[发明专利]一种槲皮素-3,4`-O-二葡萄糖苷的合成方法及其所用到的酶

摘要

本发明公开了一种槲皮素‑3,4'‑O‑二葡萄糖苷的合成方法及其所用到的酶，以拟南芥（Arabidopsis thaliana）来源的UGT78D2和洋葱（Allium cepa）来源的UGT73G1突变体73G1_V371A为研究对象，利用蛋白质工程手段改造UGT78D2区域选择性以及73G1_V371A可溶性表达。同时引入蔗糖合酶（Sucrose synthase，SuSy），分别与73G1_V371A和UGT78D2及其突变体构成偶联体系，实现UDPG循环再生，并对SuSy的磷酸化突变进行了比较研究。最终搭建三酶共表达催化体系S31D‑F378S‑V371A，以槲皮素和蔗糖为底物催化合成Q3,4'G，转化合成Q3,4'G的量为4.4±0.03 g/L，产槲皮素‑3,4＇‑O‑二葡萄糖苷的产量较原始酶有显著的提高。