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[发明专利]一种植物亚细胞定位试剂盒及其应用-CN201810991595.X在审
发明人：晋玉宽;王亚飞 -专利权人：北京艾普希隆生物科技有限公司
申请日： 2018-08-29 - 公布日： 2019-01-04 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体的讲涉及一种植物亚细胞定位试剂盒，由下列试剂组成：酶解液5～20ml、WI溶液5～25ml、W5溶液30～50ml、MMG溶液5～25ml和PEG‑Calcium转化溶液5～20ml；该试剂盒的应用，包括①质粒DNA的准备、②转化、③停止反应、④重悬原生质体、⑤孵育、⑥信号观测和原生质体储存；本试剂盒可以快速完成目的基因表达产物的亚细胞定位，通过对原生质体的培养，其内部转入的外源遗传物质可在活体内进行表达
试剂盒亚细胞定位原生质体种植物生物技术领域外源遗传物质表达产物目的基因试剂组成信号观测遗传物质质粒DNA 酶解液孵育重悬转化应用体内储存转入研究

[发明专利]一种不育系快速转育方法-CN201510206556.0有效
发明人：聂琼;刘仁祥;姜超英;徐如宏;曾陨涛;夏范讲 -专利权人：贵州大学;中国烟草总公司贵州省公司
申请日： 2015-04-28 - 公布日： 2018-12-21 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种不育系快速转育方法，即通过体细胞杂交和分子标记选择相结合的方法快速转育不育系。属于作物育种技术领域。首先，分离供体（不育）胞质和受体（可育）原生质体；然后，用碘乙酰胺（IOA）处理受体原生质体使其细胞质失活，再按2:1(v/v)的比例混合供体胞质和受体原生质体，采用电融合法或化学融合法使供、受体融合；
一种不育快速方法

[发明专利]一种旱稻种子-CN202111031674.4在审
发明人：彭晓燕 -专利权人：彭晓燕
申请日： 2021-09-03 - 公布日： 2021-11-05 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：该旱稻种子，通过将高粱、小麦和芦苇的细胞质导入水稻的原生质体中，再经过植物组织培养获得成活的植株，并对植株进行缺水种植，筛选获得抗旱的水稻植株，并在该植株上获取组织进行培养，并制备人工种子。通过将高粱、小麦和芦苇的细胞质导入水稻的原生质体中，筛选获得具有抗旱能力的水稻种子。
一种旱稻种子

[发明专利]一种制备苋菜原生质体的方法及其应用-CN202010640127.5在审
发明人：李大勇;刘雪;张彬 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2020-07-06 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种制备苋菜原生质体的方法，其以苋菜无菌苗的幼嫩真叶为材料，酶解后过滤时挤压滤渣，制备得到大量形态正常、杂质少、无破损的苋菜原生质体，能够满足后续转化、亚细胞定位等的实验要求，可进一步为双荧光互补，体细胞杂交、遗传转化等基础研究和应用研究提供重要的技术支持，以促进苋菜遗传育种和基础研究的发展。
一种制备苋菜原生质体方法及其应用

[发明专利]生产禽类配子的方法-CN01806931.2无效
发明人： S·L·帕迪;J·N·佩蒂特;S·德科斯塔 -专利权人：北卡罗莱纳州立大学
申请日： 2001-03-23 - 公布日： 2003-05-21 - 主分类号： A01K45/00 文献下载
摘要：一种用于生产和收集禽类精子的方法，包括以下步骤由供体禽类物种提供原生殖细胞；将所述原生殖细胞输送到受体禽类物种的卵中；培养所述受体禽类物种，以便孵化；然后，从所述受体禽类物种体内收集所述供体禽类物种的精子
生产禽类配子方法

[发明专利]一种绣球原生质体制备及瞬时转化的方法-CN202011359535.X在审
发明人：陈双双;邓衍明;齐香玉;冯景;陈慧杰;秦紫艺;王华娣 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2020-11-27 - 公布日： 2021-03-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种绣球原生质体制备及瞬时转化的方法，属于细胞生物学技术领域；本发明选择绣球叶片，将叶缘切除，垂直于主叶脉将叶片切条，放入酶解液中酶解；酶解后加入W5溶液终止消化，然后过滤得到绣球原生质体；并将原生质体瞬时转化本发明利用叶片制备原生质体不受季节限制，操作简单并易于实现；所用到的酶解液配方简单，获得的原生质体产量高、活性强；酶解液中添加KH2PO4，可显著增加原生质体质膜稳定性，有效保持原生质体活力；本发明还针对绣球叶片原生质体建立了相应的瞬时转化方法，操作简便、转化效率高；为绣球基础和应用研究提供平了重要的技术支持，以促进绣球产业发展
一种绣球原生质体制备瞬时转化方法

[发明专利]一种快速高效的水稻原生质体制备和转化方法-CN201310467412.1有效
发明人：朱英;段炼;徐恒;钱君;郭小雨 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2013-10-09 - 公布日： 2014-04-09 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速高效的水稻原生质体制备和转化方法，在拟南芥原生质体制备和转化的基础之上，对水稻原生质体的制备和转化方法进行改良优化。以水稻幼茎为起始材料，采用纤维素酶R-10和果胶酶R-10，对水稻组织进行消化并利用蔗糖密度梯度自沉降的方法分离原生质体，可获得高纯度的原生质体。对质粒转化原生质体时的转化方法、反应时间及质粒浓度进行探索，在缩短原生质体分离时间的同时，大大提高了转化效率。用较微量的质粒DNA即可获得外源基因在原生质体内高效的表达，且转化效率可达70%以上。本发明有益的效果：它能够克服采用离心法分离原生质体造成细胞碎片等杂质含量高的缺陷；明确茎、叶原生质体的形态差异；得到高纯度的原生质体；增进转化效率。
一种快速高效水稻原生质体制备转化方法

[发明专利]盐生草叶片细胞液泡的提取方法-CN201510894067.9有效
发明人：汪军成;王化俊;孟亚雄;李葆春;姚立蓉;马小乐;赖勇;杨柯;司二静;任盼荣 -专利权人：甘肃农业大学
申请日： 2015-11-27 - 公布日： 2018-07-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于植物细胞液泡提取技术领域，具体涉及一种盐生植物盐生草叶片细胞液泡提取的方法。一种盐生草叶片细胞液泡的提取方法，其主要特点在于步骤为：(1)叶片取材：(2)酶解和纯化原生质体：将步骤(1)获得的叶片从茎秆上沿叶片基部切割下来，然后放入酶解液，在温度22‑25℃、黑暗条件下，酶解2.5‑3.0h；酶解结束后，再向酶解液加入等体积的洗液；(3)液泡的获得与纯化：将毛地黄皂苷加入步骤(2)获得的原生质体中，即可实现纯净液泡的富集。使用了毛地黄皂苷来解离细胞质膜，从而简化了提取液泡的一般所采用的密度梯度离心复杂程序。本发明从嫩叶原生质体酶解到获得高纯度液泡仅需4h左右。实现了简单、高效、快捷实现盐生草叶肉细胞液泡的提取。
草叶细胞液泡提取方法

[发明专利]一种高粱原生质体酶解制备法-CN201310019034.0无效
发明人：李杰勤;王丽华;詹秋文;张俊 -专利权人：安徽科技学院
申请日： 2013-01-19 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：一种高粱原生质体酶解制备法，属于生物技术领域。高粱种子出苗后，将高粱幼叶切成一定大小，利用酶解液对幼叶细胞壁进行酶解，从而分离出大量高粱原生制体的方法。本方法简便，操作容易，效果好。
一种高粱原生质体制备

[发明专利]一种羊肚菌原生质体的高效制备方法-CN201610165040.0在审
发明人：谭俊呈;黄建星;兰健勇;陈振坤;易弋 -专利权人：广西生众生物科技开发有限公司
申请日： 2016-03-22 - 公布日： 2016-06-08 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种食用菌原生质体的高效制备方法，包括以下步骤：⑴收集新鲜羊肚菌孢子后置于液体培养基中培养，液体培养基是在常规PD培养基的基础上添加CuCl₂；⑵培养4-6天后，离心收集菌体将重悬后的菌体与石英砂混合后，振荡；⑷将震荡后的菌体过滤2次；⑸收集过滤液离心处理，菌体用PBS缓冲液洗涤2次后，再重悬于PBS缓冲液中；⑹向重悬液中添加溶壁酶、蜗牛酶，30℃处理1-3h；⑺将酶处理后的细胞于离心处理，沉淀经ZnCl₂溶液洗涤后，重悬于ZnCl₂溶液中，获得羊肚菌原生质体溶液。该方法通过先制备单细胞悬液，然后酶解制备原生质体，在此过程中通过添加金属离子控制菌丝生长和稳定原生质体，有效的提高了原生质体的制备效率。
种羊原生质体高效制备方法

[发明专利]一种赤水金钗石斛原生质体分离、纯化方法及专用试剂-CN201410153412.9有效
发明人：徐德林;钱刚;蔡振锋;杨璐萍;张林;储士润 -专利权人：遵义医学院
申请日： 2014-04-17 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：一种赤水金钗石斛原生质体分离、纯化方法及专用试剂。包括试剂A和试剂B。用该试剂制备原生质体：1）在摇床上用溶液A黑暗处理金钗石斛叶片碎片4h左右即可释放出叶片中的原生质体；2）将1）获得的原生质体溶液过200目的细胞筛过滤，收集滤液离心3min，用溶液B溶解沉淀物，反复离心纯化原生质体；3）用FDA对所纯化的原生质体进行活力检测。
一种赤水金钗石斛原生质体分离纯化方法专用试剂

[发明专利]一种通过原生质体高效富集植物线粒体的方法-CN202010701521.5在审
发明人：于婷乔;段光兴;袁英;张泉;苏都莫日根 -专利权人：北京大学
申请日： 2020-07-20 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：一种通过原生质体，高效富集植物线粒体的方法，该方法的技术核心在于原生质体的获得和滤膜的过滤，主要针对植物叶肉细胞及其他可以游离原生质体的组织成分，高效分离纯化线粒体，其步骤为：1)植物材料的培养；2)游离原生质体；3)利用渗透压自然胀裂原生质体；4)差速离心，获得粗线粒体；5)利用PES材质针头过滤器过滤粗线粒体的重悬缓冲液，得到纯净的线粒体；6)荧光显微镜检测线粒体纯度。
一种通过原生质体高效富集植物线粒体方法

[发明专利]深海真菌白色侧齿霉菌原生质体的制备及遗传转化方法-CN202010911175.3在审
发明人：郑华伟;余芝;王宗华;陈晓峰;姚光山 -专利权人：闽江学院
申请日： 2020-09-02 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明属于分子遗传学领域，具体涉及深海真菌白色侧齿霉菌原生质体的制备及遗传转化方法。本发明确定了制作原生质体的合适条件，包括用1.2 M KCl作为等渗溶液，以浓度为10 mg/mL的崩溃酶作为细胞壁裂解酶，制备较高质量的原生质体，并成功将GFP载体转入该原生质体中，且能稳定表达及产生荧光信号本发明建立了白色侧齿霉菌的原生质体制备及遗传转化体系，操作简单、成本低、效率高，为后续白色侧齿霉菌分子遗传转化及代谢途径研究奠定基础。
深海真菌白色霉菌原生质体制备遗传转化方法

[实用新型]一种植物原生质体高效分级纯化装置-CN202320486843.1有效
发明人：姚文孔;郝新意;冯美;张阁;刘德帅;张雪梅;王烨 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2023-03-15 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12M1/12 文献下载
摘要：本实用新型涉及生物技术领域，尤其是一种植物原生质体高效分级纯化装置，包括筒体，所述筒体上固定连接有连接环，所述连接环上套设有连接套，所述连接环的外壁与所述连接套内壁相抵接，所述连接套与所述内套管固定连接，所述内套管内通过支撑机构设置有细胞筛。本实用新型具有对原生质体按照直径的大小不同进行分级，保证了原生质体大小相同，并且没有对原生质体进行破坏，从而避免了高密度杂质的污染，有利于原生质体的保存。
一种植物原生质体高效分级纯化装置

[发明专利]一种甘蔗原生质体电融合的方法-CN201811276879.7在审
发明人：李素丽;宋亚妮;刘芳君;龙安四 -专利权人：广西大学
申请日： 2018-10-30 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明属于植物体细胞杂交技术领域，具体涉及一种甘蔗原生质体电融合的方法，包括以下步骤：(1)亲本原生质体的制备；(2)原生质体的钝化；(3)原生质体融合诱导物的添加：将植物凝集结合到其中一种亲本原生质体的表面，将生物素结合到另一种亲本原生质体的表面；(4)原生质体的融合。本发明利用植物凝集素可以和生物素结合的原理，分别将植物凝集和生物素结合到在两种亲本原生质体的表面，两种亲本原生质体在植物凝集素可以和生物素的诱导下融合，从而达到提高一对一融合率的作用，杂交后代同时具有ROC22
原生质体亲本生物素甘蔗凝集电融合凝集素高糖融合植物体细胞杂交原生质体融合耐寒基因杂交后代诱导物一对一钝化制备诱导高产基因