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[发明专利]精确定量检测生物医药制品中残留大肠杆菌宿主细胞蛋白的方法及ELISA检测试剂盒-CN202210444257.0在审
发明人：易红飞;王星 -专利权人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
申请日： 2022-04-13 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明提供一种精确定量检测生物医药制品中残留大肠杆菌宿主细胞蛋白的方法，其步骤包括：选取目标大肠杆菌宿主菌，进行培养表达，获取大肠杆菌宿主细胞蛋白；用大肠杆菌宿主细胞蛋白免疫动物，获得抗大肠杆菌宿主细胞蛋白多克隆抗体；利用准确的覆盖率检测方法对纯化后的抗大肠杆菌宿主细胞蛋白多克隆抗体进检测；选择其中覆盖率最高的多克隆抗体，采用ELISA法检测样本中残留的大肠杆菌宿主细胞蛋白。本发明利用含有高覆盖率的大肠杆菌HCP抗体的ELISA试剂盒来定量检测生物医药制品中残留的大肠杆菌HCP蛋白，检测结果可信度高，效率高，能够同时对多个样本进行检测，检测灵敏度高。
精确定量检测生物医药制品残留大肠杆菌宿主细胞蛋白方法 elisa 试剂盒

[发明专利]一种重组大肠杆菌固定化细胞及其应用-CN202110680783.2在审
发明人：朱云峰;苗华明;夏俊刚;孙剑峰;袁风娇;张立志;李鹤松 -专利权人：迪嘉药业集团有限公司;迪沙（济南）药物研究有限公司
申请日： 2021-06-19 - 公布日： 2021-09-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组大肠杆菌固定化细胞及在微分子透明质酸或其盐制备上的应用。本发明的技术方案是一种含有透明质酸酶的重组大肠杆菌固定化细胞，先构建含有天然透明质酸酶编码基因的重组质粒，然后导入大肠杆菌感受态细胞，经过筛选得到重组大肠杆菌，并对重组大肠杆菌进行固定化而得到该固定化细胞本发明提供了一种重组大肠杆菌固定化细胞及在微分子透明质酸或其盐制备上的应用。
一种重组大肠杆菌固定细胞及其应用

[发明专利]制备唾液酸的方法和专用固定化大肠杆菌细胞-CN201010521121.2无效
发明人：钱世钧;杨敬;钞亚鹏;张国青;石家骥 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2010-10-21 - 公布日： 2011-02-23 - 主分类号： C12N11/10 文献下载
摘要：本发明公开了制备唾液酸的方法和专用固定化大肠杆菌细胞。本发明所提供的固定化大肠杆菌细胞，是通过包括如下步骤的方法得到的：1)将聚乙烯醇水溶液和海藻酸钠水溶液混合，得到I液；2)将步骤1)得到的I液与大肠杆菌菌悬液混合，得到II液；3)将步骤2)得到的II液滴加到氯化钙和硼酸的混合水溶液中，放置，得到固定化大肠杆菌细胞。本发明所提供的制备唾液酸的方法，是将所述固定化大肠杆菌细胞发酵培养，得到唾液酸。本发明所提供的制备唾液酸的固定化大肠杆菌细胞和发酵方法，可将固定化大肠杆菌细胞连续培养10批以上，且大肠杆菌产唾液酸的能力不下降，不需另制备菌种种子液，具有省时、省料、提高产率和降低成本等的优点。
制备唾液酸方法专用固定大肠杆菌细胞

[发明专利]一种大肠杆菌-酵母-农杆菌三元穿梭载体及其在植物病毒侵染性克隆中的应用-CN202211258827.3在审
发明人：张坤;郭枭;陈佳欢;贺振;顾天潇 -专利权人：扬州大学
申请日： 2022-10-14 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大肠杆菌‑酵母‑农杆菌穿梭载体及其在植物病毒侵染性克隆中的应用。所述大肠杆菌‑酵母‑农杆菌穿梭载体是基于大肠杆菌‑农杆菌的双元穿梭载体的改造，即增加酵母DNA，复制起始识别序列和酵母色氨酸合成酶筛选标记基因片段，将携带酵母复制元件2μ序列及筛选标记基因序列的目的基因片段插入到大肠杆菌‑农杆菌双元质粒骨架中，构建了两个大肠杆菌‑酵母菌‑农杆菌三元穿梭质粒，该质粒可以在酵母细胞、大肠杆菌细胞和农杆菌细胞中稳定遗传和增殖。
一种大肠杆菌酵母杆菌三元穿梭载体及其植物病毒侵染克隆中的应用

[发明专利]一种增强碳源代谢的大肠杆菌底盘细胞-CN202111481363.8有效
发明人：陆姝欢;刘洋;李翔宇;朱文冉;余超;汪志明 -专利权人：嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司
申请日： 2021-12-06 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种增强碳源代谢的大肠杆菌底盘细胞。本发明提供的大肠杆菌底盘细胞中含有甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶突变体，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明提供的大肠杆菌底盘细胞，碳源代谢能力增强，具备较高的乳糖摄入能力。本发明提供的大肠杆菌底盘细胞为工业化大肠杆菌基因工程菌构建奠定了基础。
一种增强碳源代谢大肠杆菌底盘细胞

[发明专利]大肠杆菌自裂解方法及其专用载体与应用-CN200610078951.6有效
发明人：林章凛;徐丽华;李爽;任川 -专利权人：清华大学
申请日： 2006-04-28 - 公布日： 2006-12-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌自裂解方法及其专用载体与应用。该载体是自5’至3’端顺次连接有热启动子，噬菌体裂解基因和大肠杆菌终止子的大肠杆菌表达载体。该大肠杆菌自裂解方法是将所述大肠杆菌自裂解载体导入大肠杆菌中，得到重组大肠杆菌，再将重组大肠杆菌热诱导后，大肠杆菌细胞裂解。实验证明该载体经适宜的温度诱导使Lambda噬菌体的裂解基因SRRz获得表达，从而使宿主细胞裂解，释放具有生物活性的外源目标蛋白到达培养基，以利于定向进化中后续的高通量筛选的进行，具有廉价、快捷的优点。
大肠杆菌裂解方法及其专用载体应用

[发明专利]一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法-CN202111280651.7在审
发明人：徐天乐;刘润;杨章平;吴欣悦;赵静雯;曹海南 -专利权人：扬州大学
申请日： 2021-10-29 - 公布日： 2022-02-01 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种以大肠杆菌在奶牛乳腺上皮细胞中调控免疫作用的方法，其包括如下步骤：细胞培养、使用大肠杆菌进行细胞处理。本发明提供的方法能够使用野生A型大肠杆菌构建炎症模型，使用一种特定的大肠杆菌进行了对于奶牛乳腺上皮炎症反应的调控。
一种大肠杆菌奶牛乳腺上皮细胞调控免疫作用方法

[发明专利]一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法-CN201610941353.0有效
发明人：侯莉;姜洋;甄丛丽;王燕;李倩;姜欣宇 -专利权人：燕山大学
申请日： 2016-10-26 - 公布日： 2019-05-28 - 主分类号： A61K47/46 文献下载
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法，其主要是取预先培养和富集好的大肠杆菌悬浮液，通过高速离心回收细胞沉淀物；加入CaCl₂溶液，重悬大肠杆菌细胞沉淀，制成感受态细胞；再加入DNaseΙ酶溶液加热、振荡后进行高速离心回收细胞沉淀物，再加入蒸馏水高速反复离心5～10次，即得大肠杆菌空腔；将大肠杆菌空腔加入磁金属盐溶液中，制成感受态细胞，加热振荡后进行高速离心，回收细胞沉淀物；再加入NaBH₄溶液加热振荡，即得到大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体。
大肠杆菌磁靶向药物载体细胞沉淀物高速离心磁粒子振荡制备加热感受态细胞回收空腔蒸馏水大肠杆菌细胞高分子材料金属盐溶液骨架材料酶溶液悬浮液富集重悬沉淀合成替代

[发明专利]一种调控大肠杆菌细胞大小的方法-CN201911038423.1有效
发明人：刘立明;郭亮;陈修来;刁文文;刘佳;罗秋玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-10-29 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种调控大肠杆菌细胞大小的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过缺失碳储存调节因子的编码基因csrA和过表达组氨酸类似物与绿色荧光蛋白的融合蛋白基因hns‑gfp来调节大肠杆菌的细胞大小。结果表明，大肠杆菌在缺失碳储存调节因子基因和过表达组氨酸类似物与绿色荧光蛋白融合蛋白的基础上，通过控制诱导剂浓度可以实现大肠杆菌细胞大小的调控，与出发菌株相比，在不同的无水四环素(aTc)诱导下，大肠杆菌细胞大小可增加这为调控大肠杆菌细胞大小提供了一种新策略。
一种调控大肠杆菌细胞大小方法

[发明专利]一种利用固定化大肠杆菌细胞制备5-甲基吡嗪-2-羧酸的方法-CN202210474062.0在审
发明人：牛卫宁;武彦君;王军;李恒;贾冠雅;何伟娟;朱志龙;王晶;甘海胜 -专利权人：西北工业大学
申请日： 2022-04-29 - 公布日： 2022-07-01 - 主分类号： C12P17/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用固定化大肠杆菌细胞制备5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的方法，如下：步骤一、利用大肠杆菌BL21(DE3)分别发酵培养表达二甲苯单加氧酶、苯甲醇脱氢酶和苯甲醛脱氢酶的重组大肠杆菌细胞，离心获得菌体；步骤二、将所述菌体重悬后与聚乙烯亚胺和戊二醛混合搅拌混匀，制备固定化重组大肠杆菌细胞；步骤三、以2,5‑二甲基吡嗪为底物，以所述固定化重组大肠杆菌细胞为催化剂，催化合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸。本发明中给出了能高效可溶性表达二甲苯单加氧酶(XMO)、苯甲醇脱氢酶(BADH)和苯甲醛脱氢酶(BZDH)的重组大肠杆菌构建方法以及大肠杆菌细胞固定化方法，可高效催化合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸。
一种利用固定大肠杆菌细胞制备甲基羧酸方法

[发明专利]一种大肠杆菌自裂解方法及其专用载体与应用-CN200610078952.0有效
发明人：林章凛;李爽;徐丽华 -专利权人：清华大学
申请日： 2006-04-28 - 公布日： 2006-12-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌自裂解方法及其专用载体与应用。该载体是自5’至3’端顺次连接有紫外启动子，噬菌体裂解基因和大肠杆菌终止子的大肠杆菌表达载体。该大肠杆菌自裂解方法是将所述大肠杆菌自裂解载体导入大肠杆菌中，得到重组大肠杆菌，将重组大肠杆菌在紫外线下照射，大肠杆菌细胞裂解。实验证明该载体可在紫外诱导下使Lambda噬菌体的裂解基因SRRz获得表达，从而使宿主细胞裂解，释放具有生物活性的外源目标蛋白到达培养基，以利于定向进化中后续的高通量筛选的进行；此外，在紫外诱导条件下即可用本发明的载体进行胞内酶的高通量筛选
一种大肠杆菌裂解方法及其专用载体应用

[发明专利]一种生物鲁棒性提高的大肠杆菌底盘细胞及其构建方法与应用-CN202010661070.7有效
发明人：付晓平;郑宏臣;宋诙;束文举;甄杰;谭明;徐健勇 -专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2020-07-10 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生物鲁棒性提高的大肠杆菌底盘细胞及其构建方法与应用。本发明提供了一种单独或同时过表达大肠杆菌本源的基因prpD和malK的方法，构建一生长速率加快、ATP能量供应稳定充足、乙酸积累受抑制的鲁棒性能提高的大肠杆菌底盘细胞，利用该大肠杆菌底盘细胞表达外源蛋白其表达量可提高本发明的大肠杆菌底盘细胞适用于植物、微生物等不同来源的外源蛋白在大肠杆菌中的表达，解决了因更换不同重组目标蛋白而需对宿主菌重新改造的问题，且该方法工艺简化、通用性高、便于实验研究及工业化放大应用。
一种生物鲁棒性提高大肠杆菌底盘细胞及其构建方法应用

[发明专利]一种从大肠杆菌细胞中区分可溶性及不溶性蛋白质的方法-CN201310431724.7有效
发明人：闻崇炜;王亚丽 -专利权人：江苏大学
申请日： 2013-09-22 - 公布日： 2013-12-25 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种从大肠杆菌细胞中制备可溶性蛋白质及不溶性蛋白质的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用0.5%～5%TritonX-100于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用渗透压法重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到98.9%以上，本工艺中所得上清液为大肠杆菌细胞内可溶性蛋白质，所得沉淀为大肠杆菌细胞内不溶性蛋白质。
一种大肠杆菌细胞区分可溶性不溶性蛋白质方法

[发明专利]大肠杆菌感染单层致密奶牛乳腺上皮细胞模型的构建方法-CN202010208991.8在审
发明人：李胜利;郑宇慧;刘钢;王蔚;曹志军;杨红建;王雅晶 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2020-03-23 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种大肠杆菌感染单层致密奶牛乳腺上皮细胞模型的构建方法。所述细胞模型为感染了大肠杆菌ATCC 25922的单层致密奶牛乳腺上皮细胞，且感染时单层致密奶牛乳腺上皮细胞的跨膜电阻值达到400Ω·cm2。本发明提供的大肠杆菌感染单层致密奶牛乳腺上皮细胞模型，可作为检测大肠杆菌感染单层致密奶牛乳腺上皮细胞的黏附率及其对奶牛乳腺上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响进行应用，也可在大肠杆菌诱发乳房炎对乳腺组织及乳腺上皮细胞的损伤机制和抗生素替代品的筛选等相关领域广泛应用
大肠杆菌感染单层致密奶牛乳腺上皮细胞模型构建方法

[发明专利]一种抗菌肽在体外抑制大肠杆菌中的应用方法-CN202111592740.5在审
发明人：方文棋;黄钦耿;黄炜乾;唐谢芳;王珍珍;吴森雨;蒋顺进 -专利权人：清远一生自然生物研究院有限公司
申请日： 2021-12-22 - 公布日： 2022-04-05 - 主分类号： C12Q1/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗菌肽在体外抑制大肠杆菌中的应用方法，首先对抗菌肽能否抑制大肠杆菌进行相关的实验，取400pL大肠杆菌基因组DNA溶液加人2mL离心管内，置于超声波细胞粉碎机，冰水浴下超声1min，功率本发明充分利用抗菌肽与大肠杆菌菌落进行实验，可以得出抗菌肽穿过大肠杆菌细胞膜进入细胞内部与胞内DNA结合，嵌插入DNA双螺旋结构的疏水区域，改变DNA结构，导致大肠杆菌细胞最终死亡，并且在利用抗菌肽治疗应用前，还设有伊红美蓝对其进行检测，从而确保针对性的大肠杆菌进行处理，从而能够提高应用效果。
一种抗菌体外抑制大肠杆菌中的应用方法

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