本发明提供了一种人白细胞介素29成熟肽第33位赖氨酸、35位精氨酸定点突变为精氨酸、赖氨酸的变异体(hIL-29Z)及其制备方法,属于生物工程领域。本发明的具体制备方法包括以下步骤:1)人工设计合成定点突变引物;2)用突变引物对hIL-29成熟肽编码基因第98位和104位碱基进行定点突变;3)构建含hIL-29变异体编码基因的重组真核表达载体,转化毕赤酵母,获得重组酵母工程菌;4)培养重组酵母工程菌,于培养液添加1.5%(v/v)甲醇诱导其表达hIL-29变异体;5)采用SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析从培养液上清纯化hIL-29变异体。本发明构建的酵母工程菌可进行高密度培养并分泌表达第33位赖氨酸、35位精氨酸突变为精氨酸、赖氨酸的hIL-29变异体,适用于工业化制备人白细胞介素29成熟肽变异体。