[发明专利]一种基于环金属Ir(III)配合物的凝血酶光电化学传感器的制备方法

摘要

本发明公开了一种基于环金属Ir(III)配合物的凝血酶光电化学传感器的制备方法。该传感器以环金属配铱配合物作为光电活性材料，通过Au‑S键将其组装在纳米金上制备了纳米探针。凝血酶识别体系采用适体与凝血酶的结合产生临近效应而引发的DNA置换，当存在凝血酶时，含有凝血酶适体片段的单链DNA S1和S2的局部浓度增加，诱导预先杂交的S1/T与S2发生链置换反应使单链T被释放。释放的T与工作电极上固定的捕获发夹H1杂交，引发催化发夹自组装反应，在工作电极表面形成得到大量的H1/H2杂交链，其末端暴露的单链DNA用于捕获信号纳米金探针，实现光电流信号的响应，具有高的灵敏度及良好的选择性。

主权项

1.一种基于环金属Ir(III)配合物的凝血酶光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)环金属Ir(III)配合物纳米金探针的制备，其特征在于采用环金属Ir(III)配合物作为光电信号活性材料，其化学结构如下式所示：将环金属Ir(III)配合物和信号DNA(Cp‑DNA)按比例(摩尔比10:1)加入到含有0.02％十二烷基硫酸钠溶液的纳米金溶液中，通过Au‑S键自组装为纳米金探针。Cp‑DNA序列为：5’‑AAAGACAAGTCGCTATG‑3’(5’端修饰有‑SH)。(2)凝血酶的识别，其特征在于采用凝血酶与双适体的结合产生临近效应引发链置换反应，此识别过程借助于含有凝血酶适体的单链DNA S1和S2以及与S1部分杂交单链T进行。当凝血酶不存在时，杂交的S1/T与S2不发生链置换反应，而当凝血酶存在时，凝血酶与适体的结合使S1和S2的局部浓度增加产生临近效应，诱导S1/T与S2发生链置换反应使单链DNA T被释放。S1序列为：GGTTGGTGTGGTTGGTTTTTTTTGCTAGGTCTCGCS2序列：GAGACCTAGCAATTTTTTAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTT序列为：ATAGATCCTCATAGCGAGACCTAGCAA(3)工作电极的制备，将ITO电极浸入3‑氨基丙基三乙氧基硅烷溶液中，在电极表面修饰氨基，然后将其浸泡在纳米金溶液中得到纳米金修饰的ITO电极，最后通过Au‑S键将发夹DNA H1固定在电极上得到工作电极。H1序列为：AAAAAACTAGGTCTCGCTATGAGGATCTACCATCGTGTACTAGATCCTCATAGCGACTTGTCA(5’端修饰有‑SH)。(4)催化发夹自组装及传感器的制备，将步骤(2)中凝血酶识别后的溶液及发夹DNA H2溶液滴加到步骤(3)制备的工作电极上，经过催化发夹自组装反应后与步骤(1)制备的金纳米探针的Cp‑DNA杂交，将探针捕获在工作电极上，制得光电化学传感器。H2序列为：AGGATCTAGTACACGATGGTAGATCCTCATAGCGACCATCGTGTAC。(5)光电信号检测：将步骤(4)制得的传感器浸入0.01M PBS(pH＝5.5)的缓冲溶液中，以Pt丝为对电极，Ag/AgCl为参比电极，采用460nm可见光进行激发，每20s开关光源一次，记录光电流响应，实现对不同浓度凝血酶的检测。