[发明专利]CRISPR/Cas9系统及其在构建抗肌萎缩蛋白基因缺陷的猪源重组细胞中的应用

摘要

本发明公开了一种CRISPR/Cas9系统及其在构建抗肌萎缩蛋白基因缺陷的猪源重组细胞中的应用。本发明提供了sgRNA组合，由sgRNADMD‑Ug3(靶序列结合区如SEQ ID NO：8中第1‑20位核苷酸所示)和sgRNADMD‑Dg3(靶序列结合区如SEQ ID NO：11中第1‑20位核苷酸所示)组成。本发明提供了试剂盒，由转录得到sgRNADMD‑Ug3的质粒pKG‑U6gRNA(DMD‑Ug3)、转录得到sgRNADMD‑Dg3的质粒pKG‑U6gRNA(DMD‑Dg3)和质粒pKG‑GE3组成。所述sgRNA组合或所述试剂盒可用于制备重组细胞或制备杜氏肌营养不良症动物模型。所述重组细胞为抗肌萎缩蛋白基因缺陷的细胞，可用于体细胞克隆制备动物疾病模型。本发明为杜氏肌营养不良症猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于杜氏肌营养不良症药物的研发具有重大应用价值。