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[发明专利]雪莲原生质体的分离和培养方法-CN200910113470.8无效
发明人：王晓军;袁永娴;郝秀英;赵民安;刘敏;徐琴;康喜亮 -专利权人：中国科学院新疆理化技术研究所
申请日： 2009-09-30 - 公布日： 2010-03-17 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及新疆雪莲原生质体的分离和培养方法，该方法由无菌雪莲苗的培养、胚性愈伤组织的诱导及分化、原生质的分离与纯化和原生质体培养四个步骤完成，均适用于新疆雪莲的原生质体的分离和培养。同时本发明具有方法简单易于操作，对设备和培养条件的要求较低；此外，酶解的方法实用，去除细胞壁条件温和，分离原生质体的得率高、活性强易于雪莲原生质体的培养和植株再生，为原生质体培养和融合奠定了基础，也为新疆雪莲种质资源创新和转基因雪莲的研究奠定了基础
雪莲原生质体分离培养方法

[发明专利]一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法-CN201110248258.X无效
发明人：熊秋芳;张小康;张雪清 -专利权人：武汉市蔬菜科学研究所
申请日： 2011-08-24 - 公布日： 2012-04-18 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明涉及萝卜新品种的选育方法，具体公开了一种根叶两用加工型萝卜新品种的选育方法，其通过原生质体融合方式将萝卜体细胞与芥菜体细胞融合形成融合细胞；所述融合细胞培养发育成体细胞杂种植株；所述体细胞杂种植株通过定向选育方式获得新品种本发明将芥菜与萝卜进行原生质体融合获得地上叶子类似雪里蕻，风味独特，营养丰富，适合加工，特别是在综合经济效益高，节约土地，在经济效益方面每亩较单种雪里蕻增收1.2倍，较单种加工萝卜增收0.9倍，市场开发前景广阔
一种两用加工萝卜新品种选育方法

[发明专利]降解合成制药有机废水的特效菌株及构建方法-CN200410041125.5无效
发明人：程树培;张徐祥;孙石磊;魏国哲;于洪峰;张力;朱程军;万玉秋;李维新;于红霞;孙成;顾继东 -专利权人：南京大学
申请日： 2004-06-30 - 公布日： 2005-03-16 - 主分类号： C12N1/00 文献下载
摘要：降解制药废水特效菌株，其构建方法是将白腐真菌(Phanerochaete chrysosporium)真核细胞、土著细菌XZ1原核细胞(Bacillus)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)真核细胞，共三个亲株菌的两界细胞的原生质体进行融合，三亲基因在同一个细胞内重组整合，构建出基因工程特效菌。原生质体融合不产生新基因，不存在基因污染问题。
降解合成制药有机废水特效菌株构建方法

[发明专利]用于高产L-乳酸的米根霉原生质体的制备与再生方法-CN201010553718.5有效
发明人：姜绍通;罗水忠;潘丽军;邱静;郑志;吴学凤 -专利权人：合肥工业大学
申请日： 2010-11-23 - 公布日： 2011-05-18 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及用于高产L-乳酸的米根霉原生质体的制备与再生方法。该方法包括以下操作步骤：A、制备米根霉孢子悬液，B、制备种子培养液，C、制备菌丝悬液，D、酶解细胞壁，E、原生质体分离，F、原生质体再生。本发明所制备的米根霉原生质体形态近似圆形，活力较高，米根霉原生质体制备数最高能达到2.74×106个/mL，再生率最高为6.8%。本发明方法易于操作，设备要求低，为霉菌原生质体制备及再生提供技术参考。本发明所述方法原生质体制备速度较快，原生质体再生周期短，再生速度快，可以有效提高原生质体制备效率。利用本发明制备的原生质体完全满足原生质体融合的要求，为原生质体的制备与再生提供了一种具有实际意义操作方法。
用于高产乳酸米根霉原生质体制备再生方法

[发明专利]小麦原生质体的制备方法及小麦原生质体介导的转化方法-CN201911178070.5在审
发明人：白建芳;张立平;赵昌平;郭昊宇;苑少华;刘子涵;李艳梅 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2019-11-27 - 公布日： 2020-02-28 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于农业生物技术领域，具体涉及小麦原生质体的制备方法及小麦原生质体介导的转化方法。本发明的小麦原生质体制备方法包括以下步骤：培养小麦种子；剪取三叶期的小麦苗叶片，利用酶解液酶解；固液分离，得到小麦原生质体。本发明建立了小麦原生质体制备及转化体系，方法简单、有效，可以用于小麦蛋白亚细胞定位，小麦蛋白互作和蛋白纯化以及荧光素酶标记的基因表达等方面的研究。
小麦原生质体制备方法转化

[发明专利]一种柑橘原生质体裂解液及其应用、柑橘果肉液泡的提取方法-CN202211689538.9在审
发明人：匡柳青;樊友富;刘勇;杨莉;胡威;刘德春 -专利权人：江西农业大学
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于植物细胞液泡提取技术领域，具体涉及一种柑橘原生质体裂解液及其应用、柑橘果肉液泡的提取方法。本发明柑橘原生质体裂解液包括0.2～0.8M甘露醇，10wt.％Ficoll，10～20mMEDTA，1～5mMDTT和10～20mMpH缓冲液；所述柑橘原生质体裂解液的pH为7.8～8.5。本发明通过精心调配柑橘原生质体裂解液，可以更好地破碎柑橘原生质体，使柑橘液泡游离出来，保持液泡的生理状态，增大柑橘液泡的提取数量和提取效率。
一种柑橘原生质体裂解及其应用果肉液泡提取方法

[发明专利]一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法-CN201810782239.7在审
发明人：胥猛;徐梦璇;杨章旗;徐立安;冯源恒 -专利权人：南京林业大学;广西壮族自治区林业科学研究院
申请日： 2018-07-16 - 公布日： 2018-12-21 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法，首先使用组合酶将马尾松针叶细胞酶解成原生质体，得到的原生质体经分离、纯化和预处理后，利用PEG法将携带GFP标签的空载体转入马尾松原生质体中，经过培养，使得空载体在原生质体中表达。本发明构建得到马尾松原生质体瞬时表达系统，易于操作和实现，该方法的转化效率可达60％，为马尾松功能基因研究提供了快速便捷的研究平台。本发明所使用的酶解体系适用于马尾松实生苗，利用幼嫩的针叶可得到较高质量的原生质体，原生质体活力可达80％以上，对于野外的成熟叶组织也适用。
原生质体马尾松马尾松针叶原生质体分离高效转化预处理瞬时表达系统原生质体活力功能基因酶解体系转化效率成熟叶空载体实生苗细胞酶组合酶构建针叶标签野外转入携带研究

[发明专利]一种制备高质量地黄原生质体的方法-CN202210137430.2在审
发明人：杨艳会;杨慕荣;董柯炜;崔柳青;李瑞芳;张高阳;伊艳杰;谭曦;王驰 -专利权人：河南工业大学
申请日： 2022-02-15 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备高质量地黄原生质体的方法，包括如下步骤：(1)地黄叶片预处理：取地黄幼苗叶片，剪成细条状，置于缓冲液中避光浸泡处理；(2)酶解：将预处理后的地黄叶条转移到酶解液中，避光振荡酶解；(3)原生质体分离；(4)原生质体纯化：分离的原生质体使用缓冲液重悬；重悬后液体添加于蔗糖盐溶液上层，离心；离心后中层为原生质体带。本发明方法简单，制备的原生质体形态规则，结构完整，活体原生质体含量高、质量好，为利用地黄原生质体作为实验材料进行遗传转化、快速繁殖、体细胞杂交、优良品种的选育等遗传与分子生物学领域的研究奠定基础。
一种制备质量地黄原生质体方法

[发明专利]一种耐冷好氧反硝化简单芽孢杆菌原生质体制备与转化的方法-CN202310893284.0在审
发明人：张梁;杨倩;辛瑜;顾正华;郭忠鹏;朱瑞 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-07-19 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种耐冷好氧反硝化简单芽孢杆菌原生质体制备与转化的方法。本发明所述制备与转化方法为：首先进行培养液的制备，然后进行原生质体悬液的制备，随后将原生质体悬液涂布于高渗固体培养基上进行原生质体的再生，以评估原生质体细胞的质量，最后PEG介导质粒转化原生质体。所获得的原生质体制备率可达95.94％，再生率可达16.35％，对质粒pNZTT和pMA5的转化分别可达到5.8和4.6个转化子/μg DNA。本发明原生质体制备与转化方法操作简单，可重复性强，不需要特定的转化设备，可为该野生菌株后续进行基因操作和分子水平改良提供基础。
一种耐冷好氧反硝化简单芽孢杆菌原生质体制备转化方法

[发明专利]一种亚洲棉原生质体的分离与外源基因转化的方法-CN201910257339.2有效
发明人：杜雄明;王丽媛;王晓阳;傅国勇;何守朴;潘兆娥;陈保军;贾银华;耿晓丽;王立如;庞保印;李洪戈 -专利权人：中国农业科学院棉花研究所
申请日： 2019-04-01 - 公布日： 2020-06-23 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种亚洲棉原生质体分离与外源基因转化的方法。该方法包括亚洲棉种子萌发、酶解分离原生质体、离心收集原生质体、培养、外源基因转化及显微观察鉴定等步骤。本发明黑暗环境中生长的叶片所分离的原生质体浓度符合实验需求且完整度高，可得到完整的转化成功的原生质体。因此本发明得出的利用黑暗环境培养的叶片分离原生质体方法，更好地解决了亚洲棉原生质体分离及外源基因转化的难题。亚洲棉原生质体分离及外源基因成功转化，可为开展亚洲棉大规模细胞培养、有目的地导入外源基因及进一步创新和品质改良工作提供基础帮助。
一种亚洲原生质体分离基因转化方法

[发明专利]一种快速获得植物纯合同源多倍体的方法-CN201010527122.8无效
发明人：刘剑锋;程云清;刘春明;王占武 -专利权人：吉林师范大学
申请日： 2010-10-29 - 公布日： 2012-05-16 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速获得植物纯合同源多倍体的方法，该方法步骤是在原生质体加倍前对原生质体进行直径测量，根据所测得的细胞直径预测融合加倍原生质体的直径变化范围；原生质体融合；对融合加倍后的原生质体进行低融点、低密度琼脂包埋，以预测的加倍原生质体的直径为标准，通过倒置显微镜活体标记目标倍性的原生质体；通过培养标记后的融合原生质体获得目标多倍体再生植株。
一种快速获得植物同源多倍体方法

[发明专利]包含香豆酸的抗球虫组合物及其用途-CN202280006974.3在审
发明人：孙圭烈;朴敏我;李径珉;金辉在 -专利权人： CJ第一制糖株式会社
申请日： 2022-03-04 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： A61K31/192 文献下载
摘要：根据一种实施方式，包含香豆酸和/或其盐的组合物具有抑制可诱发球虫病的原生动物的细胞渗入和/或抑制原生动物在细胞中的增殖的优异作用，具有在体内预防、缓解和治疗球虫病的优异作用，并且显著降低粪便中的卵囊排泄率
包含香豆酸抗球虫组合及其用途

[发明专利]一种油莎豆原生质体的制备方法-CN202211130820.3在审
发明人：张向歌;王会伟;朱雅婧;李春鑫;王艳;李居政;王晓青 -专利权人：河南省农业科学院经济作物研究所
申请日： 2022-09-16 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种油莎豆原生质体的制备方法，包括以下步骤：(1)分别油莎豆幼嫩根、芽、叶片、茎、匍匐茎和分蘖节6个不同组织；(2)快速将所述组织切成细条或薄片，然后迅速将其转移至盛有酶解液的细胞培养板中，使其完全沉浸于酶解液中；(3)将细胞培养板置于摇床上，避光酶解；(4)将酶解后的酶解液用尼龙网筛过滤，过滤后将残渣夹回原生质体容器中，然后用W5溶液洗涤后再次过滤，直至将残渣充分洗涤，最后再用尼龙网将滤液重复过滤得最终滤液；(5)将最终滤液进行离心，倒掉所述上清液，用W5溶液稀释重悬所述原生质体沉淀，得所述油莎豆原生质体。本发明的制备方法有效地解决了油莎豆原生质体制备效率低、完整性差的难题。
一种油莎豆原生质体制备方法

[发明专利]疫苗输送组合物及使用方法-CN200680003526.9无效
发明人： W·G·图内尔;V·P·瓦西列夫;K·M·德菲菲;H·李;Z·D·戈穆拉什维利;R·卡察拉娃 -专利权人：梅迪沃什有限公司
申请日： 2006-01-31 - 公布日： 2009-08-12 - 主分类号： C08G18/80 文献下载
摘要：本发明提供了基于聚酰胺酯(PEA)、聚酯型氨基甲酸酯(PEUR)和聚酯脲(PEU)聚合物的合成疫苗输送组合物，用于在人类和其它哺乳动物中刺激对各种病原生物和肿瘤细胞的免疫应答。所述疫苗输送组合物被配制为聚合物颗粒或分子的液体分散体，该分散体包含来源于生物体或肿瘤细胞蛋白质的I类或II类抗原肽，其被哺乳动物抗原呈递细胞摄取而诱导哺乳动物的免疫应答。诱导针对本发明组合物中的病原生物或肿瘤细胞的免疫应答的方法也被包括在内。
疫苗输送组合使用方法

[发明专利]在植物原生质体中使用双链RNA提高靶基因改变的效率-CN200980151853.2无效
发明人： P·本多克 -专利权人：凯津公司
申请日： 2009-12-22 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：使植物细胞原生质体中靶基因改变的方法，其包括用dsRNA和突变核苷碱基短暂转染原生质体的步骤，该dsRNA优选靶向于植物MMR??mRNA。
植物原生质体使用 rna 提高基因改变效率