[发明专利]一种基于定量DNA技术检测食品中维生素B12的方法有效
| 申请号： | 201910778745.3 | 申请日： | 2019-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN110452968B | 公开（公告）日： | 2023-07-21 |
| 发明（设计）人： | 祖新 | 申请（专利权）人： | 甘肃省食品检验研究院（甘肃省动物源性食品基因检测中心） |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 兰州智和专利代理事务所(普通合伙) 62201 | 代理人： | 刘树涛 |
| 地址： | 730000 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于定量DNA技术检测食品中维生素B12的方法；该方法通过制备莱士曼氏乳酸杆菌标准菌悬液、微生物对食品中维生素B12的增值转换、莱士曼氏乳酸杆菌灭活固定、总DNA的提取与鉴定、DNA定量检测和计算检测结果六个步骤，实现维生素B12的含量检测，该方法可操作性强，反映的是基质中总的维生素B12含量，优于只能针对某种特定结构维生素B12的仪器分析方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 定量 dna 技术 检测 食品 维生素 b12 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于定量DNA技术检测食品中维生素B12的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）、制备莱士曼氏乳酸杆菌标准菌悬液；采用乳酸杆菌琼脂培养基一次性转种活化莱士曼氏乳酸杆菌，37 ℃厌氧培养，取24小时菌龄的多个单一菌落,直接制备0.50麦氏单位浊度的莱士曼氏乳酸杆菌菌悬液；/n（2）、微生物对食品中维生素B12的增值转换：将食品中维生素B12转化为特定营养因子添加于测定用培养基 ，取莱士曼氏乳酸杆菌菌悬液添加于灭菌后的试样溶液试管中，然后放入恒温培养箱内进行定时增值；/n（3）、莱士曼氏乳酸杆菌灭活固定：对培养后的试样溶液进行灭活操作；/n（4）、总DNA的提取与鉴定：将试样溶液试管中的菌液于灭菌离心管中12000 r/min 离心1 min，弃上清，采用细菌DNA提取试剂提取待测液的总DNA，并经超微量分光光度计检测浓度和纯度；/n（5）、DNA定量检测：采用微滴式数字PCR进行结果分析，获得DNA拷贝数（y）；/n（6）、计算检测结果；样品维生素B12含量（x）与DNA拷贝数（y）成线性关系，根据标准量维生素B12和对应DNA拷贝数获得的回归方程及线性相关系数计算出维生素B12含量。/n
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