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[发明专利]同时表达A型、O型和Asia-1型口蹄疫病毒VP1基因重组腺病毒、构建方法及应用-CN201711348735.3有效
发明人：杨玉艾;任红涛;刘健鹏;邹权;齐亚辉 -专利权人：云南农业大学动物医学院;北京生科基因科技有限公司;榆林市动物疫病预防控制中心;垫江县动物卫生监督所;陕西省动物卫生监督所
申请日： 2017-12-15 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明公开了一种同时表达A型、O型和Asia‑1型口蹄疫病毒VP1基因重组腺病毒、构建方法及应用，属于生物技术领域，本发明在腺病毒中插入O型口蹄疫病毒VP1基因、A型口蹄疫病毒VP1基因和Asia‑1型口蹄疫病毒VP1基因，将各个启动因子插入到腺病毒穿梭载体中形成重组腺病毒穿梭载体，将腺病毒穿梭载体酶切线性化转化到含有腺病毒骨架载体的大肠杆菌感受态细胞中，形成重组腺病毒骨架载体，将重组腺病毒骨架载体线性化后，转染人胚胎肾细胞中，包装出重组腺病毒，该重组腺病毒应用于制备防疫或治疗口蹄疫的药物或试剂中。本发明的重组腺病毒一次培养就能达到预防三种血清型口蹄疫的发病，大量节约了人工和成本。
同时表达 asia 口蹄疫病毒 vp1 基因重组病毒构建方法应用

[发明专利]表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体、重组腺病毒、方法及应用-CN202010466094.7在审
发明人：陈平;张利娟;张婷婷;李娜;杨文清;沈亚钕;王书芳;李楠 -专利权人：嘉铭（固安）生物科技有限公司
申请日： 2020-05-28 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体、重组腺病毒、方法及应用，其中，所述表达非洲猪瘟病毒p34基因的重组腺病毒载体包括腺病毒骨架载体和插入腺病毒骨架载体多克隆位点的非洲猪瘟病毒p34基因，所述p34基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述腺病毒骨架载体为pAd5；其中，所述重组腺病毒由本发明所公开的重组腺病毒载体转染哺乳动物细胞所获得。本发明首次利用重组腺病毒表达系统表达非洲猪瘟病毒的p34蛋白，实现了p34蛋白的高水平表达，为非洲猪瘟病毒核酸疫苗的研制提供了病毒模型，为进一步开发基因工程疫苗奠定了基础。
表达非洲猪瘟病毒 p34 基因重组载体方法应用

[发明专利]一套快速准确的三质粒溶瘤腺病毒重组包装系统Ad5MixPlus及其应用-CN201910549429.9有效
发明人：苏英晗 -专利权人：江苏万戎生物医药科技有限公司
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明涉及一套快速准确的三质粒溶瘤腺病毒重组包装系统Ad5MixPlus及其应用。所述系统由3个腺病毒重组质粒组成，其核心技术就是巧妙地在第一个5型腺病毒右臂骨架质粒大载体上装载两套不同的位点重组序列，再由两个小的穿梭质粒分别提供右臂改造的Hexon/E3/Fiber序列和左臂肿瘤特异性启动子控制的E1a表达框，避开了对腺病毒骨架大载体改造的困难和障碍。经过两轮位点特异性重组，准确快速地包装出理想的溶瘤腺病毒。本发明将病毒重组包装过程简单化、快速化，解决了腺病毒骨架大载体改造的挑战性难题，能快速重组并筛选到需要的溶瘤腺病毒，非常适合产业化需要，所包装的溶瘤腺病毒具备显著的抗肿瘤活性。
一套快速准确质粒溶瘤腺病毒重组包装系统 ad5mixplus 及其应用

[发明专利]一种新的腺病毒载体及其生产方法-CN201310064880.4有效
发明人：孙在仁 -专利权人：山东维真生物科技有限公司
申请日： 2013-03-18 - 公布日： 2013-06-12 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明涉及一种新的腺病毒载体及其生产方法。该载体生产包括两个主要步骤，一是把外源的基因克隆到穿梭载体里面，二是穿梭载体和腺病毒骨架载体的重组。本发明所用穿梭载体是在pShuttle-CMV载体基础上改进的—pCMV-FH；所用腺病毒骨架载体是在现有腺病毒骨架载体内克隆进了一个表达ISceI的酵母基因；所用重组菌株是SW102。本发明穿梭载体克隆方法及穿梭载体和腺病毒骨架载体的重组方法均采用高通量的生产方法。采用高通量穿梭载体的克隆方法和高通量的重组方法重复操作至第五轮就可以把99%的穿梭载体克隆重组到腺病毒载体之内。本发明的高通量腺病毒载体生产方法重组效率高达85-90%，大幅简化实验步骤，时间也大大缩短，且实验成本明显降低。
一种病毒载体及其生产方法

[发明专利]分泌型猪圆环病毒2型重组腺病毒及其构建方法-CN201710607801.8有效
发明人：童德文;黄勇;李德龙 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2017-07-24 - 公布日： 2020-05-12 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供一种分泌型猪圆环病毒2型重组腺病毒及其构建方法。所述重组腺病毒是利用重组腺病毒质粒进行腺病毒包装而得到的，所述重组腺病毒质粒由分泌型猪圆环病毒2型重组腺病毒穿梭载体与腺病毒骨架载体同源重组形成。重组腺病毒穿梭载体插入有目的基因片段，包括Intron A、共表达分泌型CD40L、PCV2Cap和GMCSF，以及WPRE。该重组腺病毒结合两种不同作用机制，可增强腺病毒载体疫苗免疫原性。
分泌圆环病毒重组及其构建方法

[发明专利]复制缺陷型重组腺病毒Ad41载体系统及其应用-CN200810126855.3有效
发明人：鲁茁壮;屈建国;洪涛 -专利权人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
申请日： 2008-07-01 - 公布日： 2010-01-06 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明涉及基因治疗和重组疫苗领域中一种复制缺陷型重组腺病毒Ad41载体系统及其应用。具体而言，本发明提供的载体系统包括1个骨架质粒、1个穿梭质粒和1个包装细胞系，其中所述骨架质粒含有缺失了腺病毒包装所需编码区的腺病毒Ad41基因组，所述穿梭质粒含有用于插入目的基因的多克隆位点以及用于与骨架质粒发生同源重组的腺病毒Ad41基因组片段，所述包装细胞系在细胞基因组中整合了所述腺病毒Ad41包装所需基因并能稳定表达该包装基因。本发明产生的重组Ad41病毒在肠道基因治疗和口服重组疫苗研究中有广阔的应用前景。
复制缺陷重组病毒 ad41 载体系统及其应用

[发明专利]重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用-CN201810206375.1有效
发明人：孟二红 -专利权人：北京多赢时代转化医学研究院
申请日： 2018-03-13 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了重组溶瘤腺病毒、用于制备该重组溶瘤腺病毒的重组溶瘤腺病毒载体及其构建方法和应用，所述重组溶瘤腺病毒载体的构建方法包括以下步骤：在腺病毒质粒中引入编码RGD肽的基因，构成靶向性骨架质粒；将shRNA抗肿瘤干细胞标志分子ALDH1A1的基因序列以及促凋亡基因PUMA的基因序列连接至第一穿梭质粒，构成第二穿梭质粒；将人端粒逆转录酶启动子连接至第二穿梭质粒，构成第三穿梭质粒；将第三穿梭质粒与靶向性骨架质粒在大肠杆菌中重组为重组溶瘤腺病毒载体；该方法构建出的重组溶瘤腺病毒载体线性化后转染至病毒包装细胞中进行包装、扩增、纯化后获得重组溶瘤腺病毒，从而能够有效的识别并杀死多种恶性肿瘤的肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞。
重组溶瘤腺病毒用于制备载体及其构建方法应用

[发明专利]表达小干扰RNA的VA1缺失的腺病毒载体及其构建方法和应用-CN200910022759.9无效
发明人：夏海滨;张伟锋;郑晓晶;赵俊丽;王东阳 -专利权人：陕西师范大学
申请日： 2009-06-01 - 公布日： 2009-10-21 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：一种表达小干扰RNA的VA1缺失腺病毒载体，重组腺病毒载体中VA1部分基因缺失，不能产生功能性VA1基因，插入了siRNA表达元件及报告基因。其构建方法为：构建VA1缺失的穿梭载体，用VA1缺失的穿梭载体与腺病毒载体骨架按摩尔比3∶1在E.coli BJ5183中同源重组获得VA1基因突变腺病毒载体骨架，构建表达siRNA的腺病毒E1区shuttle载体，构建表达VA1慢病毒载体并感染HEK293细胞以及通过潮霉素抗性筛选获得稳定表达VA1基因的重组HEK 293细胞系，构建表达小干扰RNA的VA1缺失腺病毒载体。表达小干扰RNA的VA1缺失的腺病毒载体在制备治疗肿瘤药物中的用途。
表达干扰 rna va1 缺失病毒载体及其构建方法应用

[发明专利]一种靶向wnt信号通路溶瘤腺病毒的构建方法-CN201611091529.4有效
发明人：王毅刚;章健;金槿;马步云;李强;来维洁 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2016-12-01 - 公布日： 2019-08-13 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供了一种靶向wnt信号通路溶瘤腺病毒的构建方法，包括将启动子插入pXC2‑Δ24中并连接到质粒中，酶切；将TSLC1基因与质粒连接，将连接产物与DH5α感受态细胞混合，酶切；将上述两个步骤得到的终产物连接，转化到含有全序列腺病毒骨架的质粒大肠杆菌中重组，产生E1A区由启动子控制代替E1A内源启动子的以及缺失E1A‑CR2区的24碱基的腺病毒骨架DNA质粒；腺病毒骨架DNA质粒用pacⅠ酶切线性转化后，转染到293A细胞中病毒包装，病变后，得到溶瘤腺病毒Ad.wnt‑E1A_(Δ24)‑TSLC1。采用本发明的构建方法得到的溶瘤腺病毒对结肠癌细胞和肝癌细胞具有明显的杀伤效果。
一种靶向 wnt 信号通路溶瘤腺病毒构建方法

[发明专利]一种表达CD133的重组腺病毒及其用途-CN201310353962.0有效
发明人：沈政 -专利权人：沈政
申请日： 2013-08-14 - 公布日： 2013-12-11 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达CD133的重组腺病毒及其用途，所述重组腺病毒携带人CD133基因，能够在哺乳动物细胞中表达人CD133蛋白。本发明的重组腺病毒通过携带人CD133基因的重组穿梭质粒与病毒骨架质粒同源重组得到。本发明的重组腺病毒在哺乳动物细胞中表达人CD133蛋白的效率高、产量大。制备本发明重组腺病毒的方法简单、重复性强。
一种表达 cd133 重组病毒及其用途

[发明专利]腺病毒核心蛋白遗传标记载体的构建方法-CN201010214774.6无效
发明人：夏海滨;赵俊丽 -专利权人：陕西师范大学
申请日： 2010-06-30 - 公布日： 2011-01-05 - 主分类号： C12N15/65 文献下载
摘要：一种腺病毒核心蛋白遗传标记载体的构建方法，由构建向腺病毒基因组核心蛋白DNA序列3’端引入一个酶切位点的穿梭载体、引入一个酶切位点的腺病毒骨架载体、构建标记基因标记核心蛋白穿梭载体、构建标记基因标记核心蛋白腺病毒质粒载体、标记基因标记核心蛋白腺病毒的包装及纯化组成。本发明采用一种新的标记腺病毒核心蛋白的方法，该方法实现了对腺病毒核心蛋白真正意义的遗传水平上的荧光标记，这种标记方法删除了腺病毒基因组中的原有的核心蛋白基因，因此采用本发明的方法标记腺病毒核心蛋白，可以获得的100％被荧光蛋白标记的病毒颗粒。
病毒核心蛋白遗传标记载体构建方法

[发明专利]跨膜型猪圆环病毒2型重组腺病毒及其构建方法-CN201710949086.6在审
发明人：童德文;黄勇;李德龙 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2017-10-12 - 公布日： 2018-01-12 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明提供一种跨膜型猪圆环病毒2型重组腺病毒及其构建方法。所述重组腺病毒是利用重组腺病毒质粒进行腺病毒包装而得到的，所述重组腺病毒质粒由上述跨膜型猪圆环病毒2型重组腺病毒穿梭载体与腺病毒骨架载体同源重组形成。重组腺病毒穿梭载体插入有目的基因片段包括Intron A、共表达分泌型CD40L、跨膜型PCV2 Cap和分泌型GMC SF以及WPRE。该重组腺病毒结合两种不同作用机制，可增强腺病毒载体疫苗免疫原性。
跨膜型猪圆环病毒重组及其构建方法

[发明专利]一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法-CN200410039540.7有效
发明人：柳纪省;殷相平;白银梅;胡永浩;李志勇;张兴旺;王辉;兰喜;李宝玉;刘兆弼 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2004-02-05 - 公布日： 2005-08-10 - 主分类号： A61K39/205 文献下载
摘要：一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法，包括如下过程：一、制备目的基因：设计引物，扩增出狂犬病病毒(rabies virus，RV)抗原蛋白G基因与N基因；二、构建腺病毒穿梭载体：将抗原蛋白G基因与N基因插入到复制缺陷型腺病毒穿梭载体特异性启动子和终止子之间，构建成含有融合基因(G+N)的腺病毒穿梭载体(pAdTrack－CMV/G+N)；三、获得腺病毒质粒：将获得的重组复制缺陷型腺病毒穿梭载体(pAdTrack－CMV/G+N)与腺病毒骨架载体(pAdEasy－1)通过同源重组得到重组腺病毒质粒；四、用重组腺病毒质粒产生基因组结构均一的重组腺病毒，将重组腺病毒制成狂犬病活载体疫苗。
一种利用病毒载体表达狂犬病基因制备疫苗方法

[发明专利]表达IFITM3的重组腺病毒、其构建方法及应用-CN201610436367.7在审
发明人：金宁一;李昌;杜寿文;姜颖越;田明尧;李霄;鲁会军;邢彬;朱羿龙;赵飞;曹婷婷 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所
申请日： 2016-06-17 - 公布日： 2016-09-07 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供一种表达IFITM3的重组腺病毒，所述重组腺病毒携带人IFITM3基因，通过将携带人IFITM3基因的重组穿梭质粒与病毒骨架质粒共转染哺乳动物细胞得到。本发明还提供所述重组腺病毒的构建方法及应用。基于本发明的表达IFITM3的重组腺病毒，可开发用于治疗人类多种病毒性疾病的基因治疗药物。
表达 ifitm3 重组病毒构建方法应用

[发明专利]靶向肝癌的溶瘤腺病毒GD55-GSDME的构建和应用-CN201910561970.1在审
发明人：王毅刚;王彬蓉;黄芳 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2019-06-26 - 公布日： 2019-10-01 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开了一种靶向肝癌溶瘤腺病毒的构建方法，包括如下步骤：制备携带GSDME基因的pGD55‑GSDME质粒；将pGD55‑GSDME质粒用Pme I线性化后转化到含有全序列腺病毒骨架DNA的质粒Adeasy‑1大肠杆菌BJ5183中重组，产生E1A区由GP73启动子调控的以及缺失E1B55和E3区携带GSDME基因的腺病毒骨架DNA质粒载体；将重组鉴定正确的质粒用Pac I酶切线性化后，转染到293A细胞中进行病毒包装，待细胞出现病变后得到目的溶瘤腺病毒GD55‑GSDME。本发明还同时公开了上述溶瘤腺病毒GD55‑GSDME在制备治疗肝癌药物中的应用。
溶瘤腺病毒质粒腺病毒骨架线性化靶向构建肝癌制备治疗肝癌大肠杆菌启动子调控细胞病毒包装携带基因全序列酶切转染制备应用病变转化

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