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[发明专利]自体特异性T细胞的体外扩增方法及所制备的T细胞体系、体系的药物应用和组分监测方法-CN201210130553.X无效
发明人：寇中琛 -专利权人：北京爱根生物科技有限公司
申请日： 2012-04-28 - 公布日： 2012-10-10 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种自体特异性T细胞的体外扩增方法及采用该方法所制备的T细胞体系、该细胞体系在药物中的应用以及该细胞体系的组分监测方法，所述体外扩增方法包括如下步骤：（1）从患者的外周血中分离外周血单个核细胞；（2）根据需要加入相应的T细胞刺激因子，加入或不加入相应的细胞生长因子，在相应的培养基中对步骤（1）分离出的外周血单个核细胞进行体外培养来扩增T细胞，采用该方法可以在GMP的环境下根据临床的不同需要制备出不同功能性的多克隆免疫活性细胞
特异性细胞体外扩增方法制备体系药物应用组分监测

[发明专利]一种脐血单个核细胞的分离方法及其应用-CN202010482435.X在审
发明人：嵐山芮;魏伟;徐佳 -专利权人：广州市天河诺亚生物工程有限公司
申请日： 2020-05-29 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种脐血单个核细胞的分离方法及其应用，属于细胞分离技术领域。本发明方法只需将脐带血与Ficoll试剂混合，静置处理，得到分层液，再吸取中间白膜层的细胞，洗涤，所得沉淀中即包含所述的脐带血单个核细胞。本发明方法采用静置的方式，易于操作，花费时间短，且避免了离心对细胞造成的损伤，保证了细胞的存活率。本发明方法不需要对血液进行稀释处理，耗时更短。
一种单个细胞分离方法及其应用

[发明专利]人体外周血单个核细胞低温冻存与复苏后诱导的方法-CN201510933861.X有效
发明人：左红斌;路春霞 -专利权人：吉林省银丰生物工程技术有限公司
申请日： 2015-12-15 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及细胞冻存复苏诱导技术领域，特别涉及一种人体外周血单个核细胞低温冻存与复苏后诱导的方法：PBMC的分离与冻存：冻存母液组成为DMSO和低分子量40KD右旋糖苷,甘油磷脂，EG；PBMC的复苏；复苏后向本发明中复苏的细胞存活率94.2%±3.42%，利用冻存技术保存了PBMC的细胞活性，复苏后诱导为AIL细胞的比率为53.1%，活化率高，从而提高了采集的外周血单个核细胞的复苏和诱导活化率。
人体外周血单个细胞低温复苏诱导方法

[发明专利]一种外周血NK细胞的体外诱导扩增培养方法-CN201610242598.4有效
发明人：陈继冰;牛立志;徐克成 -专利权人：广州复大医疗有限公司
申请日： 2016-04-18 - 公布日： 2020-06-02 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种外周血NK细胞的诱导扩增培养方法。本发明所述的外周血NK细胞的诱导扩增培养方法是通过应用细胞因子白介素‑2、白介素‑15、4‑1BBL和SCGM培养基联合培养外周血单个核细胞，前期白介素‑15和4‑1BBL孵育固定在细胞培养板上诱导激活单个核细胞中的少量NK细胞快速增殖，后期溶解性的白介素‑15和4‑1BBL诱导NK细大量快速增殖，然后收集培养的NK细胞进行细胞纯度和对肿瘤细胞杀伤作用的检测以确保NK细胞的抗肿瘤作用。本发明方法诱导培养过程简单易行，周期较短，成本低廉；获得率高，重复性好；培养后细胞活力好，获得的NK细胞数量和活力均能保证临床肿瘤免疫治疗的应用。
一种外周血 nk 细胞体外诱导扩增培养方法

[发明专利]一种具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法-CN201110446645.4无效
发明人：陈晓波;韩洪起;韩俊领;黄家学;武文杰;侯士芳;张宇光 -专利权人：协和干细胞基因工程有限公司
申请日： 2011-12-28 - 公布日： 2013-07-03 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法，利用密度为1.084的Ficoll单核细胞分离液于PBS系统中分离外周血或脐带血单个核细胞，并且通过17-20天的诱导培养获得CIK细胞。本发明利用ficoll密度梯度离心法高效分离获得单个核细胞、并利用细胞培养袋和CIK细胞培养系统获得足量的CIK，可以满足临床治疗的需求。本方法采用Takara淋巴细胞培养基，和自体血清、细胞因子联合培养技术，避免了胎牛血清的应用，减少外源致热源、致敏原污染几率，同时保持了CIK细胞高效扩增的优点；利用细胞培养袋技术、减少细胞污染几率，适合临床治疗应用
一种具有肿瘤细胞杀伤作用 cik 制备方法

[发明专利]制备天然杀伤T(NKT)细胞刺激性树突细胞的方法及制备含有NKT细胞刺激性树突细胞和NKT细胞的细胞组合物的方法-CN201780059547.0在审
发明人：野口活夫;只木敏雅 -专利权人：株式会社理研免疫再生医学
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2019-06-04 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本申请提供了一种制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，该方法包括：将单个核细胞置于培养容器内并通过保持该培养容器静置而使得所述单个核细胞中的一些沉降于所述容器的底表面上的步骤；将除已沉降于所述培养容器的底表面上的细胞以外的悬浮细胞去除的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使已沉降于所述底表面上的细胞中的单核细胞分化为未成熟树突细胞的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使所述未成熟树突细胞成熟；和通过向所述培养容器内添加α‑半乳糖神经酰胺而将成熟树突细胞诱导为NKT细胞刺激性树突细胞的步骤。
培养容器树突细胞沉降制备未成熟树突细胞单个核细胞成熟树突细胞细胞刺激性细胞组合物细胞单核细胞神经酰胺悬浮细胞半乳糖杀伤去除诱导分化成熟申请

[发明专利]人源重建鼠模型及其应用-CN200810041842.6无效
发明人：刘枚华;王焱 -专利权人：杭州万明生物科技有限公司
申请日： 2008-08-19 - 公布日： 2010-02-24 - 主分类号： A61B19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种建立人源重建鼠的方法，所述的方法包括步骤：给免疫缺失的鼠施用人外周血单个核细胞(PBMC)。本发明还公开了一种检测组织工程移植物的免疫原性的方法，所述的方法包括步骤：(a)将人外周血单个核细胞施用于免疫缺失的鼠，得到人源重建鼠；(b)给予该人源重建鼠组织工程移植物；和(c)检测该人源重建鼠的体液和/或细胞免疫水平。
重建模型及其应用

[发明专利]用于肿瘤免疫治疗的多系活化杀伤细胞的制备方法-CN201410436844.0在审
发明人：苏晓三;汪珺;王翼寅;陈睿;杨柳;张蕾 -专利权人：昆明市第一人民医院
申请日： 2014-09-01 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N5/0786 文献下载
摘要：本发明公开一种用于肿瘤免疫治疗的多系活化杀伤（Polylineageactivatedkiller，PAK）细胞的制备方法，通过从恶性肿瘤患者或健康人外周血分离单个核细胞，然后将外周血单个核细胞加入抗TCRγδ单抗和IFN-γ体外诱导PAK细胞，体外诱导72小时后，再将PAK细胞在抗TCRγδ单抗、抗CD3单抗和IL-2存在下进行扩增。制备出的PAK细胞应包含TCRγδ⁺细胞、CD3^—CD56⁺（NK）细胞、CD3⁺CD56⁺（NKT）细胞以及CD3⁺CD8⁺细胞，具有更强的抗肿瘤效应，对人肺腺癌A549及人肺鳞癌YTMLC的杀伤活性均高于细胞因子诱导的杀伤（Cytokineinducedkiller，CIK）细胞。
用于肿瘤免疫治疗活化杀伤细胞制备方法

[发明专利]一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂及其有效制备方法-CN201510410511.5在审
发明人：周萱;王云娟;吴海敏 -专利权人：奥思达干细胞有限公司
申请日： 2015-07-14 - 公布日： 2015-09-16 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种人免疫活性细胞DC-CIK细胞制剂及其有效制备方法，包括以下步骤：（1）从人外周血中分离出单个核细胞；（2）将单个核细胞接种到无血清培养基中，加入IFNγ、GM-CSF、IL-4，培养1天；（3）加入IL-2、IL-15、抗CD3单抗培养2天；（4）加入TNFα继续培养1天，促进DC细胞成熟；（5）加入IL-2和IL-15继续培养8天，即得DC-CIK细胞，（6）收集DC-CIK细胞，并制作成细胞制剂。本发明通过优化DC-CIK细胞的培养方案，不仅缩短了细胞的培养时间，提高了增殖速度，增强了DC-CIK细胞对癌细胞的杀伤活性，也简化了操作步骤，便于临床推广应用。
一种免疫活性细胞 dc cik 制剂及其有效制备方法

[发明专利]从脐带血中扩增Vα24NKT细胞的方法-CN200810202517.3无效
发明人：高峰 -专利权人：章毅;上海市干细胞技术有限公司
申请日： 2008-11-11 - 公布日： 2009-04-08 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明涉及脐带血血液制品，公开了一种从脐带血中扩增Vα24NKT细胞的方法，目的是克服Vα24 NKT细胞在脐血中的含量极少，很难用于临床研究和治疗的缺陷，该方法包括下列步骤：A.脐带血采集和保存；B.脐带血单个核细胞纯化；C.脐带血单个核细胞中Vα24NKT细胞体外扩增。本发明从脐带血中扩增Vα24 NKT细胞的方法具有扩增效率高，特异性强，获得的Vα24 NKT细胞具有分泌INF-γ和IL-4的双向免疫调控能力，在临床研究和治疗中具有非常广泛的应用。
脐带血扩增 24 nkt 细胞方法

[发明专利]一种Treg细胞的扩增培养基以及体外扩增方法-CN201910506866.2在审
发明人：曾宪卓;党智笙;汪月 -专利权人：深圳爱生再生医学科技有限公司
申请日： 2019-06-12 - 公布日： 2019-09-17 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：为克服现有培养Treg细胞方法存在Treg细胞占比低以及扩增效率低的问题，本发明提供了一种Treg细胞的扩增培养基，所述扩增培养基中加入有CD3和/或CD28抗体以及孕激素。本发明还提供了一种Treg细胞体外扩增方法，包括以下操作步骤：获取含有Treg细胞的血样，由血样分离单个核细胞；通过培养基对单个核细胞继续培养，所述培养基中加入有CD3和/或CD28抗体以及孕激素。本发明提供的Treg细胞体外扩增方法在模拟的妊娠微环境条件下，极大提高了体外扩增Treg细胞的效率。
扩增培养基单个核细胞体外扩增培养基血样孕激素外扩扩增效率微环境妊娠

[发明专利]一种T细胞受体的扩增方法-CN201810172655.5在审
发明人：许嘉峰 -专利权人：许嘉峰
申请日： 2018-03-01 - 公布日： 2019-09-10 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种T细胞受体的扩增方法，包括如下步骤：S1，提取、分离获取人外周血单个核细胞；S2，将S1中的人外周血单个核细胞置于培养基中，加入抗原多肽和白细胞介素‑2；S3，分选，获取CD8+、IFN‑γ双阳性的单细胞；S4，将S3的双阳性单细胞进行反转录；S5，以S4的反转录产物作为模板，进行PCR扩增，获得T细胞受体的扩增产物。本发明T细胞受体的扩增方法通过在引物序列两端设计不同的限制性内切酶位点，便于进行酶切过程，起到纯化T细胞受体的作用。
扩增人外周血单个核细胞双阳性限制性内切酶位点白细胞介素反转录产物抗原多肽扩增产物引物序列培养基反转录分选酶切

[发明专利]特异性抗病毒过继免疫细胞CE的制备方法-CN202110827796.8有效
发明人：黄晓军;董强刚;涂静溦;潘程娇 -专利权人：北京赛傲生物技术有限公司;上海赛傲生物技术有限公司
申请日： 2021-07-21 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供一种特异性抗病毒过继免疫细胞的制备方法，所述制备方法包括步骤：(1)收集外周血，离心分离获得外周血单个核细胞；(2)用巨细胞病毒和EB病毒抗原肽激活外周血单个核细胞中的CD3+T细胞；(3)采用G‑REX10瓶培养扩增步骤(2)激活的T细胞至需要的数量。本制备方法，采用G‑REX 10瓶进行细胞的培养扩增，避免了操作中的污染和传代，采血量小、制备时间短，可以通过2周和4周培养分别输注一次VST，所获得的免疫细胞为病毒抗原特异性T细胞，其纯度高、活力强，
特异性抗病毒过继免疫细胞 ce 制备方法

[发明专利]外周血单个核细胞的分离方法-CN201910836499.2在审
发明人：何美弟;江嘉豪;王进辉;于莉 -专利权人：广东唯泰生物科技有限公司
申请日： 2019-09-05 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供一种外周血单个核细胞的分离方法，涉及再生医学领域。本发明的分离方法包括以下步骤：预处理：将采集的外周血进行离心，分离上层血液和下层血细胞，将下层血细胞与羟乙基淀粉溶液混合，混合均匀后放置沉降，去除沉降后的上清液，保留下层沉淀；分离：向下层沉淀中加入红细胞裂解液，混合均匀，离心，取细胞沉淀，加入PBS重悬，将细胞悬液加入到淋巴细胞分离液中，离心，去除上清液，保留细胞沉淀，加入PBS、肝素和人血白蛋白，混合，离心，得到PBMC细胞沉淀；培养：用培养基重悬PBMC细胞沉淀，分装至培养瓶中进行培养。采用本发明的方法，分离的外周血单个核细胞的数量多、纯度高、活性高。
下层沉淀外周血单个核细胞血细胞细胞沉淀沉降上清液重悬去除淋巴细胞分离液羟乙基淀粉溶液预处理红细胞裂解液人血白蛋白细胞悬液再生医学培养基活性高培养瓶外周血保留分装肝素上层采集血液

[发明专利]从血液中分离、培养细胞的方法及进行克隆非人动物的方法-CN201310461790.9有效
发明人：杨珍珍;徐颖;林木飞;杜玉涛 -专利权人：深圳华大方舟生物技术有限公司;深圳华大基因科技有限公司
申请日： 2013-09-29 - 公布日： 2018-01-12 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供了一种从血液中分离、培养细胞的方法以及一种对非人动物进行克隆的方法。所述从血液中分离、培养细胞的方法包括以下步骤将所述血液加入到分离液上层后利用密度梯度离心的方式进行离心，以便获得单个核细胞；将所述单个核细胞接种于含有贴壁细胞培养基的体外培养设备，以便获得贴壁细胞；以及将所述贴壁细胞进行传代培养，以便获得体细胞核移植的供体细胞。该方法获得的体细胞核移植的供体细胞可以直接用于手工克隆非人动物，不仅操作过程简单、易于实现、成本较低，且该方法对动物应激刺激少、伤害小，可以保证动物的完整外观、改善动物福利。
血液分离培养细胞方法进行克隆非人动物