本发明公开了禾谷缢管蚜实时荧光定量PCR检测用的内参基因及其扩增引物和应用。本发明利用荧光定量PCR技术建立了禾谷缢管蚜在不同试验条件下内参基因的筛选方法，最终筛选出EF‑1α、β‑actin、AK、TATA、GAPDH、GST、RPL13、RPS6、RPS18、18S或28S基因适宜作为禾谷缢管蚜实时荧光定量PCR检测用的内参基因。本发明进一步设计扩增所述内参基因的特异性定量引物，建立基于SYBR Green I染料技术的RT‑PCR方法，为研究禾谷缢管蚜功能基因或不同发育时期、不同地理种群、不同身体部位、不同翅型基因表达或不同处理条件下基因表达提供了准确和灵敏的实时荧光定量PCR检测方法。
本发明公开了一种检测人α防御素1/3基因拷贝数的试剂盒及方法，该试剂盒包括：第一组引物：目的基因实时荧光定量PCR扩增引物，碱基序列如SEQ ID NO.1和2所示；第一荧光探针：目的基因实时荧光定量PCR扩增荧光探针，中间的探针碱基序列如SEQ ID NO.3所示；第二组引物：内参基因实时荧光定量PCR扩增引物，碱基序列如SEQ ID NO.4和5所示；第二荧光探针：内参基因实时荧光定量PCR扩增荧光探针，中间的探针碱基序列如SEQ ID NO.6所示；校样品DNA；实时荧光定量PCR反应液。
本发明公开了一种检测褐色橘蚜体内CTV实时荧光定量RT-PCR的引物及其方法，利用实时定量引物专用设计软件Beacon Designer设计CTV特异性引物，摸索和优化实时荧光定量RT-PCR反应体系的条件参数等，建立一种快速有效的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法，并对单头橘蚜体内CTV含量进行准确的定量检测。通过融解曲线、标准曲线的扩增效率及相关系数及方法学验证结果表明该体系灵敏、快速、有效，即使橘蚜体内CTV含量低也可准确定量检测。
