本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新城疫病毒La Sota毒株HN蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新城疫病毒La Sota毒株HN蛋白，序列如SEQ ID NO.1所示。所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用新城疫病毒La Sota毒株HN基因替换FAdV‑4的Fiber‑2基因，替换的是FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新城疫病毒HN基因，成功获得新城疫病毒HN蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新城疫病毒提供技术支撑和弱毒二联疫苗候选。
本发明公开了一种检测非洲猪瘟病毒的荧光定量PCR试剂盒及应用。所述荧光定量PCR试剂盒中含有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物，荧光定量PCR反应试剂，以及标准品和和对照品。本发明的荧光定量PCR试剂盒可以对非洲猪瘟病毒进行检测，该试剂盒的特异性强，只与非洲猪瘟病毒特异性结合,与其他猪源病毒没有交叉反应；而且检测的灵敏度高，在标准品为1×101～1×108拷贝范围内都有极好的线性关系，可以高效检测非洲猪瘟病毒病猪棉拭子以及无临床症状的病毒携带猪，提高了检测效率。
本发明涉及猪三种致腹泻病毒中和抗原表位融合蛋白重构体及其制备方法和应用。所述猪三种致腹泻病毒PEDV、TGEV、PoRV的中和抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。编码该中和抗原表位融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1所示。本发明分别选取PEDV、TGEV、PoRV的主要中和抗原表位基因并进行拼接，而后通过重组杆状病毒真核表达系统对串联基因进行融合蛋白表达。将表达串联基因融合蛋白的重组病毒通过腹腔注射的方式免疫小鼠，可诱导机体产生免疫应答，具有较强的免疫原性。本发明为预防PEDV、TGEV、PoRV感染提供了一种新的方法，也为猪腹泻病毒新型疫苗的开发奠定了基础。
本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端，其序列如SEQ ID NO.1所示。重组血清4型禽腺病毒，其中使用新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端替换FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端，成功获得表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新型鹅星状病毒提供了技术支撑与二联弱毒疫苗候选。
