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[发明专利]一种大肠杆菌-酵母-农杆菌三元穿梭载体及其在植物病毒侵染性克隆中的应用-CN202211258827.3在审
发明人：张坤;郭枭;陈佳欢;贺振;顾天潇 -专利权人：扬州大学
申请日： 2022-10-14 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大肠杆菌‑酵母‑农杆菌穿梭载体及其在植物病毒侵染性克隆中的应用。所述大肠杆菌‑酵母‑农杆菌穿梭载体是基于大肠杆菌‑农杆菌的双元穿梭载体的改造，即增加酵母DNA，复制起始识别序列和酵母色氨酸合成酶筛选标记基因片段，将携带酵母复制元件2μ序列及筛选标记基因序列的目的基因片段插入到大肠杆菌‑农杆菌双元质粒骨架中，构建了两个大肠杆菌‑酵母菌‑农杆菌三元穿梭质粒，该质粒可以在酵母细胞、大肠杆菌细胞和农杆菌细胞中稳定遗传和增殖。
一种大肠杆菌酵母杆菌三元穿梭载体及其植物病毒侵染克隆中的应用

[发明专利]一种大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体及其应用-CN201310418433.4有效
发明人：卢建平;曹惠娟;张莉林;林福呈 -专利权人：浙江大学
申请日： 2013-09-13 - 公布日： 2014-01-08 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体及其应用。所述大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体为含有酵母DNA复制子和酵母筛选标记基因的双元载体。所述应用为大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体在向真菌或植物细胞转化DNA中的应用。本发明的大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体是世界上首次报道的、可以同时在酵母、大肠杆菌和农杆菌内复制、增殖并稳定存在的质粒，该穿梭表达载体可以直接通过农杆菌介导的方式转化真菌或植物细胞，缩短了基因操作的流程和时间
一种大肠杆菌酵母杆菌穿梭表达载体及其应用

[发明专利]一种真空渗透辅助农杆菌介导甘蔗遗传转化的方法-CN201310088894.X无效
发明人：樊丽娜;齐永文;李奇伟;邓海华;劳方业;李昱;罗青文;周文灵;何慧怡;陈月桂 -专利权人：广州甘蔗糖业研究所
申请日： 2013-03-20 - 公布日： 2013-07-17 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明涉及植物基因工程技术领域，提出一种真空渗透辅助农杆菌介导甘蔗遗传转化的方法，其包括步骤：（1）甘蔗心叶胚性愈伤组织的诱导及增殖；（2）含有目标基因的根癌农杆菌的活化与培养；（3）真空渗透辅助农杆菌侵染甘蔗胚性愈伤组织本发明采用的真空渗透辅助农杆菌介导甘蔗遗传转化方法，在真空的情况下可促使农杆菌通过愈伤组织细胞间的空隙进入到深层的细胞，而且会在细胞的表面引起小伤口，致使植物分泌一些酚类物质以激活Ti质粒中T-DNA的剪切和转移，本发明完善了农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系。与普通农杆菌介导法相比，本发明显著提高了甘蔗的遗传转化率。
一种真空渗透辅助杆菌甘蔗遗传转化方法

[发明专利]农杆菌介导转化海岛棉的方法-CN200710076646.8无效
发明人：陈全家;曲延英;贺雅婷;孔庆平 -专利权人：陈全家;曲延英
申请日： 2007-08-29 - 公布日： 2009-03-04 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供了农杆菌介导转化海岛棉的方法，包括以下步骤：1)受体培养；2)农杆菌的培养；3)受体与带有植物表达载体的农杆菌共培养；4)诱导抗性愈伤组织；5)分化抗性体细胞胚胎；6)体细胞胚胎分化抗性植株。本发明获得农杆菌介导转化海岛棉再生植株，以下胚轴直接做为转化受体，诱导出抗性愈伤组织以及抗性体细胞胚胎，并且体细胞成胚率达到30％、体细胞成苗率20％。提高了海岛棉的遗传转化效率提高了使现代生物技术可以大规模的用于海岛棉育种上，解决了农杆菌介导法在海岛棉上应用的关键问题，为海岛棉遗传改良提供技术理论。
杆菌转化海岛棉方法

[发明专利]用于农杆菌介导的甘蔗转化的方法-CN201180031129.3无效
发明人： R.J.C.盖杰斯克斯;P.C.德鲁卡 -专利权人：先正达参股股份有限公司;昆士兰科技大学
申请日： 2011-06-22 - 公布日： 2013-03-06 - 主分类号： A01H1/00 文献下载
摘要：本发明提供了用于甘蔗（甘蔗属）的农杆菌介导的转化方法，该方法包括经由农杆菌介导的递送，将一种感兴趣的核苷酸序列引入甘蔗愈伤组织或其细胞中，其中该甘蔗愈伤组织低于起始后28天。本发明进一步提供了用于转化甘蔗愈伤组织或其细胞的方法，该方法包括用包括用一种包含感兴趣的核苷酸序列的农杆菌接种该低于起始后28天的甘蔗愈伤组织，以产生一种经农杆菌接种的甘蔗组织或其细胞；并且共培养该农杆菌和该甘蔗愈伤组织，以产生一种经转化的甘蔗愈伤组织或其细胞。
用于杆菌甘蔗转化方法

[发明专利]提高根农杆菌介导的植物转化频率的方法及其专用载体-CN200510115089.7无效
发明人：陈蕾;徐建勇 -专利权人：北京北方杰士生物科技有限责任公司
申请日： 2005-11-28 - 公布日： 2006-06-28 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高根农杆菌介导的植物转化频率的方法及其专用载体。该专用载体是在原核细胞表达载体的多克隆位点插入根农杆菌的virA基因、virG基因和virE基因，得到的可在根农杆菌中过量表达virA、virG和virE的重组表达载体。本发明巧妙地将virA、virG和virE基因插入原核细胞表达载体，构建过量表达virA、virG和virE基因的重组表达载体，再将该重组表达载体转化根农杆菌，得到过量表达virA、virG和virE基因的重组根农杆菌菌株，该重组根农杆菌菌株浸染植物的能力增强，与出发根农杆菌菌株相比，可提高转基因植物的转化效率及转化频率。
提高杆菌植物转化频率方法及其专用载体

[发明专利]用于转化植物的营养缺陷型农杆菌和其方法-CN200980152408.8无效
发明人：杰罗姆·P·伦驰;马提亚·列伯格赛尔;卡尔·W·加纳特;加里·A·胡夫曼 -专利权人：先锋国际良种公司
申请日： 2009-12-30 - 公布日： 2011-12-14 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：提供了营养缺陷型农杆菌和使用营养缺陷型农杆菌的方法。营养缺陷型农杆菌可以用于多种方法中，包括以生物学方式防范包含转基因的农杆菌并在不使用农杆菌反选择剂的情况下转化植物细胞。利用胸苷营养缺陷型农杆菌转化玉米未成熟胚，导致与利用原养型农杆菌所获得的转化相当的转化效率。公开了产生农杆菌胸苷营养缺陷体和在转化方法中利用营养缺陷体的方法。
用于转化植物营养缺陷杆菌方法

[发明专利]一种农杆菌介导的在葡萄叶片中实现外源基因瞬时表达的方法-CN202110398251.X在审
发明人：吴月燕;陈天池 -专利权人：浙江万里学院
申请日： 2021-04-14 - 公布日： 2021-08-20 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种农杆菌介导的在葡萄叶片中实现外源基因瞬时表达的方法，包括以下步骤：农杆菌菌液的初培养、农杆菌菌液的二次培养、菌体收集、植物浸提液的制备、侵染液的制备、样品处理、农杆菌的侵染。本发明方法通过特殊的农杆菌菌液、植物浸提液、侵染液制备，同时对葡萄叶片进行穿刺和真空侵染处理，在葡萄叶片上制造大量受伤部位，受伤处的细胞会分泌大量酚类物质，从而促使农杆菌向受伤细胞移动，大幅度提高目标基因的转化效率，为葡萄瞬时表达体系的研究及葡萄分子育种奠定了基础，与现有的农杆菌侵染方法相比，具有侵染效率和转化效率高等优点，同时适用面更加广泛，适用于包括葡萄叶片在内的大多数植物叶片。
一种杆菌葡萄叶片实现基因瞬时表达方法

[发明专利]转化寇氏隐甲藻的方法-CN201310302810.8有效
发明人：戴小军;许骏;蔡南海;姜翠红 -专利权人：丰益(上海)生物技术研发中心有限公司
申请日： 2013-07-15 - 公布日： 2020-02-07 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及转化寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)的方法，该方法包括以下步骤：预培养寇氏隐甲藻；预培养农杆菌；在渗透压调节剂的存在下悬浮寇氏隐甲藻及农杆菌，然后将完整的寇氏隐甲藻细胞与农杆菌共培养；和获得农杆菌转化的寇氏隐甲藻。
转化寇氏隐甲藻方法

[发明专利]利用瞬时农杆菌渗入法在植物主体中制备纤维素酶-CN200980132556.3无效
发明人： K·A·麦克唐纳;B·E·林登穆思;A·M·丹德卡尔;B·W·福尔克 -专利权人：加州大学评议会
申请日： 2009-08-19 - 公布日： 2011-07-13 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本文描述了用于通过农杆菌渗入法制备蛋白质(如酶)的方法。所述方法包括：制备具有编码纤维素酶的Ti质粒的农杆菌；用农杆菌传染植物细胞；允许纤维素酶表达，并且从所述植物细胞中回收所述纤维素酶。
利用瞬时杆菌渗入植物主体制备纤维素酶

[发明专利]一种农杆菌介导的植物转基因技术-CN01128988.0无效
发明人：郭骁才 -专利权人：中国科学院成都生物研究所
申请日： 2001-10-24 - 公布日： 2002-04-03 - 主分类号： C12N15/87 文献下载
摘要：本发明公开了一种农杆菌介导植物细胞转基因技术。针对目前所采用的禾谷类植物转基因技术中作为农杆菌受体的感受态植物细胞少而导致的转基因频率比低,通过机械或其它方法离散植物细胞,使得感受态细胞的表面暴露,达到提高农杆菌介导转基因频率的目的,并且操作简单。
一种杆菌植物转基因技术

[发明专利]一种农杆菌介导的烟草转基因方法-CN201410505256.8无效
发明人：胡德龙;史红林;刘艳;王全智;解振强;贾思振 -专利权人：江苏农林职业技术学院
申请日： 2014-09-28 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种农杆菌介导的转基因方法，包括：农杆菌的活化、农杆菌感受态制备、感受态细胞的转化、烟草叶盘的制备和农杆菌对烟草的遗传转化步骤。本发明的农杆菌介导烟草转基因方法，发现LBA4404对烟草的转化效率比EHA105高；本方法不仅整体的操作过程较为简单，实施条件比较容易控制，转化效率更高，具备很好的实用性。
一种杆菌烟草转基因方法

[发明专利]一种大豆组织培养和遗传转化方法-CN201310291640.8有效
发明人：程琳静;闫军辉;卢欣欣;王彪;武天龙 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2013-07-11 - 公布日： 2013-10-09 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开一种大豆组织培养和遗传转化方法，通过大豆幼胚边缘部位作为外植体诱导产生体细胞胚，并以此进行农杆菌介导，从而获得转基因植株的方法，涉及植物组织培养和遗传转化方法领域。主要步骤包括：大豆幼胚边缘部位的获得、大豆体细胞胚的获得、大豆根癌农杆菌的侵染、大豆体细胞胚的分化及筛选、大豆幼苗的生根及炼苗移栽。该遗传再生体系，方法简单，易操作，嵌合体少。其间所涉及的体细胞胚筛选分化过程中，甲壳素多糖的加入，很大程度地抑制了农杆菌的生长，并有效地修复了破损细胞，增加了农杆菌的遗传转化效率，是一种高效的遗传转化再生体系。
一种大豆组织培养遗传转化方法

[发明专利]一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法-CN201910177732.0在审
发明人：王鹏蔚;宫金礼;田真;程运江 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-03-10 - 公布日： 2019-05-07 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种农杆菌介导的柑橘果实瞬时转化的方法，包括以下步骤：S1.将含有目的基因的表达载体转化农杆菌，并制备农杆菌菌液；S2.农杆菌侵染：将制备的农杆菌菌液注入柑橘果实中；S3.将注入农杆菌菌液的柑橘果实放置一段时间后检测目的基因的表达。操作简单易控，周期短，转化效率高，表达强度好，成本低，可以用于进行蛋白的亚细胞定位。
柑橘果实农杆菌介导农杆菌菌液目的基因转化基因工程领域农杆菌侵染亚细胞定位制备农杆菌表达载体转化效率农杆菌菌液制备蛋白检测

[发明专利]一种利用微小RNA高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法-CN200910000837.5无效
发明人：邱德有;刘敏;李凤岚 -专利权人：中国林业科学研究院林业研究所
申请日： 2009-01-19 - 公布日： 2010-07-21 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用微小RNA(microRNA，miRNA)高效抑制曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象的方法，属于基因工程的技术领域，是借助根癌农杆菌介导的双元载体转化系统把水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体导入到曼地亚红豆杉(Taxus xmedia)细胞中。利用优化的转化方法获得了转基因细胞。结果显示：转空载体的对照细胞褐化严重、细胞停止生长，而转水稻miRNA169d基因前体(precusor)反义表达载体的曼地亚红豆杉细胞则不发生褐化，细胞生长正常。本发明高效地阻止了曼地亚红豆杉细胞根癌农杆菌转化后的褐化现象，解决了曼地亚红豆杉细胞在根癌农杆菌转化后停止生长的难题，为顺利获得曼地亚红豆杉转基因细胞系提供一种新方法。
一种利用微小 rna 高效抑制红豆杉细胞根癌农杆菌转化后褐化现象方法

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