[发明专利]一种利用滋养细胞高效扩增NK细胞的制备方法有效
| 申请号： | 201910979773.1 | 申请日： | 2019-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN110684730B | 公开（公告）日： | 2021-03-19 |
| 发明（设计）人： | 郭红;陈佃雷;汤文玲;刘蕾 | 申请（专利权）人： | 山东德升生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 于晓晓 |
| 地址： | 250000 山东省济南*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程和细胞生物学领域，具体涉及一种利用滋养细胞高效扩增NK细胞的制备方法，包括1)pHR‑mbIL‑21、pHR‑4‑1BBL和pHR‑MICA质粒载体构建，2)分别用pHR‑mbIL‑21、pHR‑4‑1BBL和pHR‑MICA质粒载体制备重组慢病毒，3)K562‑mbIL‑21‑4‑1BBL‑MICA滋养细胞的制备，4)PBMC细胞的提取，5)NK细胞的体外扩增；本发明提供一种NK细胞的制备方法，采用单独构建表达mbIL‑21、4‑1BBL、MICA三种分子的质粒载体，重组慢病毒感染K562的方法，制备NK细胞，制备方法解决现有技术的缺点，利用IL‑21、4‑1BBL、MICA分子同时表达的K562细胞然后作为滋养细胞用于扩增培养NK细胞，其NK细胞扩增倍数高达890倍，制得NK细胞的纯度到达92.2％，并且不同的PBMC细胞间的扩增倍数重复性好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 滋养 细胞 高效 扩增 nk 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用滋养细胞高效扩增NK细胞的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：/n1)pHR-mbIL-21、pHR-4-1BBL和pHR-MICA质粒载体构建；/n2)分别用pHR-mbIL-21、pHR-4-1BBL和pHR-MICA质粒载体制备重组慢病毒；/n3)K562-mbIL-21-4-1BBL-MICA滋养细胞的制备；/n4)PBMC细胞的提取；/n5)NK细胞的体外扩增。/n
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