本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。
本发明公开了利用葡萄糖生产羟基酪醇的重组大肠杆菌及构建方法及应用，方法为，以SEQ ID NO.1、2为引物，以大肠杆菌BW25113基因组DNA为模板，PCR扩增HpaBC基因，连入载体pTrcHisB，得到中间质粒，以中间质粒为模板，以SEQ ID No.3、2为引物，PCR扩增，连入质粒pTrcHisB‑ARO10，得到表达载体pTrcHisB‑ARO10‑HpaBC并将该载体与质粒pBb3共转入大肠杆菌菌株BMGA，得到重组大肠杆菌。本发明的重组大肠杆菌含有来自酿酒酵母的ARO10基因及来自大肠杆菌内源的HpaBC基因。能够显著提高羟基酪醇的产量。
