[发明专利]一种快速合成全基因序列的方法及其应用在审
| 申请号： | 201910960291.1 | 申请日： | 2019-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN110551802A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 刘芳 | 申请（专利权）人： | 周口师范学院 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 61223 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 崔瑞迎 |
| 地址： | 466000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，公布了一种用短DNA引物拼接目标基因全长序列的方法及其应用。本发明建立的拼接技术分为两个步骤：第一，短DNA引物通过互补区相互退火，在DNA聚合酶的作用下补齐gaps，产生带有切刻位点的双链模板；第二，通过基因两端的上下游引物，以第一步反应的产物为模板，扩增全长序列。本发明还提供了一种用python语言实现的计算机算法，用以自动设计用于合成基因全长序列的短DNA引物。利用本技术在构建多重突变体基因时，仅需找到对应位点所在的DNA引物，进行碱基替换后直接用新合成的引物替换原来的引物，经过简单的PCR扩增，即可得到无模板残留干扰的突变体基因。 | ||
| 搜索关键词： | 引物 全长序列 短DNA 位点 退火 基因工程技术 计算机算法 突变体基因 多重突变 合成基因 碱基替换 目标基因 双链模板 一步反应 引物拼接 自动设计 互补区 新合成 基因 补齐 构建 扩增 拼接 替换 残留 应用 | ||
【主权项】：
1.一种快速合成基因全长序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1，第一步PCR，将相同浓度的若干条短DNA引物，加入到高保真DNA聚合酶反应混合液中，通过PCR反应程序，得PCR产物；/nS2，第二步PCR，以第一步的PCR产物为模板，在高保真DNA聚合酶反应混合液中，加入全基因序列的上下游引物，通过PCR反应程序，合成全基因序列；/nS3，将第二步PCR的产物纯化回收，然后把回收产物与线性载体重组，转化大肠杆菌感受态细胞，提取重组质粒通过DNA测序确认合成基因的准确性。/n
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