[发明专利]一种泛酸合成酶突变体的高通量快速筛选方法在审
| 申请号： | 202011400326.5 | 申请日： | 2020-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN112662732A | 公开（公告）日： | 2021-04-16 |
| 发明（设计）人： | 柳志强;钟娜;张博;郑垦;郑裕国 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/25 | 分类号： | C12Q1/25;G01N21/64 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种泛酸合成酶突变体的高通量快速筛选方法。本发明以谷氨酸棒杆菌的泛酸合成酶为靶蛋白，利用饱和突变PCR技术对泛酸合成酶基因进行定向进化，突变基因重组于表达载体pET‑28a(+)中，并导入大肠杆菌BL21(DE3)构建突变体文库。取β‑丙氨酸及衍生化试剂于酶标板孔中，随即置于酶标仪中检测在激发波长355nm，发射波长445nm条件下的荧光值随时间的变化，曲线中最大值关联β‑丙氨酸的浓度，得到β‑丙氨酸标准曲线。通过计算得到反应液中β‑丙氨酸的浓度，以β‑丙氨酸浓度的高低来筛选泛酸合成酶突变体，使有效性状的突变株得以快速筛选出来。将缩合反应液、泛酸合成酶突变体全细胞反应液，充分混匀，反应结束后，离心除去细胞沉淀，取上清液和衍生化试剂反应，随即置于酶标仪中检测荧光值随时间的变化，本发明不受反应液中的杂质干扰，灵敏度和准确性高，重复性好，操作简便，便于推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 泛酸 合成 突变体 通量 快速 筛选 方法 | ||
【主权项】：
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