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[发明专利]一种细胞因子颗粒及其应用-CN201510048164.6有效
发明人：张永辉;林小靖 -专利权人：张永辉;林小靖
申请日： 2015-01-30 - 公布日： 2017-11-24 - 主分类号： C07K14/52 文献下载
摘要：本发明提供一种细胞因子颗粒及其应用，其包括细胞因子颗粒制作方法，所述的颗粒包含一个或多个细胞因子以及重组蛋白gag形成的颗粒；以及细胞因子颗粒体外刺激单个核细胞分化的方法，其中包括细胞因子颗粒体外刺激单个核细胞分化为NK细胞或T细胞并扩增其数量。细胞因子颗粒比细胞因子刺激作用更强，效果显著。
一种细胞因子颗粒及其应用

[发明专利]细胞因子刺激剂及诱导淋巴细胞产生细胞因子的方法-CN202211530415.0在审
发明人：刘云海;请求不公布姓名;胡晓飞;邵丹 -专利权人：山东博群生物技术有限公司
申请日： 2022-11-30 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了细胞因子刺激剂及诱导淋巴细胞产生细胞因子的方法。本发明的技术方案为一种诱导淋巴细胞产生细胞因子的细胞因子刺激剂，所述细胞因子刺激剂包括佛波酯、离子霉素、糖类、布雷非德菌素a以及样品稀释液。该混合物的应用包括人外周单个核细胞的制备、人外周单个核细胞细胞量浓度确定、细胞因子刺激剂诱导及孵育、细胞固定破膜、加入抗体、流式细胞仪测定等步骤。本发明综合考察了外周单个核细胞中细胞因子的检测方法，本发明可以诱导多种淋巴细胞细胞因子的产生，简化使用流式细胞仪测定人体血液中细胞因子的繁琐过程，适用范围广、方法简单便捷，可以有效检测出相应细胞分泌的细胞因子
细胞因子刺激剂诱导淋巴细胞产生方法

[发明专利]一种用磷酸盐扩增γδT细胞的方法及其应用-CN201310596715.3在审
发明人：金言;党利君;胡玉婷;张茜;任广慧;万晓春 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2013-11-22 - 公布日： 2015-05-27 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种体外扩增人γδT细胞的方法及其应用。所述体外扩增人γδT细胞的方法包括如下步骤：（1）制备或提供单个核细胞；（2）将单个核细胞加入细胞培养液中，置于细胞培养箱中培养，以及（3）收获所述细胞；所述细胞培养液中含有(1-羟基-3-(甲基戊基氨基)丙叉)二膦酸单钠盐以及人重组白细胞介素rhIL-2。本发明采用rhIL-2和IBA联合刺激人外周血单个核细胞（PBMC）的方法在体外扩增人γδT细胞，该方法成本低、制备简单、扩增效率高，且能得到肿瘤杀伤力强、TCR克隆多样的γδT细胞。
一种磷酸盐扩增细胞方法及其应用

[发明专利]一种采用TLR7激动剂刺激的自体外周血淋巴细胞的培养方法-CN201910013238.0在审
发明人：孙明辉;陈义;庄志伟;逯晓明 -专利权人：山东博森医学工程技术有限公司
申请日： 2019-01-07 - 公布日： 2019-05-31 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明属于免疫细胞体外培养技术领域，特别涉及一种采用TLR7激动剂刺激的自体外周血淋巴细胞的培养方法，包括如下步骤：用单个核细胞分离管和Percoll分层液从成人外周血中分离出单个核细胞和自体血清，将单个核细胞在外周血淋巴细胞培养基上进行体外培养；对体外培养的单个核细胞分瓶，1号培养瓶用OKT3抗体、OKT28抗体及细胞因子活化剌激，2号培养瓶中加入自体肿瘤抗原、细胞因子和TLR7激动剂培养后，然后合瓶培养，能有效地提高特异性效应细胞群活化效率和扩增效率本发明充分运用自体肿瘤抗原和过程产物自体血清，对自体肿瘤细胞的杀伤更有针对性，以蠕动泵补充培养基为淋巴细胞扩增创造最优条件，所获得的淋巴细胞亚群具有特异性高杀伤肿瘤细胞的能力。
单个核细胞淋巴细胞自体肿瘤抗原自体外周血体外培养自体血清培养基培养瓶抗体特异性效应细胞外周血淋巴细胞淋巴细胞亚群杀伤肿瘤细胞细胞体外培养细胞因子活化自体肿瘤细胞过程产物扩增效率细胞因子最优条件分层液分离管蠕动泵外周血有效地刺激活化扩增杀伤补充

[发明专利]一种利用低氧三维环境培养的间充质干细胞富集脐血造血干细胞的方法-CN202210310427.6在审
发明人：李栋;付强;戴晓宇;刘抗;刘玲玲;邓恩杰;白希 -专利权人：重庆市铂而斐细胞生物技术有限公司
申请日： 2022-03-28 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用低氧三维环境培养的间充质干细胞富集脐血造血干细胞的方法。包括以下步骤：在表面具有微拓扑结构的细胞培养基底上接种间充质干细胞，在低氧条件下培养；将脐血单个核细胞接种到间充质干细胞共培养，从而富集造血干细胞。本发明利用特定的低氧三维环境使间充质干细胞富集脐血单个核中CD34阳性造血干细胞，通过间充质干细胞与造血干细胞之间的相互作用，直接将脐血单个核细胞中的造血干细胞分离出来。该方法成本低廉，实验步骤简便，且在体外能维持造血干细胞的干性及活性。
一种利用低氧三维环境培养间充质干细胞富集造血方法

[发明专利]一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒及检测方法-CN201810331146.2有效
发明人：何韶衡;何萍 -专利权人：何韶衡
申请日： 2018-04-13 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明提供了一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒及其检测方法，属于细胞亚型检测技术领域。本发明提供的试剂盒，包括以下组分：血液稀释液，单个核细胞分离液，细胞培养液，淋巴细胞活化液，死细胞去除染料，FcR阻断剂、荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体、荧光标记的抗人细胞内分子的抗体、PBS缓冲液、脂多糖、洗涤缓冲液、细胞染色缓冲液、细胞固定液和透膜洗液。检测时，首先分离全血中的单个核细胞，其次刺激人外周血单个核细胞，最后荧光抗体染色即可检测调节性T细胞亚型。利用本发明的试剂盒及检测方法可简单快捷的分辨2‑6种调节性T细胞亚型。
一种检测调节细胞试剂盒方法

[发明专利]用于冻存单个核细胞的冻存液-CN201110185230.6无效
发明人：吴莉芳;刘陈雄;李陶;姜舒;胡祥 -专利权人：深圳市北科生物科技有限公司
申请日： 2011-07-04 - 公布日： 2012-01-04 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于冻存单个核细胞的冻存液及其制备方法，属于生物技术领域。用于冻存单个核细胞的冻存液，包含血浆和二甲基亚砜。本发明主要应用于单个核细胞的冻存，具有冻存效果好和节约成本的优点。
用于单个细胞冻存液

[发明专利]细胞冻存液及其制备方法和应用、单个核细胞的冻存方法及回输方法-CN202110346285.4在审
发明人：周慧;杨铭斌;姜粉军;姜宁健;袁春梅;刘杨;吴威 -专利权人：北京益华生物科技有限公司
申请日： 2021-03-31 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明是关于一种细胞冻存液及其制备方法和应用、单个核细胞的冻存方法及回输方法。所述细胞冻存液用于冻存单个核细胞；所述细胞冻存液由人自体血清、羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、海藻糖、BDNF和GDNF组成；其制备方法是先将人自体血清和羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液混合；再向其中加入海藻糖、BDNF和GDNF，混合均匀；使用前述的细胞冻存液冻存单个核细胞；将冻存的单个核细胞从液氮中取出，37℃水浴中融化，直接输入人体内。所要解决的技术问题是如何提供一种冻存液使得由其冻存的细胞可以在融化后直接回输人体，且由其冻存的细胞既具有较高的细胞活率，又成本经济，同时还方便、快捷、高效，从而更加适于实用。
细胞冻存液及其制备方法应用单个

[发明专利]一种脐血来源的高活性内皮祖细胞的获取方法-CN202310750745.9在审
发明人：魏伟;张中夏 -专利权人：广州市天河诺亚生物工程有限公司
申请日： 2023-06-25 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种脐血来源的高活性内皮祖细胞的获取方法，包括：将脐血进行离心，收集上清为脐血浆，沉淀为浓缩脐血，对脐血浆进行离心获得富血小板血浆，再将浓缩脐血进行液氮冷冻储存，复苏冷冻储存的脐血，将复苏后的脐血进行离心获得单个核细胞，将单个核细胞进行静置培养，静态培养后取未贴壁的细胞接种于经过包被的培养容器内继续进行静置培养即可获得内皮祖细胞。本发明首次使用冻存后浓缩的脐血进行提取单个核细胞，选择性地保留了细胞活性较高、分化潜能更强的单个核细胞，并通过构建出符合内皮祖细胞生长增殖的微环境，将内皮祖细胞接种在构建的微环境中继续培养的方式，更有利于获得大量具有更强迁移、增殖和分化潜能的内皮祖细胞。
一种来源活性内皮细胞获取方法

[发明专利]单细胞水平高效扩增基因3＇UTR序列的新方法-CN201410216396.3无效
发明人：夏翃;华琳;周萍 -专利权人：首都医科大学
申请日： 2014-05-21 - 公布日： 2014-11-12 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及单细胞水平高效扩增基因的新方法。所述新方法能够精确、敏感地从在单个上扩增出目的基因。这种方法可以用来了解单个细胞基因表达水平，比传统的众多细胞平均基因表达水平更适合研究细胞状态及功能。
单细胞水平高效扩增基因 utr 序列新方法

[发明专利]一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法-CN201711146080.1在审
发明人：李晓华;杨思洁;连雪琪;江佳佳 -专利权人：张家港澳洋医院有限公司
申请日： 2017-11-17 - 公布日： 2018-04-13 - 主分类号： C12N5/095 文献下载
摘要：本发明公开了一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法，解决了现有技术难以获取符合药物的药效研究要求、数量足够且数量可控的肿瘤干细胞的问题。本发明的方法包括(1)获取悬浮的单个肿瘤细胞，接种于培养皿中进行单层贴壁细胞培养，培养过程中加入脂多糖培养4～10h；(2)添加胰蛋白酶消化，然后洗涤获得脂多糖处理后的单个肿瘤细胞；(3)将脂多糖处理后的单个肿瘤细胞与干细胞培养液混合获得细胞悬液；(4)细胞悬液经悬浮培养后获得肿瘤干细胞。本发明能够获得符合药物的药效研究要求的肿瘤干细胞，且诱导生成的肿瘤干细胞具有数量显著增加、数量可控等优点。
一种多糖诱导肿瘤细胞生成干细胞用途方法

[发明专利]一种脐血造血干细胞体外扩增的方法-CN202010036001.7在审
发明人：程志远;王小龙;张雪梅;陈乐;李欢欢 -专利权人：河南省银丰生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2020-01-14 - 公布日： 2020-06-23 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明公开了一种脐血造血干细胞体外扩增的方法，包括人脐血单个核细胞分离收集、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞包装及回收、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞培养、造血干祖细胞检测、实验数据统计学分析。本发明的有益效果是：利用藻酸盐三维培养系统体外扩增人脐血造血干祖细胞，三维培养体系模拟骨髓微环境而设计，利用藻酸盐二维培养体系，包装脐血单个核细胞,培养于培养皿静止系统和旋转培养系统中；通过改变扩增脐血造血干祖细胞的培养环境和下调脐血干祖细胞细胞周期负向调控分子,达到或部分达到了扩増脐血造血干祖细胞的目的，其中三维藻酸盐培养系统对脐血干祖细胞的扩増达到理想结果，对实现脐血干细胞更高转化效率打下了很好的基础。
一种造血干细胞体外扩增方法

[发明专利]一种高细胞毒活性的CIK细胞的制备方法-CN201510837518.5有效
发明人：熊桂荣 -专利权人：嵊州明智科技服务有限公司
申请日： 2015-11-26 - 公布日： 2019-03-26 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种高细胞毒活性的CIK细胞的制备方法，包括如下步骤：(1)取患者外周血，收集外周血的单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血的单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×10⁶/mL细胞，加入含500～2000IU/mLγ干扰素和80～120ng/mL Turrapubin A的完全培养基，开始诱导培养；其中，完全培养基，包括含体积百分比为10％FBS的RPMI 1640细胞培养液；(4)步骤(3)的细胞培养20～28小时后，加入50～1000ng/mL抗人CD3单克隆抗体和500～2000IU/mL重组人IL‑2，继续诱导培养，其中，每隔2～3天传代培养一次，整个诱导培养的时间为13～21天，获得CIK细胞。本发明提供的制备方法可以获得高纯度、高增殖力和高细胞毒活性的CIK细胞，可用于肿瘤的细胞免疫治疗。
一种细胞活性 cik 制备方法

[发明专利]一种天然产物及用其制备高细胞毒活性CIK细胞的方法-CN201510633403.4无效
发明人：杨廷稳 -专利权人：杨廷稳
申请日： 2015-09-29 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： C07D307/54 文献下载
摘要：本发明公开一种天然产物及用其制备高细胞毒活性CIK细胞的方法，该天然产物为首次报道的新化合物，用该化合物制备高细胞毒活性CIK细胞包括：(1)取患者外周血，收集外周血单个核细胞部分；(2)将步骤(1)收集的外周血单个核细胞部分离心，弃去上清液，获得单个核细胞；(3)取单个核细胞按照1×10⁶/mL细胞，加入含500～2000IU/mLγ干扰素和80～120ng/mL该化合物的完全培养基，开始诱导培养；完全培养基包括含体积百分比为10％FBS的RPMI 1640细胞培养液；(4)步骤(3)的细胞培养20～28小时后，加入50～1000ng/mL抗人CD3单克隆抗体和500～2000IU/mL重组人IL-2，继续诱导培养，每隔2～3天传代培养一次，诱导培养时间为13～21天，获得CIK细胞。该CIK细胞可用于免疫治疗。
一种天然产物制备细胞活性 cik 方法

[发明专利]一种扩增NK细胞的方法-CN201610482853.2在审
发明人：卢绪章;陆肇阳;沈健 -专利权人：江苏蒙彼利生物科技有限公司
申请日： 2016-06-27 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种扩增NK细胞的方法，该方法使用失活的LCL饲养细胞、外周血单个核细胞、细胞因子IL‑2和IL‑15在细胞培养液中进行细胞培养，对外周血单个核细胞中的NK细胞选择性的扩增，其中外周血单个核细胞与失活的LCL饲养细胞的配比为0.5～2.5，细胞因子IL‑2的浓度为100～500U/L，细胞因子IL‑15的浓度为5～50ng/ml。本发明的有益效果是：显著提高了NK细胞的扩增效率，而且提高了NK杀伤功能；通过实验，本发明的方案可以扩增NK细胞达600～800倍，与新鲜分离的NK细胞比较，对白血病细胞K562杀伤能力提高10倍，与单纯的利用IL‑2培养后的NK细胞对白血病细胞K562杀伤能力提高20％以上。
一种扩增 nk 细胞方法