[发明专利]一种沙门氏菌的监测方法在审
| 申请号： | 201911076136.X | 申请日： | 2019-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN110643691A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 马永华;李仙春;李梅;滕玉箫;孙嘉;雷觐雯 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/10 |
| 代理公司： | 11578 北京集智东方知识产权代理有限公司 | 代理人： | 孙文彬 |
| 地址： | 730070 甘肃省*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种沙门氏菌的监测方法，包括以下步骤，取适量的待检测的样品与BPW液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液，上清液置于无菌试管中，在恒温箱内36℃下培养增菌8～10h，将BPW液培养物接种到沙门氏菌的选择性增菌液SC中，增菌培养液一环接种于SS培养基上，选取SS培养基上的中等大小、中心黑色的圆形菌落进行纯培养，将纯培养的菌落同时进行双重PCR和生化鉴定；本发明缩短沙门氏菌检测时间，加快了检测进程，降低了操作的复杂程度，降低劳动强度，降低检测成本，实现了目标物的快速，简单，灵敏的检测，通过同时进行PCR和生化双重鉴定，提高准确度。 | ||
| 搜索关键词： | 沙门氏菌 检测 培养基 纯培养 接种 沙门氏菌检测 选择性增菌 增菌培养液 裂解细胞 取上清液 生化鉴定 生理盐水 双重鉴定 无菌试管 圆形菌落 准确度 研磨 煮沸 双重PCR 不溶物 混合液 目标物 培养物 上清液 悬浮液 菌落 增菌 灵敏 生化 监测 进程 | ||
【主权项】：
1.一种沙门氏菌的监测方法，其特征在于：包括以下步骤：/nS1，取适量的待检测的固态/液态样品与BPW液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液；/nS2，将步骤1中离心后取得的上清液置于无菌试管中，在恒温箱内36℃下培养增菌8～10h，将BPW液培养物接种到沙门氏菌的选择性增菌液SC中，在恒温箱内42℃下选择性增菌16～22h；/nS3，取步骤2中增菌培养液一环接种于SS培养基上，37℃下培养18～24h；/nS4，选取SS培养基上的中等大小、中心黑色的圆形菌落进行纯培养，将纯培养的菌落同时进行双重PCR和生化鉴定；/nS5，PCR鉴定：煮沸法提取菌株基因组DNA，反应体系为invA和tuf基因的上、下游引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA和灭菌去离子水的混合液，将菌株基因组DNA置于混合液中，在92℃下进行预变性5min，如此循环28～32次，53℃下退火32s，70℃下延伸42s，将预变性后的产物加入1％琼脂糖凝胶电泳中，在120V电压下电泳28～30min，以DNA标志物DL2000为参照，用凝胶成像仪成像观察结果；/nS6，生化鉴定：将步骤4中选取的菌落加于0.85％灭菌生理盐水中，制成0.5麦氏菌悬液，将菌悬液接种于生化鉴定试剂管中，向试剂管中加入反应液，于37℃下培养20～24h，观察结果。/n
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