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[发明专利]土壤中大丽轮枝菌微菌核的检测方法及培养基及制备方法-CN202110507441.0在审
发明人：张键;杨剑锋;赵君;贾硕;张文兵;冯伊彤;贾瑞芳;曼德拉;张之为;郑国华 -专利权人：内蒙古农业大学
申请日： 2021-05-10 - 公布日： 2021-08-03 - 主分类号： C12Q1/06 文献下载
摘要：本发明公开了土壤中大丽轮枝菌微菌核的检测方法及培养基及制备方法，其中，检测方法包括：(1)取土样并进行无菌处理；(2)配制大丽轮枝菌微菌核培养基；(3)利用采样器‑干筛法分离微菌核装置采集土样；(4)采集的土样进行大丽轮枝菌微菌核培养；(5)对培养后土样中大丽轮枝菌微菌核进行计数。大丽轮枝菌微菌核培养基包括PartⅠ培养基、PartⅡ培养基和PartⅢ培养基；配制PartⅠ培养基、PartⅡ培养基和PartⅢ培养基，然后将PartⅠ培养基和PartⅡ培养基灭菌后加入PartⅢ培养基中混合均匀制备得到大丽轮枝菌微菌核培养基；本发明检测方法可快速准确检测不同地块大丽轮枝菌微菌核的含量。
土壤中大丽轮枝菌微菌核检测方法培养基制备

[发明专利]用于大丽轮枝菌定量PCR检测的内参菌株及其应用-CN202010459753.4有效
发明人：张力群;陈伟;张俊威 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2020-05-27 - 公布日： 2022-02-18 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于大丽轮枝菌定量PCR检测的内参菌株及其应用。本发明提供了一株用于对土壤中大丽轮枝菌qPCR定量检测结果进行校正的内参菌株，该内参菌株选用黑白轮枝菌菌株YJ3.3为出发菌株，在其基因组上插入多拷贝串联的人工构建内参DNA片段。本发明采用荧光定量PCR方法对土壤中大丽轮枝菌及定量加入的内参菌株进行检测，以内参菌株的回收效率对靶标大丽轮枝菌的回收效率进行校正。通过对12份不同地区不同质地的土壤样品中大丽轮枝菌及内参菌株回收效率的测定发现使用内参菌株校正可以将大丽轮枝菌回收效率提高4.14‑14.10倍，更接近于理论回收效率，有效提高了大丽轮枝菌qPCR定量检测的准确性
用于大丽轮枝菌定量 pcr 检测内参菌株及其应用

[发明专利]分离土壤中大丽轮枝菌的方法-CN201711273106.9在审
发明人：魏锋;崔丽芳;朱荷琴;冯自力;冯鸿杰;师勇强;赵丽红;周京龙;袁媛 -专利权人：中国农业科学院棉花研究所
申请日： 2017-12-06 - 公布日： 2018-05-11 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明涉及微生物的分离，具体涉及分离土壤中大丽轮枝菌的方法。所述方法包括步骤：土壤样品预处理；制备选择性培养基；土壤样品水筛处理；土壤样品蔗糖密度梯度离心；涂布、培养；单孢纯化；培养上述菌落。本发明的分离土壤中大丽轮枝菌的方法步骤简单易操作，分离效率较高。
分离土壤中大丽轮枝菌方法

[发明专利]一种油短波单胞菌菌株及其应用-CN202011214301.6有效
发明人：曾红;高畅;华羚淇;刘桂敏 -专利权人：塔里木大学
申请日： 2020-11-04 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开一种油短波单胞菌(Brevundimonas olei)菌株及其应用，该菌株为一种大丽轮枝菌内共生菌，其保藏号为CCTCC NO：M 2020392。采用形态学鉴定、多样性测序分析确定该菌株为Brevundimonas olei，通过共培养实验探究B.olei发酵液对大丽轮枝菌生长及微菌核的影响。扫描电镜观察，随培养时间及发酵液浓度增加大丽轮枝菌分生孢子形成减少，菌丝形态发生膨胀、破裂、异型，微菌核逐渐减少消失，该研究证明共生B.olei对大丽轮枝菌有较好抑菌活性。
一种短波单胞菌菌株及其应用

[发明专利]大丽轮枝菌产微菌核相关基因VdGAP的功能分析及其应用-CN201611174505.5在审
发明人：张昕;林玲;邓晟 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2016-12-15 - 公布日： 2017-08-15 - 主分类号： C07K14/37 文献下载
摘要：本发明涉及植物病理学领域，从大丽轮枝菌V08DF1菌株中克隆了一个在微菌核发育中起重要作用的VdGAP基因，提供了该基因的核苷酸序列及其编码蛋白质的氨基酸序列。具体而言，本发明公开了一种大丽轮枝菌产微菌核相关基因VdGAP。该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO1或SEQ ID NO2所示，该基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO3所示。本发明的大丽轮枝菌的产微菌核相关基因VdGAP可以成为抑制大丽轮枝菌微菌核的产生的药物靶点。
大丽轮枝菌产微菌核相关基因 vdgap 功能分析及其应用

[发明专利]一种PCR快速检测大丽轮枝菌的方法及其试剂盒-CN201310321266.1有效
发明人：李园;曹坳程;郭美霞;王秋霞;欧阳灿彬;颜冬冬;毛连纲;马涛涛 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2013-07-29 - 公布日： 2013-10-02 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种PCR快速检测大丽轮枝菌的方法及其试剂盒。本发明根据大丽轮枝菌rDNA的ITS区设计一对特异性检测引物dali1/dali2，在大丽轮枝菌特异性检测中扩增出372bp的产物。取2μL DNA模板直接加入荧光定量PCR反应液中进行扩增；反应液中含有该对特异性引物及荧光染料，随着PCR反应的进行，实时检测反应体系的荧光强度，并根据分析软件计算Ct值，从而计算出样品中大丽轮枝菌的数量本发明的试剂盒操作简便、快速，特异性好，灵敏度高；本发明提供的试剂盒可对大丽轮枝菌进行快速定量检测，可以替代一直沿用的分离培养的传统诊断方法，并适于在植物病害诊断检测领域广泛推广应用。
一种 pcr 快速检测大丽轮枝菌方法及其试剂盒

[发明专利]乙烯形成酶基因VdEFE在大丽轮枝菌生长发育、致病力和乙烯合成中的应用-CN202111057003.5在审
发明人：黄家风;李彪;都业娟 -专利权人：石河子大学
申请日： 2021-09-09 - 公布日： 2022-01-07 - 主分类号： C12N15/52 文献下载
摘要：本发明提供了乙烯形成酶基因VdEFE在大丽轮枝菌生长发育、致病力和乙烯合成中的应用，属于功能基因技术领域。基因敲除体、互补体和过表达体，通过乙烯和琥珀酸含量的测定，明确VdEFE基因在乙烯合成过程中的作用，明确VdEFE基因与EFE乙烯合成途径的关系；通过生物学性状测定和致病性鉴定，明确VdEFE基因在大丽轮枝菌菌落生长速度、微菌核产量、分生孢子产量和致病力中的作用，推断乙烯在大丽轮枝菌与棉花互作过程中的作用，为大丽轮枝菌防治提供理论依据，为进一步分析大丽轮枝菌与寄主植物的相互作用机制奠定基础。
乙烯形成基因 vdefe 大丽轮枝菌生长发育致病合成中的应用

[发明专利]大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3的用途-CN201510297215.9有效
发明人：高峰;毛建才 -专利权人：石河子大学
申请日： 2015-06-02 - 公布日： 2018-01-02 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3的用途。将大丽轮枝菌野生型菌株V592菌株中的VdpdaA3基因敲除后获得的VdpdaA3基因敲除突变体产孢量明显低于大丽轮枝菌野生型菌株V592菌株，表明VdpdaA3基因参与了分生孢子的形成。本发明首次鉴定了与大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA3及其基因，为进一步阐明大丽轮枝菌的致病机理提供基础，将野生型大丽轮枝菌的VdpdaA3基因敲除得到的大丽轮枝菌突变体为大丽轮枝菌与宿主的互作机理研究提供了病原菌资源，本发明对棉花黄萎病的防治及培育抗大丽轮枝菌的棉花新品种具有重要的应用价值。
大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白 vdpdaa3 用途

[发明专利]大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA2的用途-CN201510297266.1有效
发明人：高峰;毛建才 -专利权人：石河子大学
申请日： 2015-06-02 - 公布日： 2017-12-08 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明公开了大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA2的用途。将大丽轮枝菌野生型菌株V592菌株中的VdpdaA2基因敲除后获得的VdpdaA2基因敲除突变体产孢量明显低于大丽轮枝菌野生型菌株V592菌株，表明VdpdaA2基因参与了分生孢子的形成。本发明首次鉴定了与大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白VdpdaA2及其基因，为进一步阐明大丽轮枝菌的致病机理提供基础，将野生型大丽轮枝菌的VdpdaA2基因敲除得到的大丽轮枝菌突变体为大丽轮枝菌与宿主的互作机理研究提供了病原菌资源，本发明对棉花黄萎病的防治及培育抗大丽轮枝菌的棉花新品种具有重要的应用价值。
大丽轮枝菌分生孢子产量相关蛋白 vdpdaa2 用途

[发明专利]大丽轮枝菌PEX30基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用-CN202111117687.3在审
发明人：苏晓峰;刘璐;吴思源;王琦;程红梅 -专利权人：中国农业科学院生物技术研究所
申请日： 2021-09-23 - 公布日： 2021-12-24 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明公开了大丽轮枝菌PEX30基因抗病原菌靶基因片段及其干扰载体和应用。本发明采用寄主诱导的基因沉默技术以大丽轮枝菌菌株为材料构建多个针对大丽轮枝菌PEX30基因的靶标基因的烟草脆裂病毒干扰质粒转化本氏烟草并进行大丽轮枝菌接种，确定了大丽轮枝菌PEX30基因与致病性之间的关联性；本发明进一步采用大丽轮枝菌PEX30基因的靶标区段构建Gateway干扰载体获得稳定遗传的转基因植物，获得干扰效果最佳的靶基因片段。本发明的大丽轮枝菌PEX30基因抗病原菌靶基因片段以及该靶基因片段所构建的Gateway干扰载体能应用于提高作物对大丽轮枝菌所导致病害的抗性以及培育抗大丽轮枝菌的转基因植物新品种等方面。
大丽轮枝菌 pex30 基因抗病原菌靶片段及其干扰载体应用

[发明专利]大丽轮枝菌VdKu80基因敲除突变体菌株，其构建方法及其应用-CN201610821907.3有效
发明人：田呈明;熊典广;王永林;邓成霖 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2016-09-13 - 公布日： 2019-10-18 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明提供了一株敲除VdKu80基因的大丽轮枝菌突变体菌株、其构建方法及其应用，并评估了该突变体菌株在大丽轮枝菌基因功能研究中的适用性。本发明构建VdKu80基因敲除载体片段，通过PEG介导的原生质体遗传转化，从转化子中筛选并鉴定得到单拷贝敲除VdKu80基因的大丽轮枝菌突变体菌株VdXS11‑△VdKu80。本发明的敲除VdKu80基因的大丽轮枝菌突变体菌株在生长速率、菌落形态、压力响应、分生孢子产量、微菌核形成和致病性表型与野生型菌株无显著差异。使用本发明的突变体菌株作为受体菌株进行基因敲除，其基因敲除率比野生型菌株提高了20％以上，因此能够作为受体菌株对大丽轮枝菌其他基因进行敲除实验。
大丽轮枝菌突变体菌株敲除基因敲除构建基因野生型菌株受体菌株原生质体遗传转化基因功能研究基因敲除载体致病性表型分生孢子菌落形态显著差异压力响应单拷贝微菌核转化子介导应用筛选生长评估

[发明专利]棉花内生真菌CEF-082抑制棉花黄萎病菌活性组分的分离方法-CN202011088303.5在审
发明人：朱荷琴;张芸;唐灿明;冯自力;叶永浩;冯鸿杰;魏锋;赵丽红;张亚林 -专利权人：中国农业科学院棉花研究所;南京农业大学
申请日： 2020-10-13 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C07D493/04 文献下载
摘要：CEF‑082代谢粗提物对棉花黄萎病菌具有抑菌活性。CEF‑082代谢粗提物中分离到的chaetoviridin A能显著抑制大丽轮枝菌微菌核的萌发，促进大丽轮枝菌细胞内H2O2丽轮枝菌对逆境的敏感性增强，还能增强棉花植株对黄萎病菌的防御反应。
棉花真菌 cef 082 抑制黄萎病活性组分分离方法

[发明专利]大丽轮枝菌致病性相关蛋白VdpdaA1的用途-CN201510297267.6有效
发明人：高峰;贾培松;毛建才 -专利权人：石河子大学
申请日： 2015-06-02 - 公布日： 2017-09-22 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了大丽轮枝菌致病性相关蛋白VdpdaA1的用途。将大丽轮枝菌野生型菌株V592菌株中的VdpdaA1基因敲除后获得的VdpdaA1基因敲除突变体产孢量及对棉花的致病性均明显低于V592菌株，表明VdpdaA1基因既参与了分生孢子的形成，又是V592菌株致病的一个关键基因本发明首次鉴定了与大丽轮枝菌致病性相关的蛋白VdpdaA1及其基因，为进一步阐明大丽轮枝菌的致病机理提供基础，将野生型大丽轮枝菌的VdpdaA1基因敲除得到的大丽轮枝菌突变体为大丽轮枝菌与宿主的互作机理研究提供了病原菌资源，本发明对棉花黄萎病的防治及培育抗大丽轮枝菌的棉花新品种具有重要的应用价值。
大丽轮枝菌致病性相关蛋白 vdpdaa1 用途

[发明专利]大丽轮枝菌磷脂酶靶基因片段及其干扰载体和应用-CN201510794698.3有效
发明人：程红梅;齐希梁;苏晓峰;郭惠明 -专利权人：中国农业科学院生物技术研究所
申请日： 2015-11-17 - 公布日： 2018-06-12 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明公开了大丽轮枝菌磷脂酶靶基因片段及其干扰载体和应用，属于大丽轮枝菌病程关键基因的克隆及应用领域。本发明通过病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)将大丽轮枝菌磷脂酶靶基因的基因序列导入本生烟中瞬时表达dsRNA，筛选到能极显著提高植物抗病性的靶基因。本发明进一步利用RNAi技术，构建稳定遗传干扰载体并转化本生烟，转化结果表明转基因烟草植株极显著提高烟草对大丽轮枝菌的抗病性，表现出高抗，甚至达到免疫等级。本发明提供大丽轮枝菌磷脂酶靶基因片段以及RNA干扰载体能够应用于提高植物对大丽轮枝菌的抗病能力以及培育抗大丽轮枝菌转基因植物新品种。
大丽轮枝菌靶基因磷脂酶干扰载体结果表明转基因基因沉默技术抗病性应用植物抗病性转基因植物病毒诱导关键基因基因序列抗病能力瞬时表达稳定遗传烟草植株轮枝菌高抗构建转化克隆烟草新品种筛选培育表现

[发明专利]大丽轮枝菌VdPRMT1基因在提高作物或蔬菜抗病性中的用途-CN202111096745.9有效
发明人：苏晓峰;吴思源;刘璐;王琦;程红梅 -专利权人：中国农业科学院生物技术研究所
申请日： 2021-09-18 - 公布日： 2021-12-21 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了大丽轮枝菌VdPRMT1基因在提高作物抗病性中的用途。本发明采用寄主诱导的基因沉默技术以大丽轮枝菌菌株为材料构建多个针对大丽轮枝菌VdPRMT1基因的烟草脆裂病毒干扰质粒，转化本氏烟草并进行大丽轮枝菌接种，初步确定大丽轮枝菌中VdPRMT1基因与致病性存在关联性。本发明进一步以大丽轮枝菌的VdPRMT1作为靶标基因，利用转基因和RNAi技术相结合，筛选获得能够显著提高植物抗病性的靶标基因片段。本发明所筛选的靶标基因片段以及应用该靶标基因片段所构建的Gateway干扰载体可应用于提高植物对大丽轮枝菌所导致疾病的抗性以及培育抗大丽轮枝菌的转基因植物新品种等方面。
大丽轮枝菌 vdprmt1 基因提高作物蔬菜抗病性中的用途

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