可高效表达的成熟鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法,它涉及鸡α干扰素基因及其多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低,以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。可高效表达的成熟鸡α干扰素基因的序列见SEQ ID NO:1。方法:一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子,经合成得优化后的鸡α干扰素基因;二、克隆到表达载体中,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中,经筛选后诱导表达,离心后得湿菌,再进行包涵体的提取和溶解本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达,表达量可达总菌体蛋白的30%,复性效果好。
本发明公开了一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母,所述毕赤酵母包括如SEQ ID No.1所示DNA序列的重组猪α1干扰素基因片段和如SEQ ID No.2所示DNA序列的蛋白质二硫键异构酶PDI基因片段;通过在毕赤酵母中整合多拷贝重组猪α1干扰素基因片段和插入表达酵母蛋白质二硫键异构酶的DNA片段,辅助蛋白质在酵母细胞内折叠,减少干扰素在细胞内堆积,提高猪α1干扰素分泌到细胞外的量,猪干扰素α1的表达量达到了1.43g/L,较只整合干扰素表达盒的菌株提高了40%以上,显著提高了菌体发酵生产猪α1干扰素的水平,使高拷贝菌株的生产性能得到有效发挥。
本发明提供了一种重组猪干扰素融合蛋白,包含猪干扰素突变体和蓖麻毒素B链,所述猪干扰素突变体是将Seq ID NO:1所示猪IFNα的氨基酸序列中的一个或几个氨基酸突变为极性氨基酸所得到的突变体蛋白。进一步的,所述猪干扰素突变体是将Seq ID NO:1所示的氨基酸序列的第31位和/或第90位氨基酸突变为组氨酸或精氨酸,所述蓖麻毒素B链为蓖麻毒素B链截短肽。本发明将猪IFN‑α连接RTB Domain1(RTBD1)截短肽获得长效猪干扰素,可增强猪干扰素生物学活性,提高干扰素在机体血液中蛋白稳定性,进而提高干扰素于机体内药物半衰期。