;林连兵;季秀玲 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2015-01-23 - 公布日： 2018-03-06 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种苹果酸酶基因及其重组表达载体，本发明公开了一种从深黄被孢霉M6‑22中分离的编码苹果酸酶的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO2所示，通过构建重组载体并在大肠杆菌BL21中表达，表达产物具有苹果酸酶功能。
一种苹果酸酶基因及其重组表达载体

[发明专利]一种产DHA的裂殖壶菌基因工程菌及其构建方法和应用-CN201510417269.4有效
发明人：黄和;莫凯强;纪晓俊;任路静;庄小燕;李干禄 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2015-07-15 - 公布日： 2018-05-25 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明提供一种产DHA的裂殖壶菌基因工程菌及其构建方法和应用，属于生物化工技术领域。所述产DHA的裂殖壶菌基因工程菌，是在裂殖壶菌基因组中整合有苹果酸酶基因的表达盒的工程菌，所述苹果酸酶基因的表达盒依次含有启动子、苹果酸酶基因和终止子。所述裂殖壶菌基因工程菌的构建方法，包括：构建含有苹果酸酶基因的表达盒的同源重组片段；将所述同源重组片段导入裂殖壶菌进行同源重组，筛选获得所述裂殖壶菌基因工程菌。本发明还提供采用所述裂殖壶菌基因工程菌制备DHA的方法，采用种子培养基培养裂殖壶菌基因工程菌，然后转接入发酵培养基制备DHA。本发明裂殖壶菌基因工程菌能够高产DHA，构建方法简单、效率高、成本较低。
裂殖壶菌基因工程菌构建苹果酸酶基因同源重组表达盒制备种子培养基培养生物化工技术发酵培养基工程菌基因组启动子终止子整合应用高产筛选

[发明专利]杜氏盐藻苹果酸酶过表达工程藻及其构建方法与应用-CN202210632402.8在审
发明人：姜建国;何羽婧;陈浩宏;梁明华;谢珊蓉;戴聚良;吴婧璇 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2022-06-07 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： C12N1/13 文献下载
摘要：本发明公开了一种杜氏盐藻苹果酸酶过表达工程藻及其构建方法与应用，属于分子克隆领域。本发明工程藻通过在杜氏盐藻导入苹果酸酶基因ME1和ME2中的至少一种得到；其中，所述的ME1编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的ME2编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明构建的苹果酸酶ME1过表达的工程藻ME1OE，油脂含量较野生藻提高了30.49％；苹果酸酶ME2过表达的工程藻ME2OE油脂含量提高了36.32％。本发明证明了结果表明过表达苹果酸酶可显著增加原始盐藻细胞中油脂含量，可在实际生产中进行应用。
杜氏盐藻苹果酸酶表达工程及其构建方法应用

[发明专利]苹果酸酶1在制备防治肺动脉高压的药物中的应用-CN202210723098.8有效
发明人：王婧;邢岩江;罗娅;齐先梅 -专利权人：中国医学科学院基础医学研究所
申请日： 2022-06-21 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： A61K45/00 文献下载
摘要：本发明属于生物医药技术领域，具体涉及苹果酸酶1抑制剂在制备防治肺动脉高压的药物、作为检测和/或治疗肺动脉高压的标志物中的应用。所述苹果酸酶1的蛋白水平和/或酶活性在肺组织中显著增加，因而，可以作为检测或治疗肺动脉高压的标志物。同时，所述苹果酸酶1抑制剂可以通过降低右心室收缩压和右心室肥厚指数，改善肺动脉高压患者的肺循环阻力和右心室受累/右心衰竭，因而苹果酸酶1抑制剂可以作为治疗肺动脉高压的治疗靶点，增加苹果酸酶1和苹果酸酶1
苹果酸酶制备防治肺动脉高压药物中的应用

[发明专利]构建基因工程菌以增强微生物发酵甘油产1,3-丙二醇的方法-CN201110069870.0有效
发明人：刘德华;周胜;罗吉安 -专利权人：清华大学
申请日： 2011-03-22 - 公布日： 2011-09-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种构建基因工程菌以增强微生物产1，3-丙二醇的方法，包括构建插入苹果酸酶基因的表达载体；将插入苹果酸酶基因的表达载体转入产生1，3-丙二醇的宿主菌中；在发酵培养过程中添加诱导剂诱导苹果酸酶基因过量表达其特点在于：所构建的基因工程菌较出发菌在发酵过程中表达了更多的苹果酸酶，促进了丙酮酸到苹果酸的转化，从而促进了三羧酸循环，使菌体产生更多的还原性辅酶NADH和能量ATP，提高了菌体内1，3-丙二醇氧化还原酶的活性
构建基因工程增强微生物发酵甘油丙二醇方法

[发明专利]一种过表达苹果酸酶基因的重组载体及应用-CN201410329101.3在审
发明人：李宏业;薛姣;杨维东;刘洁生 -专利权人：暨南大学
申请日： 2014-07-10 - 公布日： 2014-11-05 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种过表达苹果酸酶基因的重组载体及应用。包括筛选标记基因表达盒及目的基因表达盒；所述的筛选标记基因表达盒包括抗性筛选基因，在抗性筛选基因的上游融合了大肠杆菌P1启动子，抗性筛选基因的下游融合了大肠杆菌ccdB终止子；所述的目的基因表达盒包括三角褐指藻fcpC基因启动子、苹果酸酶基因、三角褐指藻fcpA基因终止子及一个Omega leader序列，所述的Omega leader序列在三角褐指藻fcpC基因启动子的下游。通过过表达苹果酸酶基因能够显著地提高微藻细胞内的脂质含量，为生物能源的研究奠定了基础。
一种表达苹果酸酶基因重组载体应用

[发明专利]一株固定CO2产苹果酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用-CN201911317890.8有效
发明人：刘立明;胡贵鹏;陈修来;马丹蕾;刘佳;罗秋玲;高聪;宋伟 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-12-19 - 公布日： 2021-12-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株固定CO2产苹果酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用，属于发酵领域。所述工程菌是对大肠杆菌Escherichia coli MG1655进行基因工程改造获得的菌；所述基因工程改造为敲除富马酸还原酶基因、富马酸酶基因、乳酸脱氢酶基因和乙醇脱氢酶基因，并游离过表达甲酸脱氢酶、乙酰辅酶A合成酶、酰化乙醛脱氢酶、甲醛裂合酶、二羟基丙酮激酶、苹果酸酶和亚磷酸氧化还原酶，获得菌株GH0407。上述菌株用于发酵生产苹果酸，以CO2和葡萄糖作为共底物厌氧发酵72h，苹果酸产量达到39g/L，得率为1.53mol/mol，原始出发菌株不积累苹果酸。
固定 co2 苹果酸大肠杆菌工程构建应用

[发明专利]在转基因耶氏酵母属中表达胞浆苹果酸酶以提高脂质产量-CN201380017157.9无效
发明人： D.J.马库尔;Q.Q.朱;Z.薛 -专利权人：纳幕尔杜邦公司
申请日： 2013-03-15 - 公布日： 2015-01-28 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本文公开了转基因耶氏酵母属(Yarrowia)菌种，其包含编码胞浆苹果酸酶的多核苷酸、所述耶氏酵母属菌种细胞干重的至少约35重量％的脂质含量、和经工程化的多不饱和脂肪酸(PUFA)生物合成途径，其中所述胞浆苹果酸酶的过表达提高脂质含量
转基因酵母表达苹果酸酶提高产量

[发明专利]一种苹果酸酶基因RKME2及其重组表达载体-CN201510784117.8有效
发明人：张琦;王俊;季秀玲;魏云林;林连兵 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2015-11-16 - 公布日： 2018-10-23 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种从红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235中分离的编码苹果酸酶的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，通过构建重组载体并在大肠杆菌BL21中高效表达，表达产物具有苹果酸酶功能。
一种苹果酸酶基因 rkme2 及其重组表达载体

[发明专利]一种苹果酸酶基因RKME1及其重组表达载体-CN201510434176.2有效
发明人：张琦;崔锦锦;张慧君;季秀玲;魏云林;林连兵 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2015-07-23 - 公布日： 2018-04-24 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开了一种从红冬孢酵母（Rhodosporidium kratochvilovae）YM25235中分离的编码苹果酸酶的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，该基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO2所示，通过构建重组载体并在大肠杆菌BL21中高效表达，表达产物具有苹果酸酶功能。
一种苹果酸酶基因 rkme1 及其重组表达载体

[发明专利]一种产乙醇酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用-CN202010041479.9有效
发明人：刘伟丰;杨梦杰;朴晓宇;陶勇 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2020-01-15 - 公布日： 2022-06-14 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明首先公开了重组大肠杆菌，其与受体大肠杆菌相比，蛋白质A的基因的表达量和/或含量和/或活性，和/或蛋白质B的基因的表达量降低和/或含量和/或活性；所述蛋白质A为如下至少一种：苹果酸硫激酶；苹果酰辅酶A裂解酶；乙醛酸还原酶；异柠檬酸裂解酶；异柠檬酸脱氢酶激酶/磷酸酶；所述蛋白质B为如下至少一种：NAD依赖型‑苹果酸酶；NADP依赖型‑苹果酸酶；苹果酸合酶A；乙醛酸途径转录抑制因子；乙醇酸氧化酶。
一种乙醇重组大肠杆菌及其构建方法应用

[发明专利]一种获取非转基因的里氏木霉定向基因工程改良株的方法和应用-CN202210512199.0在审
发明人：王玮 -专利权人：王玮
申请日： 2022-05-12 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种获取非转基因的里氏木霉定向基因工程改良株的方法和应用，属于生物工程技术领域。本发明首次鉴定出里氏木霉内源的四碳二元羧酸转运蛋白、丙酮酸羧化酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、葡萄糖转运蛋白四种功能的基因；并首次通过改造上述四种内源基因的表达强度，构建出大量生产L‑苹果酸的基因工程改良株利用所述改良株发酵生产L‑苹果酸，其最高产量可超过90g/L。所述改良株为非转基因物种，不含有任何异源基因和筛选标记，其生产的L‑苹果酸为非转基因食品，可应用于非转基因食品行业。本发明公开的改良株的获取方法，为微生物发酵生产L‑苹果酸提供了新的方法，也为转基因安全和无标记基因编辑提供了很好的研究思路。
一种获取转基因里氏定向基因工程改良方法应用

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