[发明专利]一种槲皮素-3,4`-O-二葡萄糖苷的合成方法及其所用到的酶

权利要求书

1.一种槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷的合成方法，其特征在于，以槲皮素为糖受体，蔗糖为糖供体，以pH为7.0-8.0的缓冲液为反应介质，在糖基转移酶UGT78D2突变体、糖基转移酶UGT73G1突变体与偶联的蔗糖合酶突变体催化作用下，反应合成槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述的一种槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷的合成方法，其特征在于，所述糖基转移酶UGT78D2突变体为在糖基转移酶UGT78D2的Phe378位点进行突变得到的突变体78D2_F378S，其序列如SEQ ID NO.1所示；所述糖基转移酶UGT73G1突变体为73G1_V371A；所述蔗糖合酶突变体是将蔗糖合酶McSuSy的Ser31位点突变为Asp得到Mc_S31D，其序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的一种槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷的合成方法，其特征在于，所述反应中，槲皮素与蔗糖浓度比为1:(3~40)，槲皮素浓度为3~50g/L，粗酶液浓度0.3~10mg/mL，反应温度35~45℃，反应时间为2~30h。

4.根据权利要求3所述的一种槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷的合成方法，其特征在于，所述粗酶液为将糖基转移酶UGT78D2突变体和糖基转移酶UGT73G1突变体与偶联的蔗糖合酶突变体构建于pETDuet-1中实现三酶共表达得到的粗酶液。

5.一种糖基转移酶UGT78D2突变体78D2_F378S，其序列如SEQ ID NO.1所示。

6.一种蔗糖合酶突变体Mc_S31D，序列如SEQ ID NO.3所示。

7.一种糖基转移酶UGT73G1突变体Pd5，其序列如SEQ ID NO.5所示。

8.权利要求5所述糖基转移酶UGT78D2突变体78D2_F378S以及权利要求6所述蔗糖合酶突变体Mc_S31D以及权利要求7所述糖基转移酶UGT73G1突变体Pd5在合成槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述三种酶可以单独或者偶联合成槲皮素-3,4'-O-二葡萄糖苷，所述偶联为构建双菌三酶体系S31D-F378SS31D-V371A或者三酶共表达体系S31D-F378S-V371A催化槲皮素的反应。