[发明专利]一种沙门氏菌的监测方法

说明书

本发明公开了一种沙门氏菌的监测方法，包括以下步骤，取适量的待检测的样品与BPW液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液，上清液置于无菌试管中，在恒温箱内36℃下培养增菌8～10h，将BPW液培养物接种到沙门氏菌的选择性增菌液SC中，增菌培养液一环接种于SS培养基上，选取SS培养基上的中等大小、中心黑色的圆形菌落进行纯培养，将纯培养的菌落同时进行双重PCR和生化鉴定；本发明缩短沙门氏菌检测时间，加快了检测进程，降低了操作的复杂程度，降低劳动强度，降低检测成本，实现了目标物的快速，简单，灵敏的检测，通过同时进行PCR和生化双重鉴定，提高准确度。

技术领域

本发明涉及沙门氏菌监测技术领域，具体为一种沙门氏菌的监测方法。

背景技术

沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌，是革兰氏阴性、细胞内寄生的一种肠道菌。该菌广泛存在于自然界中，不但能引起家畜家禽及其他动物发生急性、慢性或隐性感染，而且还能通过污染食物导致人的食物中毒，对人类造成很大威胁。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。沙门氏菌每年会导致约四万美国人病倒，约600人死亡。在我国沙门氏菌是食物中毒中最常见的致病菌，占食物中毒的第一位。沙门氏菌病的临床症状主要包括头痛、腹痛、发热等，死亡率在1％，对人危害很大。

准确及时的检测手段是预防和控制病原微生物传播的关键。目前沙门氏菌的检测多采用传统的微生物培养的方法，主要包括前增菌、选择性增菌、平板分离、生化试验和血清学鉴定等步骤，涉及的实验较多、操作较烦琐、检测周期较长(一般需要4～7d)、准备和收尾工作繁重，已无法满足现阶段食品中致病菌快速检测的现实需要。

基于此，本发明设计了一种沙门氏菌的监测方法，以解决上述提到的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种沙门氏菌的监测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种沙门氏菌的监测方法，包括以下步骤：

S1，取适量的待检测的固态/液态样品与BPW液混合，经研磨/搅拌得到悬浮液/混合液，离心除去不溶物，然后用生理盐水洗菌后煮沸裂解细胞，离心取上清液；

S2，将步骤1中离心后取得的上清液置于无菌试管中，在恒温箱内36℃下培养增菌8～10h，将BPW液培养物接种到沙门氏菌的选择性增菌液SC中，在恒温箱内42℃下选择性增菌16～22h；

S3，取步骤2中增菌培养液一环接种于SS培养基上，37℃下培养18～24h；

S4，选取SS培养基上的中等大小、中心黑色的圆形菌落进行纯培养，将纯培养的菌落同时进行双重PCR和生化鉴定；

S5，PCR鉴定：煮沸法提取菌株基因组DNA，反应体系为invA和tuf基因的上、下游引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA和灭菌去离子水的混合液，将菌株基因组DNA置于混合液中，在92℃下进行预变性5min，如此循环28～32次，53℃下退火32s，70℃下延伸42s，将预变性后的产物加入1％琼脂糖凝胶电泳中，在120V电压下电泳28～30min，以DNA标志物DL2000为参照，用凝胶成像仪成像观察结果；

S6，生化鉴定：将步骤4中选取的菌落加于0.85％灭菌生理盐水中，制成0.5麦氏菌悬液，将菌悬液接种于生化鉴定试剂管中，向试剂管中加入反应液，于37℃下培养20～24h，观察结果。

优选的，所述BPW培养液为蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，无水磷酸氢二钠3.57g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，pH为7～7.4。

优选的，所述选择性增菌液SC为蛋白胨5g/L、乳糖4g/L、亚硒酸氢钠4g/L、磷酸氢二钠10g/L、L-胱氨酸0.01g/L，pH 6.9～7.2。