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[发明专利]一种人脂肪干细胞原代培养及无血清多向诱导分化方法-CN201811621469.1有效
发明人：鲁红云;李昀;罗国晶;刘红;詹艳利 -专利权人：中山大学附属第五医院
申请日： 2018-12-28 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明属于生物组织工程技术领域，公开了一种人脂肪干细胞原代培养及无血清多向诱导分化方法，采用胶原酶分离法获得皮下和网膜组织来源的人脂肪间充质干细胞，原代培养至80％融合，再进行传代培养，并进行脂肪间充质干细胞的鉴定选用生长良好的第三代细胞，加入无血清诱导培养基进行成脂、成骨诱导分化，最后进行油红O染色及茜素红染色鉴定分化效果及Real‑time RCR检测成脂、成骨基因表达情况。人脂肪组织易于获得，经原代培养所得的脂肪间充质干细胞足够存活量和存活期，且可诱导分化为成熟的成脂细胞和成骨细胞，为糖尿病、肥胖、骨质疏松症等代谢性疾病细胞治疗提供理想的种子细胞，为组织工程生物化骨、生物化脂肪提供新途径
一种脂肪干细胞培养血清多向诱导分化方法

[发明专利]一种人源脐带间充质干细胞的培养及冻存方法-CN201910612981.8在审
发明人：李哲浩 -专利权人：赛瑞诺（北京）生物科技有限公司
申请日： 2019-07-09 - 公布日： 2019-09-27 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及一种人源脐带间充质干细胞的培养和冻存方法，所述培养方法包括先从脐带组织中分离培养原代种子细胞，然后将原代种子细胞进行扩大培养的步骤，本发明通过在原代种子细胞培养阶段，创造性的采用第二次原代贴壁培养的方法，大幅缩短了原代种子细胞分离培养时间，提高了原代种子细胞数量，提高了原代种子细胞纯度，为临床研究和应用提供了充足的标准化种子细胞和培养方法。本发明制备得到的人源脐带间充质干细胞，在体、内外均可以向成骨、成软骨、成脂分化。本发明所述冻存方法通过采用无血清冻存液冻存体系，保证了所冻存细胞无动物源成分，且不使细胞受损，复苏后细胞活性好。
种子细胞冻存脐带间充质干细胞人源分离培养种子细胞培养细胞扩大培养临床研究脐带组织贴壁培养细胞活性应用提供动物源冻存液无血清软骨成骨制备标准化分化复苏受损保证

[发明专利]一种基于成骨龛微环境修饰的PDX模型的构建方法及应用-CN202110720889.0有效
发明人：曾东风;贾乙;付文莹 -专利权人：中国人民解放军陆军特色医学中心
申请日： 2021-06-28 - 公布日： 2022-09-02 - 主分类号： A01K67/027 文献下载
摘要：本发明属于技术领域，具体为一种基于“成骨龛”微环境修饰的PDX模型的构建方法及应用。所述构建方法为，将人脐带间充质细胞置于生物衍生骨上诱导分化为成骨细胞，获得负载成骨细胞的生物衍生骨，并将其种植于小鼠皮下，再将原代白血病细胞或肿瘤细胞接种在小鼠皮下生物衍生骨的种植部位。本发明构建了一种新型的微环境修饰的PDX模型，为研究白血病或肿瘤细胞耐药形成机制和药物筛选提供一种移植成功率高、稳定传代、且能有效保留原代细胞生物学特性的疾病研究模型。
一种基于成骨龛微环境修饰 pdx 模型构建方法应用

[发明专利]一种人原代骨巨细胞瘤细胞株GCTB28-luc及其构建方法和应用-CN201811600363.3在审
发明人：周振华;肖建如;李焱;张薇薇;龚德军;匡牧宇;曹佳实;贾奇;胡硕;王旭东;陈素 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学第二附属医院
申请日： 2018-12-26 - 公布日： 2019-05-14 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：一种人原代骨巨细胞瘤细胞株GCTB28‑luc及其构建方法和应用，所述人原代骨巨细胞瘤细胞株GCTB28保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏号为CCTCC NO：C2018178本发明构建的细胞株GCTB28‑luc具有人原代骨巨细胞瘤肿瘤细胞的特性，符合建系标准，可在培养基中进行体外培养，且体外培养生长稳定、能连续传代，进而方便可用于建立骨巨细胞瘤发生机理模型，可作为骨巨细胞瘤发病机制及个体化治疗体外研究的细胞材料，可应用于制备、筛选、评价抗骨巨细胞瘤药物。
巨细胞瘤细胞株代骨骨巨细胞瘤保藏构建体外培养应用中国典型培养物个体化治疗发病机制机理模型连续传代体外研究细胞材料肿瘤细胞培养基可用制备筛选生长

[发明专利]能促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化的银纳米粒子的方法-CN201910393256.6有效
发明人：刘奕;许云鹤;郑博文;何佳;闫昱文;冉君一;杨洁;蓝义亮 -专利权人：中国医科大学附属口腔医院
申请日： 2019-05-13 - 公布日： 2022-09-16 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：能促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化的银纳米粒子的方法，其特征在于：具体为：常规分离培养原代人牙周膜成纤维细胞，通过免疫细胞化学染色细胞角蛋白和波形丝蛋白进行细胞鉴定；在口腔正畸治疗过程中，施加适当的机械力作用于牙齿，首先引起牙周膜组织的改建，进而发生牙槽骨改建，最终使牙齿发生位移而达到矫治的目的。AgNPs可以促进哺乳动物骨髓间充质干细胞的成骨分化。另外，AgNPs促进成纤维细胞分化为肌纤维母细胞，从而促进伤口收缩愈合。本发明的优点：采用体外细胞实验来研究AgNPs对hPDLFs成骨分化的影响以及具体的分子机制，提高牙槽骨改建的效率，进而加速正畸牙齿移动，缩短矫治疗程。
促进人牙周膜成纤维细胞分化纳米粒子方法

[发明专利]一种高成骨分化能力人间充质干细胞及其制备方法-CN201910369790.3在审
发明人：王斌 -专利权人：南京鼓楼医院
申请日： 2019-05-06 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种高成骨分化能力人间充质干细胞及其制备方法，其制备方法包括如下步骤：1）组织块法分离、培养原代人间充质干细胞；2）原代人间充质干细胞的传代培养；3）传代人间充质干细胞的质量控制与安全性评价体系检测；4）高成骨分化能力人间充质干细胞的诱导培养：添加有小分子药物SB431542的成骨诱导培养基中诱导培养高成骨分化能力人间充质干细胞。本发明通过小分子药物SB431542对人间充质干细胞进行成骨诱导分化，使其具有定向成骨分化能力，操作简单、生产成本低，制得的人间充质干细胞具有较高成骨分化能力，可起到细胞替代的作用，克服细胞移植来源少的问题，小分子药物SB431542安全可靠，可应用于颌骨组织缺损的骨修复，具有重要的医学价值。
人间充质干细胞成骨分化小分子药物制备成骨诱导诱导培养传代安全性评价生产成本低传代培养细胞替代细胞移植组织块法颌骨组织骨修复培养基质量控制缺损分化检测医学应用

[发明专利]一种仿真型瓣膜间质细胞钙化模型的建立方法-CN202110115428.0有效
发明人：李君丽;陈茂;廖延标;黄方洋;瞿天一;邵若宸 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2021-01-28 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种仿真型瓣膜间质细胞钙化模型的建立方法，属于生物医学技术领域，包括以下步骤：S1分离原代钙化的VICs；S2配制条件诱导培养基；S3分离培养正常VICs；S4钙化诱导。本发明通过收集的钙化病人VICs原代细胞源性条件培养基，对人或大鼠原代VICs进行诱导，使其由VICs细胞转换为成骨样细胞。
一种仿真瓣膜间质细胞钙化模型建立方法

[发明专利]人肾血管平滑肌脂肪瘤PCDX小鼠模型及其建立方法-CN202110837826.3有效
发明人：刘红亚;刘霞;王前进;李俊俊;李继新 -专利权人：武汉赛尔朗灵科技有限公司
申请日： 2021-07-23 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开的人肾血管平滑肌脂肪瘤PCDX小鼠模型及其建立方法，属于医学基础研究领域，是在小鼠前肢肩背部皮下接种人肾血管平滑肌脂肪瘤原代细胞后培养得到；人肾血管平滑肌脂肪瘤原代细胞已提前保藏于中国典型培养物保藏中心上述小鼠模型的建立方法为取人肾血管平滑肌脂肪瘤原代细胞，培养增殖，消化得到足量原代细胞悬液；再制备成原代细胞混合液；取原代细胞混合液接种于小鼠前肢背部皮下，在SPF环境下饲养，得到人血管平滑肌脂肪瘤PCDX本发明首次建立得到了人肾血管平滑肌脂肪瘤PCDX小鼠模型，为其基础临床研究奠定了模型基础。上述小鼠模型建立方法，成瘤速度快，成瘤率高，致小鼠死亡率低；可一次大批制作且可重复建模。
血管平滑肌脂肪瘤 pcdx 小鼠模型及其建立方法

[发明专利]一种促进人源脐带间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导方法-CN201910177645.5在审
发明人：赵进军;谷广其;杨桂花;赵宇飞;李张鹏 -专利权人：和携科技（北京）有限公司
申请日： 2019-03-09 - 公布日： 2019-05-21 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及一种促进人源脐带间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导方法，包括如下步骤：包括脐带组织块的获取步骤、干细胞的原代培养步骤、干细胞的传代培养步骤和干细胞向软骨细胞分化的诱导步骤；所述干细胞向软骨细胞分化的诱导步骤包括采用无血清培养基重悬传代培养至P_e代人源脐带间充质干细胞制成P_e代人源脐带间充质干细胞悬液，P_e代人源脐带间充质干细胞悬液接种于含成骨分化诱导剂的无血清培养基中继续培养，每隔3天半量更换含成骨分化诱导剂的无血清培养基，诱导14天后，即得到成骨细胞；其中，e=6、7、8、9、10。本发明能将人源脐带间充质干细胞分化为成骨细胞，在修复人体成骨组织、治疗骨损伤方面具有重要意义。
脐带间充质干细胞人源干细胞诱导无血清培养基成骨细胞分化成骨分化成骨细胞传代培养软骨细胞诱导剂分化悬液脐带组织块成骨组织原代培养重要意义骨损伤重悬接种修复治疗

[发明专利]一种用于腔隙注射治疗缺血性股骨头坏死的人源脐带间充质干细胞注射液的制备方法-CN201910178248.X在审
发明人：赵进军;谷广其;杨桂花;赵宇飞;李张鹏 -专利权人：和携科技（北京）有限公司
申请日： 2019-03-09 - 公布日： 2019-06-14 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于腔隙注射治疗缺血性股骨头坏死的人源脐带间充质干细胞注射液的制备方法，包括脐带组织块的获取步骤、干细胞的原代培养步骤、干细胞的传代培养步骤和人源脐带间充质干细胞注射液的制备步骤；所述人源脐带间充质干细胞注射液的制备步骤包括采用复方电解质注射液重悬P_e代人源脐带间充质干细胞，反复吹洗，待P_e代人源脐带间充质干细胞悬液均匀后，补充复方电解质注射液，调节人源脐带间充质干细胞浓度为4×10⁴‑6×10⁴个/mL，加入成骨分化诱导剂，得到人源脐带间充质干细胞注射液；其中e=6、7、8、9、10。本发明能将人源脐带间充质干细胞分化为成骨细胞，在修复人体成骨组织、治疗骨损伤方面具有重要意义。
脐带间充质干细胞人源注射液制备缺血性股骨头坏死复方电解质干细胞腔隙治疗注射脐带组织块成骨分化成骨细胞成骨组织传代培养原代培养重要意义骨损伤诱导剂吹洗悬液重悬分化修复补充

[发明专利]促进根尖周炎骨愈合的干细胞培养方法及干细胞应用-CN201510854427.2在审
发明人：陈莉莉;伍妍;黄芳;周鑫;余少玲 -专利权人：华中科技大学同济医学院附属协和医院
申请日： 2015-11-27 - 公布日： 2016-02-17 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了促进根尖周炎骨愈合的干细胞培养方法及干细胞应用，包括采集健康的牙齿、牙髓分离、牙髓干细胞DPSC培养、传代培养、缺氧处理，缺氧处理后进行RealTime-PCR和Western Blot法检测缺氧DPSC细胞的成血管及成骨的相关基因和蛋白表达情况。本发明通过对原代培养DPSC进行缺氧预处理，有效提高其成骨及成血管基因的表达效应，能够显著提高成体干细胞移植修复根尖周炎骨缺损的疗效。
促进根尖周炎骨愈合干细胞培养方法应用

[发明专利]一种人原代成骨细胞分离培养方法及试剂盒-CN202310003730.6在审
发明人：郭燕;陈菲;张琰;杨铁林 -专利权人：西安交通大学
申请日： 2023-01-03 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及人原代成骨细胞分离和培养技术领域，尤其涉及一种人原代成骨细胞分离培养方法及试剂盒，其试剂盒包括洗涤液A、洗涤液B、组织消化液A、组织消化液B和成骨细胞培养液，洗涤液A包括PBS、青霉素、链霉素以及庆大霉素本发明将外植体培养法和胶原酶消化法相结合，将消化下来的人成骨细胞和人松质骨碎片共同培养，加快了成骨细胞从松质骨中爬出的速度，提高了人原代成骨细胞的分离和培养效率。
一种人原代成骨细胞分离培养方法试剂盒

[发明专利]一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法-CN201310006583.4有效
发明人：肖建如;徐乐勤;吴志鹏;杨兴海;周振华;黄权;林在俊;万维;矫健;蔡小攀;陈素;许炜;祝倾;刘铁龙;严望军;杨诚;钱明;李珍惜;周旺 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2013-01-08 - 公布日： 2014-07-09 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明涉及一种动物模型及其构建方法，骨巨细胞瘤（GCT）在我国的发病率较高，目前尚未成功构建人骨巨细胞瘤动物模型。本发明提供了一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法，是将从人骨巨细胞瘤组织分离培养的原代细胞注射到裸小鼠的胫骨内，得到的人骨巨细胞瘤小鼠动物模型。本发明所建立的人骨巨细胞瘤骨损伤小鼠动物模型中的溶骨性损害特征与临床上骨巨细胞瘤的病理特征相似，存活的细胞为来源于人的骨巨细胞瘤基质细胞。应用本发明的动物模型可以用于系统研究骨巨细胞瘤的发病机制和进一步筛选治疗骨巨细胞瘤的药物。
一种巨细小鼠动物模型及其构建方法

[发明专利]一种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法-CN200510041961.8无效
发明人：胡蕴玉;滕勇;白建萍;吕荣;李丹 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2005-04-19 - 公布日： 2006-08-02 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明属于一种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法，原代人骨髓基质干细胞来源于正常流产胎儿骨髓组织，有限稀释法进行单细胞克隆培养纯化原代细胞，通过转染pCIneo－hTERT基因获得永生化。该人骨髓基质干细胞系体外培养能无限克隆增殖，但不具备转化细胞或癌细胞的特征，在细胞生物学特征上是正常细胞；细胞可以定向诱导分化为成骨、软骨以及心肌样细胞，具有多向分化潜能，仍具备成体干细胞的特性。这种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法，为研究人骨髓基质干细胞的生物学行为提供标准细胞系，为组织工程基础研究提供平台，为临床应用提供足量种子细胞，并为建立人骨髓基质干细胞系提供一种有效、可靠的方法。
一种永生骨髓基质细胞系及其建立方法

[发明专利]一种筛选优质成骨分化潜能间充质干细胞量化标准的构建方法及应用-CN202110300450.2有效
发明人：王斌;谢园园 -专利权人：南京鼓楼医院
申请日： 2021-03-22 - 公布日： 2023-06-16 - 主分类号： G01N21/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种筛选优质成骨分化潜能间充质干细胞量化标准的构建方法及应用，构建方法包括以下步骤：步骤一、从若干株男性人脐带中原代分离、扩增脐带间充质干细胞，传代培养至P5代；步骤二、分别加入成骨分化液诱导向成骨细胞分化诱导培养21天后，分别进行茜素红染色，采集图片；步骤四、将步骤三所获得的图片采用image J软件分析，得到图片中茜素红着色面积百分比，若干株脐带间充质干细胞的茜素红着色面积百分比取平均值，获得筛选优质成骨分化潜能间充质干细胞量化标准本发明为干细胞治疗骨组织再生和修复的基础研究和临床转化提供一种细胞选取标准，以期提高治疗效果。
一种筛选优质分化潜能间充质干细胞量化标准构建方法应用

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