[发明专利]一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法

说明书

本发明公开了一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法，包括以下操作步骤：将骨肉瘤干细胞放入至选定的培养基内；对培养收获的骨肉瘤干细胞及培养基进行离心；对获得的骨肉瘤干细胞培养基上清进行低温搅拌，并放入至试管内进行沉淀，沉淀结束后对沉淀产生的上清液进行收集；对收集到的上清液使用细胞滤膜进行过滤，并获得过滤后的滤固体；用磷酸盐缓冲液将所述滤固体进行重悬；将获得的重悬液放入至超速离心机内进行低温超速离心，并获得离心液；对离心液进行沉淀，此时所获得的沉淀体即为骨肉瘤干细胞外泌体。本发明在运用的过程中，能提高骨肉瘤干细胞外泌体的提取效率，且确保了提取后的外泌体的质量，有利于进行推广应用。

技术领域

本发明涉及骨肉瘤干细胞技术领域，尤其涉及一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法。

背景技术

骨肉瘤干细胞是骨肉瘤启动、发展、转移、复发的根源，且越来越被人关注，已成为肿瘤发生、发展机制研究中的热点，在对骨肉瘤干细胞进行研究的过程中，涉及到骨肉瘤干细胞外泌体的提取，传统用于常规细胞提取外泌体的方法在运用至骨肉瘤干细胞外泌体的提取过程中时，存在着提取效率较低，提取效果较差，且存在提取步骤繁琐、限制条件较多的缺点。为此，我们提出了一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法，包括以下操作步骤：

S1：获取骨肉瘤干细胞，将骨肉瘤干细胞放入至选定的培养基内，培养24-48小时后进行收获；

S2：对培养收获的骨肉瘤干细胞及培养基进行离心，获得骨肉瘤干细胞培养基上清；

S3：对步骤S2获得的骨肉瘤干细胞培养基上清进行20-30分钟的低温搅拌，并进一步放入至试管内进行沉淀，沉淀结束后对沉淀产生的上清液进行收集；

S4：对步骤S3收集到的上清液使用规格为0.20um的细胞滤膜进行过滤，并获得过滤后的滤固体；

S5：用磷酸盐缓冲液将所述滤固体进行重悬，得到重悬液；

S6：将步骤S5获得的重悬液放入至超速离心机内进行低温超速离心，并获得离心液；

S7：对步骤S6的离心液进行沉淀，并在沉淀后吸除上清液并保留沉淀体，此时所获得的沉淀体即为骨肉瘤干细胞外泌体。

优选的，步骤S3在进行的过程中，温度控制在2-4摄氏度，搅拌的速度控制在100-200r/min。

优选的，在步骤S5进行的过程中，磷酸盐缓冲液的PH值为7-8。

优选的，在步骤S6进行的过程中，低温为2-3摄氏度，离心过程中的离心力为1200-1500xg，离心时间持续50-60分钟。

优选的，针对步骤S7获得的骨肉瘤干细胞外泌体，使其放置在-70摄氏度的冰箱内进行存储。

本发明提出的一种骨肉瘤干细胞外泌体提取分离的方法，有益效果在于：本方案在进行的过程中，步骤简易且便于进行操作，通过对骨肉瘤干细胞进行培养再进行外泌体的提取，进而提高了骨肉瘤干细胞外泌体的提取效率，且确保了提取后的外泌体的质量，因此本方法有利于进行推广应用。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1