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[发明专利]可选择标志物基因在甜菜原生质体转化方法和系统中的用途-CN201580031418.1在审
发明人：盖伊·魏恩斯;马克·勒菲弗;夏夫高达·塔姆曼纳高达;米里耶勒·隆梅尔 -专利权人：西斯凡德尔哈维公众公司
申请日： 2015-06-12 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： C12N15/60 文献下载
摘要：本发明涉及用于甜菜原生质体转化的方法，包括以下步骤：‑从分离自甜菜植物的气孔保卫细胞获得原生质体，‑用包含感兴趣的核苷酸序列和选择标志物序列的核酸构建体转化所述原生质体，‑以对所述原生质体体外培养致死的浓度向所述原生质体的体外培养应用一种或多种ALS抑制剂，和‑从整合了包含感兴趣的序列和选择标志物序列的核酸构建体的存活的原生质体再生甜菜植物，其中所述选择标志物序列是在其序列中携带在氨基酸113位从丙氨酸至酪氨酸的突变的突变BvALS113序列
可选择标志基因甜菜原生质体转化方法系统中的用途

[发明专利]一种水稻叶鞘原生质体高效转化基因模块和线路的方法-CN201910986195.4在审
发明人：谷晓峰;刘青 -专利权人：中国农业科学院生物技术研究所
申请日： 2019-10-16 - 公布日： 2020-01-07 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种水稻叶鞘原生质体高效转化基因模块和线路的方法。本发明公开了水稻叶鞘原生质体的转化方法，包括：在水稻叶鞘原生质体中添加MMg溶液，得到水稻叶鞘原生质体悬浮液；在水稻叶鞘原生质体悬浮液添加质粒和质量百分比为40％的聚乙二醇‑钙溶液，混匀，静置；加入W5溶液混匀，离心，弃上清，W5溶液重悬沉淀，离心，弃上清，加入羧苄青霉素混匀，培养，完成原生质体的转化。本发明水稻叶鞘原生质体转化方法对PEG溶液配制、质粒浓度及转化时间等进行调整，将转化效率提高到80％，可使智能改造元器件在80％植物细胞中发挥功能，对初期元器件功能研究提供了可用数据，为后期作物智能改造元器件作用研究提供了便利
水稻叶鞘原生质体混匀元器件悬浮液质粒转化原生质体转化质量百分比羧苄青霉素高效转化功能研究聚乙二醇可用数据植物细胞转化效率作用研究智能钙溶液重悬配制沉淀改造便利基因

[发明专利]一种烟草原生质体制备方法-CN202210986948.3在审
发明人：翟妞;郑庆霞;徐国云;张慧;周会娜;刘萍萍;陈千思;王晨;金立锋 -专利权人：中国烟草总公司郑州烟草研究院
申请日： 2022-08-17 - 公布日： 2022-11-18 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本申请属于烟草组织器官解剖技术领域，具体涉及一种烟草原生质体制备方法。该方法针对烟草根部细胞、或者烟叶细胞的原生质体制备分离应用，包括：准备酶解液、材料预处理、酶解提取、原生质体分离等步骤。在对现有植物细胞原生质体提取方法研究总结基础上，发明人结合烟草根组织、烟叶细胞的结构特点，结合次生代谢产生代谢组学研究需要，对酶解法制备原生质体过程中所需的生物酶类型和用量进行了进一步优化设计，构建了适合烟草根尖来源或者烟叶腺毛来源的原生质体制备方法初步实验结果表明，制备所得原生质体数量多、活性高，同时由于相关提取方法简单快速、耗时较短，因此使得本申请具有较好的科研实用价值。
一种烟草原生质体制备方法

[发明专利]月季花瓣原生质体的提取和转化-CN202310446296.9在审
发明人：江云鹤;高俊平;郭怡 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2023-04-23 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及月季花瓣原生质体的提取和转化，具体包括：月季花瓣原生质体的酶解用溶液、提取试剂盒、提取方法、转化试剂盒和转化方法等，其中，本发明以月季花瓣为材料，将花瓣切成细丝状，放入酶解液中酶解，酶解后加入W5溶液终止消化，用细胞筛过滤得到原生质体，最后进行PEG‑Ca介导的原生质体瞬时转化。本发明所用的酶解液配方简单，获得的月季花瓣原生质体产量高、活性强；本发明还建立了月季花瓣原生质体的瞬时转化体系，转化效率达71.7％。本发明建立了月季花瓣原生质体制备和瞬时转化的方法，可为月季基因功能分析、细胞工程和育种等应用基础研究提供技术支撑。
月季花瓣原生质体提取转化

[发明专利]一种蓖麻原生质体制备和转化方法-CN201810438350.4有效
发明人：刘颖;桑毅;胡汉桥;张力;张龙军;劳永志;詹军强 -专利权人：广东海洋大学
申请日： 2018-05-09 - 公布日： 2020-11-13 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种蓖麻原生质体制备和转化方法。本发明通过优化蓖麻叶片原生质体分离制备中叶片材料获取时间、切取叶片的形状、酶浓度、酶解时间和离心转速等，并利用自制的简易装置过滤，获得更多活力较强的原生质体，并利用本发明的方法成功的将外源质粒转化蓖麻叶片原生质体本发明为蓖麻功能基因的分析建立了一套高效的蓖麻叶片原生质体制备和转化方法及亚细胞定位体系，利用这套体系可以高效的获得蓖麻叶片原生质体，为获得进行亚细胞定位提供了前提条件，进一步为蓖麻关键功能基因研究奠定了良好的工作基础，为蓖麻原生质体的应用提供技术支持。
一种蓖麻原生质体制备转化方法

[发明专利]一种杉木原生质体的制备及纯化方法-CN201610708676.5有效
发明人：林二培;唐佳妮;楼雄珍;黄华宏;童再康 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2016-08-23 - 公布日： 2019-12-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种杉木原生质体制备及纯化方法。选取杉木组培苗最上部未分轮的叶片或幼嫩茎段；将叶片或茎段切断，放入酶解液中，抽真空，置于水平摇床上黑暗酶解2‑4h；用孔径70μm的细胞筛将酶解液过滤至离心管中，用原生质体清洗液清洗酶解后的叶片或茎段，用70μm的细胞筛进行过滤，滤液合并至同一离心管中，离心去上清；向沉淀中加入预冷的所述原生质体清洗液清洗原生质体，离心去上清后重复洗一次，收集的沉淀用原生质体重悬液重悬，得到纯化的杉木原生质体。本发明得到杉木叶片原生质体的产量为1.8×10
原生质体杉木茎段叶片离心管酶解液清洗液细胞筛酶解沉淀过滤清洗叶片原生质体原生质体制原生质体重滤液合并水平摇床幼嫩茎段抽真空组培苗放入分轮悬液预冷重悬黑暗重复

[发明专利]一种利用匍匐翦股颖原生质体观察亚细胞定位和蛋白互作的方法-CN202110362261.8有效
发明人：尹淑霞;管瑾;滕珂;韩烈保;常智慧 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2021-04-02 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用匍匐翦股颖原生质体观察亚细胞定位和蛋白互作的方法。本发明所提供的方法包括：将匍匐翦股颖茎及叶鞘组织切碎，转移到含有酶溶液的培养皿中避光酶解；过滤离心得匍匐翦股颖茎原生质体。本发明制备得到的匍匐翦股颖茎原生质体中，97％的原生质体性状完好，无破损；目的基因转化原生质体的转化率可达到65％。采用本发明提供的匍匐翦股颖茎原生质体进行亚细胞定位时，准确判断出NYC1基因位于匍匐翦股颖叶绿体中，NAC3基因位于匍匐翦股颖细胞核中。本发明提供的匍匐翦股颖茎原生质体还可用于蛋白互作分析，为匍匐翦股颖后续基因功能研究提供了技术支持。
一种利用匍匐翦股颖原生质体观察细胞定位蛋白方法

[发明专利]一种盐酸柔红霉素菌种及其高产方法-CN201310086639.1无效
发明人：余宏;徐超波;陈欢斌;王波;姚定余 -专利权人：江苏禾昌生物科技有限公司
申请日： 2013-03-18 - 公布日： 2014-09-24 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种盐酸柔红霉素菌种及其高产方法，包括步骤：Q1：原生质体的制备;Q2：原生质体的再生；Q3：原生质体的紫外诱变；Q4：将制备好的原生质体悬液按照下列步骤进行离子注入诱变处理；Q5：分别以Q3步骤处理完成和Q4步骤处理培养长出的菌落作为具有不同遗传背景的亲本，进行基因组改组处理；Q6：杂合再生子代菌丝体的培养；Q7：杂合子代原生质体制备及原生质体融合;Q8：子代原生质体多轮融合与再生:按照上述
一种盐酸红霉素菌种及其高产方法

[发明专利]一种提取沉水植物龙舌草原生质体方法-CN201911278023.8在审
发明人：江红生;王畅;李伟;刘浩 -专利权人：武汉德翊环境科技有限公司
申请日： 2019-12-12 - 公布日： 2020-03-13 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种提取沉水植物龙舌草原生质体方法，其步骤是：A、配制母液：B、配制工作液：(1)消化酶溶液配制10mL消化酶母液的量；(2)W5溶液配制100mL母液的量；(3)MMG溶液配制100mL母液的量；C、用具准备：剪掉头部的蓝枪头、二套干净的培养皿、长方形的刀片、2mL圆底离心管；D、酶解细胞壁：将龙舌草叶片浸于装有山梨醇溶液的培养皿中，沉入酶解液中；E、富集原生质体；F、保存原生质体：去除上清液，将原生质体沉淀移入一管注入MMG溶液保存，得一种原生质体。方法易行，操作简便，简单快速，无需复杂的纯化即可获得较为纯净的原生质体。将收集到的原生质体重新悬浮到保存液中，可稳定保存24h以上。适用于提取沉水植物的原生质体。
一种提取植物草原质体方法

[发明专利]一种楸树木质部原生质体分离和转化的方法-CN202011015336.7在审
发明人：王军辉;樊二勤;王智;麻文俊;卢楠;付鹏跃;曲冠证;刘彩霞 -专利权人：中国林业科学研究院林业研究所
申请日： 2020-09-24 - 公布日： 2020-12-22 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种楸树木质部原生质体分离和转化的方法，其包括如下步骤：S1、选择温室内生长健康的楸树植株，将茎段去皮后，浸泡于酶解液中避光静置；S2、酶解结束后，将茎段转移到MMG溶液中，轻轻摇晃，以释放酶解完的原生质体细胞；随后进行过滤以去除杂质，并通过水平离心进行原生质体收集；最后加入适量MMG重悬细胞，获得原生质体溶液；S3、利用氯化铯梯度离心的方法进行高纯度质粒的提取；S4、利用PEG介导的方式进行原生质体高效转化本发明提供的方法以楸树木质部为材料进行原生质体分离和转化，分离得到的原生质体具有杂质少，数量多的优点，可获得高质量的楸树原生质体，同时提供了系统高效的转化方法，为木本植物的分子生物学研究提供了重要工具。
一种树木原生质体分离转化方法

[发明专利]一种快速高通量检测赤芝原生质体细胞壁再生的方法及其应用-CN202310392047.6在审
发明人：邓意达;石沐玲;洪超;黄露;米旭君 -专利权人：海南大学
申请日： 2023-04-12 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明属于食用菌育种技术领域，具体涉及一种利用流式细胞术测定赤芝原生质体细胞壁再生的方法及其应用；将TPFN荧光探针用于赤芝原生质体的流式荧光标记，从而区分原生质体与细胞壁再生的原生质体，并可通过流式数据处理实现对原生质体细胞壁再生过程的量化监测将待测原生质体与探针孵育10分钟，再通过流式细胞仪的BluFL2通道采集数据，与对照样品的荧光强度直方图相比较，则可判断细胞壁再生程度。与传统的电镜成像方法相比，本发明能够在15分钟内实现细胞数大于5000个的原生质体样品分析，可发展为快速判断原生质体活性的方法以及细胞壁再生监测的手段，为灵芝育种以及灵芝细胞壁相关的生理代谢研究提供重要工具
一种快速通量检测原生质体细胞壁再生方法及其应用

[发明专利]鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-5×13-CN201310043734.3有效
发明人：许峰;刘宇;赵爽;李登进;王守现;耿小丽;王兰青 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-02-04 - 公布日： 2013-07-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-5×13。该方法包括如下步骤：分别以待鉴别的两株花脸蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和2所示的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株原生质体单核体的PCR产物均含有500bp-800bp的DNA片段或均不含有500bp-800bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型相同；如果所述待鉴别的两株原生质体单核体中的一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物含有500bp-800bp的DNA片段，另一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物不含有500bp-800bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别辅助花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 sr 13

[发明专利]一种棉花原生质体制备方法-CN202010052295.2有效
发明人：张雪;刘传亮;孙瑞斌;王少辉;马丹;栗祎琳;刘志红 -专利权人：中国农业科学院棉花研究所
申请日： 2020-01-17 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种棉花原生质体制备方法，属于植物细胞生物学技术领域，包括如下步骤：(1)取棉花花朵，用刀片将花瓣切成细丝；(2)将细丝置于6孔细胞培养板中，每孔放一个花瓣的量，每孔加入5‑8ml酶解液，之后酶解；(3)酶解结束后对酶解反应液进行过滤；(4)取滤液加入离心管，第一次离心；(5)用枪头吸去离心管内的上清，向原生质体沉淀中加入第一W5溶液，第二次离心，再次用枪头吸去上清，然后再加入第二W5溶液重悬原生质体沉淀，得到的原生质体重悬液。可在1.5‑2小时内完成棉花原生质体的制备，大大缩短了棉花原生质体制备所需要的时间，并有利于保证原生质体活力，数量也能满足后续瞬时转化的需要，大大提高了棉花原生质体制备效率。
一种棉花原生质体制备方法

[实用新型]一种用于丝状真菌原生质体过滤装置-CN202120953786.4有效
发明人：曹树威;余昌花;邱磊;杨启晟;黄春花;王自豪;陈政谕;甘露;黄焕昌;卢文宜;刘克俊;向雷 -专利权人：广西壮族自治区畜牧研究所
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2021-12-17 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本实用新型涉及丝状真菌原生质体过滤技术领域，且公开了一种用于丝状真菌原生质体过滤装置，包括固定架、初滤机构和圆锥形过滤器，所述圆锥形过滤器设置于固定架的右侧。该一种用于丝状真菌原生质体过滤装置，通过注射器吸取酶解后混有杂质的原生质体，并通过注射器注入到可换膜针孔过滤器中，通过三层第一尼龙滤膜和六层纱布层进行对原生质体进行初步过滤，过滤掉大量的菌丝和杂质，初步过滤后的原生质体进入到圆锥形过滤器中，并通过圆锥形过滤器中的第二尼龙滤膜进行复滤，进一步对原生质体进行提纯，结构简单，不需要通过增加降解时间进行菌丝杂质去除，保护了原生质体的质量，简化了工作流程，提高了效率，同时避免了杂菌的污染。
一种用于丝状真菌原生质体过滤装置

[发明专利]一种蝉花原生质体的制备及其遗传转化方法-CN202310378220.7在审
发明人：蔡瑞杭;柴一秋;厉晓腊;陈官菊;方鸣;刘又高 -专利权人：浙江省亚热带作物研究所（浙南林业科学研究院）
申请日： 2023-04-11 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种蝉花原生质体的制备及其遗传转化方法，具体包括以下步骤：将蝉花菌丝用原生质体酶解液酶解处理后，将酶解后的原生质体过滤得滤液，将滤液离心去上清，沉淀经STC缓冲液洗涤后得到蝉花原生质体，将目的载体加入到原生质体中后，逐滴加入PTC溶液，用含有0.7M甘露醇的再生液体培养基进行复苏，通过含潮霉素的抗性培养基筛选获得转化子。与现有技术相比，本发明建立了一套完整的蝉花原生质体制备及其遗传转化、筛选方法。
一种原生质体制备及其遗传转化方法

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