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[发明专利]一种流式分选单个有核细胞的方法-CN202210821370.6在审
发明人：请求不公布姓名 -专利权人：深圳市孔雀生物科技有限公司
申请日： 2022-07-12 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： G01N15/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种流式分选单个有核细胞的方法，包括：制备细胞悬浮液；加入DNA核酸荧光染料对细胞染色；在流式细胞仪上检测染色后的所述细胞悬浮液，分析所述DNA核酸荧光染料信号强度，选定单个有核细胞，排除非单个有核细胞，将所述DNA核酸荧光染料信号强度是所述单个有核细胞的DNA核酸荧光染料信号强度倍数的粘连细胞筛选排除；通过流式细胞仪精准分选出选定的所述单个有核细胞。通过上述方式，本发明所提供的流式分选单个有核细胞能够在流式细胞仪上排除粘连细胞造成的假象,精准识别单个有核细胞，更进一步地，分选得到真正单个有核细胞。
一种分选单个细胞方法

[发明专利]一种异体外周血单个核细胞体外分离试剂盒及使用方法-CN201510183426.X在审
发明人：王盛;齐湘杰;王丽 -专利权人：王盛
申请日： 2015-04-19 - 公布日： 2015-07-22 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种异体外周血单个核细胞高纯度、高回收率体外分离试剂盒及使用方法，采用本试剂盒分离的异体单个核细胞可用于免疫治疗不明原因习惯性流产。所述试剂盒包括试剂Ⅰ：外周血稀释液，试剂Ⅱ：红细胞沉淀液，试剂Ⅲ：单个核细胞分层液，试剂Ⅳ：单个核细胞洗涤液。采用所述试剂盒进行异体外周血单个核细胞分离的步骤包括：抗凝血预离心、红细胞初反应、红细胞沉淀、单个核细胞分层液两步分离、单个核细胞二次纯化、检菌、单个核细胞冻存。采用本发明技术可使单个核细胞回收率可达到90%以上，纯度可达到95%以上，存活率达到98%以上，大大提高了外周血单个核细胞使用效率；通过抗凝血预离心步骤，去除血浆，与常规分离技术相比，降低了分离试剂的使用剂量
一种异体外周血单个细胞体外分离试剂盒使用方法

[发明专利]一种外周血单个核细胞的提取收集方法-CN202011252394.1在审
发明人：王晓宇;林冠妃;郭康合;李崴;蔡开婷;张万程;李秋宛;王岱桑 -专利权人：海南优尼科尔生物科技有限公司
申请日： 2020-11-11 - 公布日： 2021-03-09 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种外周血单个核细胞的提取收集方法，包括以下步骤：1)外周血采集；2)外周血预处理；3)离心；4)提取血浆；5)血浆灭活；6)收集单个核细胞层；7)单个核细胞层离心；8)清洗；9)提取单个核细胞本发明属于细胞提取技术领域，具体是提供了一种利用Ficoll淋巴细胞分离液离心提取获得外周血单个核细胞，细胞得率高、活性高的外周血单个核细胞的分离方法。
一种外周血单个细胞提取收集方法

[发明专利]一种单个核细胞移植前状态的准备方法-CN201110154886.1无效
发明人：张宁坤;高连如;李田昌 -专利权人：张宁坤;中国人民解放军海军总医院
申请日： 2011-06-10 - 公布日： 2012-12-12 - 主分类号： C12N5/0786 文献下载
摘要：本发明公开了一种单个核细胞在移植前状态的准备方法，无菌收集废弃的健康人脐带血，分离出血浆，再使用生理盐水稀释细胞层，用密度梯度分离法进行分离单个核细胞，单个核细胞洗涤后，使用分离出的脐带血血浆进行稀释重悬，调整单个核细胞的浓度，密封于血浆袋中使单个核细胞处于应用前状态；此方法与即往的方法在处理程序和方法上有所不同，本方法减少了与单个核细胞接触的试剂种类、数量和时间，不需要培养、传代、冻存等步骤，避免了其他试剂接触对单个核细胞生存和生长的影响；本方法使用脐带血血浆最后稀释重悬分离洗涤后的脐带血单个核细胞，使脐带血单个核细胞在应用前处于采集前的生长环境和状态，并且使脐带血单个核细胞在体外的时间最短能减少到1.5小时，对保证细胞的活力、生存和生长具有巨大的促进作用，在应用前的各项检查中均符合单个核细胞应用的要求。
一种单个细胞移植状态准备方法

[发明专利]一种外周血单个核细胞的提取收集方法-CN202211303889.1在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2022-10-24 - 公布日： 2022-12-27 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种外周血单个核细胞的提取收集方法。采用的技术方案是：采用Ficoll离心法提取外周血单个核细胞，加入D‑Hanks溶液，提高分层效果，加入不同的抗凝剂，验证外周血单个核细胞的提取效果，加入微小核糖核酸，提高单个核细胞的增值能力，提高其生物活性本发明的有益效果：通过采用肝素和EDTA的及混合液作为抗凝剂，加入甘草制备的微小核糖核酸，能够进一步提高单个核细胞的增值能力，提高单个核细胞分离提取的活性。
一种外周血单个细胞提取收集方法

[发明专利]一种电转后PBMC的培养方法-CN201810129577.0在审
发明人：金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2019-08-16 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供一种电转后PBMC的培养方法，该方法包括电转人外周血单个核细胞后，先使用含人外周血单个核细胞培养液的上清液的复苏液培养该电转后的人外周血单个核细胞2‑10小时的步骤。本发明还包括使用所述复苏液复苏冻存的人外周血单个核细胞以及培养人外周血单个核细胞的方法。本发明也包括所述复苏液。本发明的复苏液能促进电转后外周血单个核细胞的生长，进而提高其活力；采用本发明的复苏液对冷冻人外周血单个核细胞进行复苏和电转后孵育，能够有效减少冷冻复苏细胞在电转后的死亡，促进细胞增殖。
人外周血单个核细胞电转复苏液复苏冷冻培养液外周血单个核细胞促进细胞增殖有效减少上清液冻存孵育细胞生长死亡

[发明专利]将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂及其所用组合物-CN201811502978.2在审
发明人：曹延粉;黄庆雷;赵伟;王培培;占天焱;沈丽;邓钺 -专利权人：北京弘润天源基因生物技术有限公司
申请日： 2018-12-10 - 公布日： 2019-04-23 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂及其所用组合物。将外周血单个核细胞诱导为CIK的组合物由抗CD3抗体、抗CD28抗体、IL‑2、IL‑15和IL‑12组成。将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂包括该组合物和冻存外周血单个核细胞复苏液。将人外周血单个核细胞诱导为CIK的组合物与对照组合物相比，从不同健康志愿者获得的CIK细胞中CD3+CD56+细胞的含量提高了72‑76％，CD3+CD8+细胞的含量提高了20‑21％。该冻存外周血单个核细胞复苏液与常规复苏液相比，可显著提高冻存人外周血单个核细胞的细胞活率，使从冻存人PBMC得到的CIK中的CD3+CD56+细胞含量提高47％。
外周血单个核细胞诱导冻存复苏液细胞人外周血单个核细胞对照组合物抗CD28抗体抗CD3抗体人PBMC 健康

[发明专利]鲨鱼单个核细胞的分离方法、鲨鱼稀释液及其用途-CN202210468678.7有效
发明人：毕允晨;邓鹏辉;闻建晴;王淏 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 2022-04-29 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N5/0786 文献下载
摘要：本发明属于细胞分离技术领域，具体涉及一种鲨鱼单个核细胞的分离方法、鲨鱼稀释液及其用途。一种鲨鱼稀释液，该鲨鱼稀释液包括PBS缓冲液及尿素，其密度为1.0028 g/mL‑1.0235 g/mL。本发明提供的鲨鱼单个核细胞的分离方法，主要包括以下步骤：获取鲨鱼外周血细胞或组织细胞；将血细胞或组织细胞用鲨鱼稀释液稀释制备成细胞悬液；用鲨鱼稀释液稀释制备鲨鱼单个核细胞分离液，用来分离鲨鱼血液及组织中的单个核细胞本发明提供的鲨鱼单个核细胞的分离方法，不仅能够有效地降低红细胞或粒细胞的污染，使获得的单个核细胞具有较高的纯度和活细胞比例，而且可以节约成本、效果稳定。
鲨鱼单个细胞分离方法稀释液及其用途

[发明专利]一种分离骨髓单个核细胞的方法-CN201510156170.3在审
发明人：银广悦;杨洪涛;丁俊丽;刘继勇;周志伟;孙岩;徐翠玲;武彩虹;汪方圆;张龙 -专利权人：银广悦
申请日： 2015-04-03 - 公布日： 2015-07-15 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分离骨髓单个核细胞的方法。所述方法利用明胶溶液可以破坏红细胞表面电荷而加速红细胞的沉积，对其他主成分包括单个核细胞无影响这一点以及骨髓中单个核细胞与其他成分存在密度差异，利用淋巴细胞分离液作密度梯度离心时各种细胞成分按密度梯度重新分布聚集，从而获得单个核细胞这一原理进行骨髓中单个核细胞的分离。利用本发明的方法分离骨髓单个核细胞不会增加MNCs的损失，且能更好地保留骨髓造血干细胞和骨髓间充质干细胞，操作简单方便，可进行临床推广。
一种分离骨髓单个细胞方法

[发明专利]一种大量树突状细胞的制备方法、所得树突状细胞-CN201410730272.7有效
发明人：徐献毅;史军;吕垚 -专利权人：北京益诺勤生物技术有限公司
申请日： 2014-12-04 - 公布日： 2018-01-09 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明属于细胞免疫技术领域，公开了一种大量树突状细胞的制备方法及所得树突状细胞。本发明提供的制备方法包括获得单个核细胞；取所得单个核细胞，贴壁培养，获得树突状细胞前体细胞；培养，诱导所得树突状细胞前体细胞，检测，收集树突状细胞。本发明提供的制备方法在获得单个核细胞之后，通过贴壁培养即获得树突状细胞前体细胞，再经过培养、诱导，即制备获得了树突状细胞，实现了将单个核细胞诱导分化为树突状细胞，操作简单，且单个核细胞来源充足，可用于树突状细胞的大量制备
一种大量树突细胞制备方法所得

[发明专利]含单个核细胞血浆分离用组合物和血液采集容器-CN202080007051.0在审
发明人：驹井邦哉;五十川浩信;安乐秀雄 -专利权人：积水医疗株式会社;德山积水工业株式会社
申请日： 2020-05-19 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： B01D17/02 文献下载
摘要：本发明提供：能够抑制保存中的含单个核细胞血浆分离用组合物的流动，在离心分离时能够良好地形成隔壁，并且能够得到单个核细胞以外的血细胞成分的混入量较少的含单个核细胞血浆的含单个核细胞血浆分离用组合物。本发明的含单个核细胞血浆分离用组合物包含：在25℃下具有流动性的有机成分和2种以上的无机微粉，所述组合物在25℃下的比重为1.060以上1.080以下。
单个细胞血浆分离组合血液采集容器

[发明专利]一种大鼠神经支架的构建方法-CN202011617426.3在审
发明人：孙广峰;李璐希;陶科融;游兴;张驰;刘野 -专利权人：遵义医科大学第二附属医院
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： A61L27/38 文献下载
摘要：本发明属于神经支架构建技术领域，公开了一种大鼠神经支架的构建方法，包括制备外周血单个核细胞PBMCs溶液，制备脱细胞异体神经，构建脱细胞异体神经复合外周血单个核细胞的神经支架。本发明中的外周血单个核细胞的提取方便快捷，创伤小，脱细胞异体神经复合外周血单个核细胞的大鼠神经支架的构建技术不复杂，利于技术推广应用；自体外周血单个核细胞用于自体神经缺损的修复，无免疫原性、致瘤性、不涉及伦理等问题；用于自体神经缺损的修复，可以避免自体神经移植术供区感觉运动功能障碍，减少了副损伤；为构建人脱细胞异体神经复合自体外周血单个核细胞神经支架用于重建修复周围神经缺损提供了强有力的理论依据。
一种大鼠神经支架构建方法

[发明专利]一种使用外周血检测抗原免疫原性的方法-CN202110049135.7在审
发明人：唐云霞;高志博;张义兴;苏小凡 -专利权人：深圳裕康医学检验实验室;深圳裕泰抗原科技有限公司
申请日： 2021-01-14 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：一种使用外周血检测抗原免疫原性的方法，包括：离心步骤，包括使用密度梯度离心管对外周血样本进行离心，分离得到外周血单个核细胞；多肽培养步骤，包括取部分外周血单个核细胞，培养过程中，分多次加入待测抗原多肽、培养基、细胞因子，培养得到被多肽刺激的外周血单个核细胞；树突状细胞培养步骤，包括取部分外周血单个核细胞，诱导培养，得到树突状细胞；检测步骤，将被多肽刺激的外周血单个核细胞与树突状细胞混合孵育，检测抗原多肽是否具有免疫原性通过短时间离心后，进行多肽刺激培养外周血单个核细胞，可快速检测待测抗原的免疫原性，显著简化操作步骤，缩短检测时间，并且只需少量外周血，显著降低样本的获取难度。
一种使用外周血检测抗原免疫原性方法

[发明专利]基于神经网络的CB微核显微图像的识别及分析方法与系统-CN202111090307.1在审
发明人：申相;周正干;马腾飞;李朝文;杨富城;温占波 -专利权人：北京慧荣和科技有限公司
申请日： 2021-09-17 - 公布日： 2021-10-22 - 主分类号： G06K9/00 文献下载
摘要：本发明是一种基于卷积神经网络的CB法微核显微图像的识别及分析方法与系统。自动识别方法包括：获取CB法微核显微图像；从CB法微核显微图像中提取出细胞图像；将提取出的细胞图像划分为第一单个独立细胞图像和粘连细胞团图像；将粘连细胞团图像分离成多个第二单个独立细胞图像；将所有第一单个独立细胞图像以及所有第二单个独立细胞图像输入至卷积神经网络模型中，以识别含有微核的双核细胞图像。通过卷积神经网络模型识别含有微核的双核细胞图像，提升了含有微核的双核细胞图像的识别速度以及识别率。
基于神经网络 cb 显微图像识别分析方法系统

[发明专利]冻存人外周血单个核细胞的复苏液及方法-CN201810129440.5有效
发明人：金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及冻存人外周血单个核细胞的复苏液及方法，所述复苏液含有人外周血单个核细胞培养液的上清液和任选的人外周血单个核细胞的培养基。本发明的复苏方法包括在冻存的人外周血单个核细胞解冻后立即用所述复苏液制备细胞悬液并进行培养的步骤。相比采用现有方法复苏后的细胞，其活力显著提高，细胞死亡数量明显减少。
冻存人外周血单个细胞复苏方法

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