[发明专利]一种电转染永生化猪成纤维细胞的方法在审
| 申请号： | 202210263835.0 | 申请日： | 2022-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN114574522A | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 庄乐南;赵语婷;贺津;张元;蒋思博 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/65;C12N15/54;C12N5/10;C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京挺立专利事务所(普通合伙) 11265 | 代理人： | 余莹 |
| 地址： | 310030 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种电转染永生化猪成纤维细胞的方法，包括以下步骤：(1)将pCAG‑floxP‑neo‑pH11载体通过单酶切得到线性载体，而后通过引物退火延伸得到hTERT片段，克隆到所述线性载体上；(2)将所述线性载体转化至感受态，进行菌落培养、PCR鉴定；(3)PCR鉴定正确的质粒进行测序鉴定，序列正确的hTERT重组质粒进行扩大培养，然后通过质粒纯化试剂盒纯化，从而构建永生化载体pCAG‑H11‑hTERT；(4)将pCAG‑H11‑hTERT及px459‑H11‑V2电转染至猪原代成纤维细胞；(5)用含有嘌呤培养基对细胞进行筛选，得到永生化成功细胞。本发明效率高、适应性强，永生化特性不易消失，适用于大多数难转染的细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转染 永生 化猪成 纤维 细胞 方法 | ||
【主权项】：
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