[发明专利]一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法在审
| 申请号： | 201911166140.5 | 申请日： | 2019-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN110777117A | 公开（公告）日： | 2020-02-11 |
| 发明（设计）人： | 吕杨帆;曹亚;常献 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 50244 重庆项乾光宇专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 侯玉花 |
| 地址： | 400037 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法，包括以下操作步骤：将骨肉瘤干细胞放入至选定的培养基内；对培养收获的骨肉瘤干细胞及培养基进行离心；对获得的骨肉瘤干细胞培养基上清进行低温搅拌，并放入至试管内进行沉淀，沉淀结束后对沉淀产生的上清液进行收集；对收集到的上清液使用细胞滤膜进行过滤，并获得过滤后的滤固体；用磷酸盐缓冲液将所述滤固体进行重悬；将获得的重悬液放入至超速离心机内进行低温超速离心，并获得离心液；对离心液进行沉淀，此时所获得的沉淀体即为骨肉瘤干细胞外泌体。本发明在运用的过程中，能提高骨肉瘤干细胞外泌体的提取效率，且确保了提取后的外泌体的质量，有利于进行推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 骨肉瘤 干细胞 沉淀 放入 培养基 离心液 上清液 过滤 干细胞培养基 磷酸盐缓冲液 超速离心机 超速离心 沉淀产生 低温搅拌 提取分离 提取效率 细胞滤膜 重悬液 试管 重悬 收获 | ||
【主权项】：
1.一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：/nS1：获取骨肉瘤干细胞，将骨肉瘤干细胞放入至选定的培养基内，培养24-48小时后进行收获；/nS2：对培养收获的骨肉瘤干细胞及培养基进行离心，获得骨肉瘤干细胞培养基上清；/nS3：对步骤S2获得的骨肉瘤干细胞培养基上清进行20-30分钟的低温搅拌，并进一步放入至试管内进行沉淀，沉淀结束后对沉淀产生的上清液进行收集；/nS4：对步骤S3收集到的上清液使用规格为0.20um的细胞滤膜进行过滤，并获得过滤后的滤固体；/nS5：用磷酸盐缓冲液将所述滤固体进行重悬，得到重悬液；/nS6：将步骤S5获得的重悬液放入至超速离心机内进行低温超速离心，并获得离心液；/nS7：对步骤S6的离心液进行沉淀，并在沉淀后吸除上清液并保留沉淀体，此时所获得的沉淀体即为骨肉瘤干细胞外泌体。/n
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